头痛宁颗粒质量标准研究

毛志刚，冯景辉

（烟台大洋制药有限公司，山东烟台265500）

头痛宁颗粒质量标准研究

毛志刚，冯景辉

（烟台大洋制药有限公司，山东烟台265500）

目的建立头痛宁颗粒质量标准。方法采用薄层色谱法对制剂中的天麻、当归、防风进行薄层鉴别；采用高效液相色谱法对制剂中的天麻素进行含量测定。结果在薄层色谱图中可检出天麻、当归、防风；天麻素在0.113 6～2.272μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r＝0.999 6），平均回收率为98.9%，RSD为1.48%。结论所建立的方法可靠、准确、专属性强，可有效控制头痛宁颗粒的质量。

质量标准；头痛宁颗粒；薄层色谱法；高效液相色谱法；天麻素

头痛宁颗粒是烟台大洋制药有限公司自行研制品种，由头痛宁胶囊（收载于国家药品监督管理局《国家中成药标准汇编》中成药地方标准上升国家标准部分经络肢体、脑系分册［1］）改变剂型而来，由土茯苓、天麻、制何首乌、当归、防风、全蝎等六味中药组成，具有熄风涤痰，逐瘀止痛的功效。用于偏头痛，紧张性头痛属痰淤阻络证，证见：痛势甚剧，或攻冲作痛，或痛如锥刺，或连及目齿，或目眩畏光，胸闷脘胀，恶心呕吐，急躁易怒，反复发作。本试验对原标准进行了提高性研究，对方中天麻、当归、防风进行薄层色谱鉴别，并建立了头痛宁颗粒中天麻素的含量测定方法。

1 仪器与试药

岛津LC－10ATvp液相色谱仪；硅胶G薄层板（烟台市化学工业研究所）；天麻素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110807－200205，供含量测定用）、防风对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：120947－200405，供鉴别用）、当归对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：120927－200411，供鉴别用）；头痛宁颗粒自制（批号：120802、120803、120804），每袋装3 g；乙腈为色谱纯；其他试剂为分析纯。

2 头痛宁颗粒的薄层色谱鉴别

2.1 天麻的薄层鉴别 取本品4 g，研细，加乙醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取天麻素对照品，加甲醇制成每1 mL含1.0 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法［2］［《中国药典》2010年版（一部）附录ⅥB］试验，吸取供试品溶液5μL，对照品溶液4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－甲醇－水（9∶1∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的淡棕色斑点。缺天麻的阴性样品无干扰（见图1）。

2.2 防风的薄层鉴别 取本品内容物4 g，研细，加乙醇30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液浓缩至适量，加于中性氧化铝柱（内径1.5 cm，长5 cm）上，用丙酮20 mL洗脱，收集洗脱液，挥干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取防风对照药材1 g，加氯仿20 mL，浓氨溶液1 mL，回流提取1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法［《中国药典》2010年版（一部）附录ⅥB］试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯（7∶3）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显4个相同颜色的荧光斑点。防风的阴性样品无干扰（见图2）。

2.3 当归的薄层鉴别 取本品4 g，研细，加甲醇20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次15mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法［《中国药典》2010年版（一部）附录ⅥB］试验，吸取上述两种溶液各7μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯（9∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显3个相同颜色的荧光斑点。缺当归的阴性样品无干扰（见图3）

图1 天麻薄层色谱图

图2 防风薄层色谱图

3 天麻素的含量测定

3.1 色谱条件 色谱柱：Sinochrom ODS－BPC18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），乙腈－0.05%磷酸溶液（3∶97）为流动相，流速1.0 mL·min－1，检测波长为220 nm，进样量：20μL，理论板数按天麻素峰计算应不低于3 000。

图3 当归薄层色谱图

3.2 对照品溶液的制备 取天麻素对照品，加甲醇制成每1 mL含30μg的溶液，即得。

3.3 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物20 g，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流2 h，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液10 mL，浓缩至近干，残渣加乙腈－水（3∶97）混合溶液使溶解，转移至10 mL量瓶中，并用乙腈－水（3∶97）混合溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.4 干扰试验 按处方取不含天麻的阴性样品，同法制备阴性样品溶液。精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。阴性样品不干扰测定，见图4。

3.5 线性关系考察 精密称取天麻素对照品适量，加乙腈－0.05%磷酸溶液（3∶97）使完全溶解，配制成0.113 6 mg·mL－1的对照品储备液。精密移取储备液加乙腈－0.05%磷酸溶液（3∶97）稀释，制成0.113 6、0.056 8、0.034 08、0.017 04、0.005 68 mg ·mL－1的对照品溶液。精密吸取各浓度的对照品溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以进样量为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y）绘制标准曲线，经线性回归，得回归方程：Y＝1 917.0X＋274.95，r＝0.999 6，表明天麻素进样量在0.113 6～2.272μg之间与峰面积呈良好的线性关系。

3.6 精密度试验 取浓度为0.028 4 mg·mL－1的对照品溶液20μL，注入高效液相色谱仪，连续进样6次，结果对照品峰面积的RSD为0.24%，表明仪器精密度良好。

3.7 稳定性试验 取供试品溶液，分别于0、2、4、6、8 h精密吸取20μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。RSD＝1.1%（n＝5），表明方法稳定性良好。

图4 HPLC色谱图A.天麻素对照品溶液；B.供试品溶液；C.阴性样品溶液

3.8 重复性试验 取同批号（120802）样品6份，“3.3”项下方法制备供试品溶液，进样测定，平均含量为3.80 mg／袋，RSD为0.84%（n＝6）。

3.9 加样回收率试验 取已知含量的同批号（120802）样品适量，共5份约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入天麻素对照品0.75 mg（精密称取天麻素对照品15 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品母液，分别精密量取0.5 mL对照品母液，加入5份供试品中），照“3.3”项下方法制备供试液，进样20μL，测定天麻素的含量，计算回收率，结果平均回收率98.9%，RSD（%）为1.48，结果显示，所建立方法加样回收率良好。

3.10 样品含量测定 取头痛宁颗粒，照“3.3”项下方法制备供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液和供试品供试液各20μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，按外标（峰面积）法计算样品中的天麻素含量，结果见表1。

表1 样品测定结果（n＝3）

4 讨论

4.1 测定波长的选择 参考文献［3～5］中天麻素的检测波长，用紫外分光光度计对天麻素对照品甲醇溶液进行扫描，结果天麻素在220 nm处有最大吸收，故采用220 nm作为测定波长。

4.2 流动相的选择 《中国药典》2010年版（一部）天麻含量测定流动相为乙腈－0.05%磷酸溶液（3∶97），经试验，该流动相适合本品的测定。

采用TLC法对防风、当归、天麻进行了薄层色谱研究，同时采用HPLC法测定本品中的天麻素含量，方法简便，专属性强，阴性对照未见干扰，可用于控制头痛宁颗粒的质量，同时也提高了该制剂的质量标准。

［1］国家食品药品监督管理局.国家中成药标准汇编（中成药地方标准上升国家标准部分经络肢体、脑系分册）［S］.北京：人民卫生出版社，2005.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010.

［3］谢敏，吴春敏，高佳玲.HPLC法测定风痛定片中天麻素的含量［J］.海峡药学，2000，12（3）：47－48.

［4］张震，张长林.正交试验优选天麻的提取工艺［J］.齐鲁药事，2011，30（6）：311－313.

［5］张永林，鲍燕燕，凌云，等.HPLC法测定头痛安冲剂中天麻素的含量［J］.中草药，2001，32（7）：612－613.

Study on quality standard for Toutongning Granules

MAO Zhi-gang，FENG Jing-hui
（Yantai Dayang Pharmaceutical Co.，Ltd.，Yantai265500，China）

ObjectiveTo establish the quality standard for Toutongning Granules.M ethodsThe Gastrodia elata，Angelica sinensis（Oliv）Diels，Saposhnikovia divaricata（Turcz）Schischk.were identified by TLC；The content of Gastrodin was dentermined by HPLC.ResultsThe Gastrodia elata，Angelica sinensis（Oliv），Saposhnikovia divaricata（Turcz）were detected by TLC.The linear range of Gastrodin was 0.113 6～2.272μg（r＝0.999 6），and the average recovery was 98.9%with RSD 1.48%.Conclusions The method was reliable，specifie and accurate，and can effectively control the quality of Toutongning Granules.

Quality standard；Toutongning Granules；TLC；HPLC；Gastrodin

R927.1

A

2095－5375（2014）12－0702－003

毛志刚，男，研究方向：药品质量管理，E－mail：maozhigang370285＠163.com

冯景辉，男，研究方向：中药制剂，Tel：13054565470，E－mail：416286567＠qq.com