HPLC法测定痛经停膏中丹酚酸B的含量

张新军，梁瑞雪，侯文静，贾元印

（山东省中医药研究院，山东济南250014）

HPLC法测定痛经停膏中丹酚酸B的含量

张新军，梁瑞雪，侯文静，贾元印

（山东省中医药研究院，山东济南250014）

目的建立痛经停膏中丹酚酸B的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5μm），流动相为甲醇－乙腈－甲酸－水（30∶10∶1∶59），流速为1.0 mL·min－1，测定波长为286 nm。结果丹酚酸B在0.525～2.625μg范围内与色谱峰峰面积呈良好线性关系，相关系数为0.999 9，平均加样回收率为98.2%，RSD为0.81%。结论本方法简便可靠，准确灵敏，专属性强，能有效的控制痛经停膏的内在质量。

痛经停膏；丹酚酸B；含量测定；高效液相色谱法

痛经停膏处方由延胡索、川芎、香附、丹参等多味药物组成，采用现代科学方法提取各药物的有效组分，并加工制成临床用膏剂，临床观察表明，本膏剂外用贴敷神阙穴治疗痛经具有较好的疗效。丹参是本药物的主要药味之一，具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈之功效，用于胸痹心痛，脘腹胁痛，瘕瘕积聚，热痹疼痛，心烦不眠，月经不调，痛经经闭，疮疡肿痛［1］。丹酚酸B是丹参中的水溶性有效成分之一，对心、脑、肝、肾等多个器官具有保护作用［2］。为了有效的控制制剂的质量，参考相关文献［3～7］，采用HPLC法对制剂中的丹酚酸B进行了含量测定方法的研究，通过方法学的系统考察和3批样品的测定，建立了痛经停膏中丹酚酸 B的 HPLC含量测定方法，现报告如下。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（戴安Ultimate 3000），色谱柱为Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5μm），超纯水（Millipore公司纯水器），所用甲醇、乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯，丹酚酸B对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111562－200504），痛经停膏由本课题组研制。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备 取本品药膏适量，精密称定，加一定量的硅藻土，拌匀，于60～65℃干燥，研细，取约1 g（相当于0.5 g丹参药材），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.2 对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定为1.05 mg，置5 mL量瓶中，加甲醇使其溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液，其浓度为210μg·mL－1；精密吸取该储备液2.5mL，置5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀作为对照品溶液，其浓度为105μg·mL－1。

2.3 阴性对照溶液的制备 按照样品的制备工艺及供试品溶液制备方法制得缺丹参阴性对照溶液。

2.4 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－乙腈－甲酸－水（30∶10∶1∶59）为流动相；检测波长为286 nm。柱温：30℃。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2 000。

2.5 方法学考察

2.5.1 空白干扰试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与缺丹参阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。结果表明，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，有相同的色谱峰，而缺丹参阴性对照色谱中，在与对照品色谱相应位置上，则未见明显色谱峰出现，表明在该HPLC测定条件下，丹酚酸B的测定无干扰，见图1。

2.5.2 线性关系考察 精密吸取相当于0.525、1.05、1.575、2.1、2.625μg的对照品溶液，注入高效液相色谱仪，测得峰面积积分值。以峰面积积分值为纵坐标，进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线并对数据进行线性回归，得回归方程：Y＝13.055X－0.009，r＝0.999 9。结果表明进样量在0.525μg～2.625μg范围内与峰面积线性关系良好。

2.5.3 精密度试验 精密吸取同份对照品溶液10 μL，连续进样5次，测定峰面积积分值。结果供试品5次测定的平均值为14.267±0.035，RSD为0.22%，表明精密度良好。

2.5.4 稳定性试验 精密吸取同份供试品溶液10 μL，每隔约2 h进样测定1次，共进样测定5次，其峰面积积分值在测定时间8 h内基本不变，供试品5次测定平均值为13.345±0.316，RSD为2.37%，表明稳定性良好。

2.5.5 重现性试验 取同一批样品6份，分别制成供试品溶液，并测定丹酚酸B含量，结果6次测定的平均含量为（4.935±0.105）mg·g－1，其RSD为2.13%，表明重现性良好。

2.5.6 回收率试验 取同一批样品，共取5份，每份约0.5 g，精密称定，加一定量的硅藻土，拌匀，于60～65℃干燥，分别加入3.465 mg（配成浓度为3.465 mg·mL－1的溶液，准确加入1.0 mL），按以上方法制备各供试品溶液并测定样品中的含量，计算回收率，结果5次试验丹酚酸B的平均回收率为98.2%，RSD为0.81%，见表1。

图1 HPLC色谱图A.对照品溶液；B.供试品溶液；C.缺丹参阴性对照溶液

表1 加样回收率试验结果

2.6 样品中丹酚酸B的含量测定 按“2.1”项下方法制备4批痛经停膏供试品溶液。分别精密吸取对照品与各供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定并计算各批样品中丹酚酸B的含量。结果见表2。

3 小结与讨论

3.1 丹参中既含有水溶性有效成分，又含有脂溶性有效成分，因此，对丹参采用高浓度乙醇提取，以充分提取其有效成分。

Determ ination of salvianolic acid B in Tongjingting Ointment by HPLC

ZHANG Xin-jun，LIANG Rui-xue，HOUWen-jing，JIA Yuan-yin
（Shandong Institute of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250014，China）

ObjectiveTo establish a method for the determination of salvianolic acid B in Tongjingting Ointment.M ethodsThe HPLC procedure was performed on the chromatographic column of Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5μm），themobile phasewas amixture ofmethanol－acetonitrile－formic acid－water（30∶10∶1∶59），the flow rate was1.0 mL·min－1and the detection wavelength was286 nm.ResultsSalvianolic acid B showed a good relationship with peak area at a range from 0.525μg to 2.625μg，and the correlation coefficientswere 0.999 9，the average recovery of scutellarin was 98.2%（RSD＝0.81%）.ConclusionThemethod was simple and reliable，accurate and sensitive and specific which can be used effectively for the quality control of Tongjingting Ointment.

Tongjingting Ointment；Salvianolic acid B；Determination；HPLC

R927.2

A

2095－5375（2014）12－0689－003

山东省中医药科技发展计划项目（No.2011－165）

张新军，男，助理研究员，研究方向：中药新药及中药质量标准研究，E－mail：xinjun_z＠126.com

侯文静，女，副主任护师，研究方向：临床护理研究，Tel：13553158463，E－mail：Xianzi1942＠163.com