HPLC法测定鼻炎糖浆中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量

冉亚东，原欢欢，官 柳

（太极集团重庆涪陵制药厂有限公司，重庆408000）

HPLC法测定鼻炎糖浆中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量

冉亚东，原欢欢，官 柳

（太极集团重庆涪陵制药厂有限公司，重庆408000）

目的建立高效液相色谱法测定鼻炎糖浆中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的测定方法。方法采用Agilent Zorbax SB－C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm），乙腈－0.2%磷酸溶液（含0.2%三乙胺）（2∶98）为流动相，流速：1.0 mL·min－1，检测波长206 nm，柱温：25℃。结果盐酸麻黄碱进样量在0.124～1.86μg范围内与峰面积呈良好线性（r＝0.999 9），平均回收率为99.99%，RSD＝1.24%（n＝6）；盐酸伪麻黄碱进样量在0.103 8～1.557μg范围内与峰面积呈良好线性（r＝0.999 9），平均回收率为99.33%，RSD＝1.93%（n＝6）。结论该方法准确、重复性好，可用于鼻炎糖浆中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的测定。

鼻炎糖浆；盐酸麻黄碱；盐酸伪麻黄碱；高效液相色谱法

鼻炎糖浆是由黄芩、麻黄等七味中药组方而成，具有清热解毒，消肿通窍的功效。临床用于急性鼻炎。方中麻黄具有利水消肿，发汗散寒之功效，所含盐酸伪麻黄碱能减轻过敏性鼻炎、鼻炎及鼻窦炎引起的鼻充血症状，现有标准［1］未对麻黄进行质量控制。为更好的控制产品质量，参照《中国药典》2010

年版麻黄标准，以盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱为含量测定指标，建立了以高效液相色谱法测定鼻炎糖浆中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent1200 series高效液相色谱仪（安捷伦公司）；Mettler Toledo 240电子分析天平（梅特勒托利多公司）；明澈－D24UV纯水系统（默克公司）。

1.2 试剂与试药 盐酸麻黄碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号：171241－201007，供含量测定用，含量99.7%）；盐酸伪麻黄碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号：171237－200807，供含量测定用，含量99.9%）；鼻炎糖浆（市售品，批号：1403010、1403011、1403012）；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent Zorbax SB－C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：乙腈－0.2%磷酸溶液（含0.2%三乙胺）（2∶98），柱温：25℃，检测波长：206 nm，流速：1.0 mL·min－1，进样量：10μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液制备 取盐酸麻黄碱对照品、盐酸伪麻黄碱对照品适量，精密称定，加10%甲醇制成每1 mL含50μg的溶液。

2.2.2 供试品溶液制备 取本品适量，混匀，取2.0 g，精密称定，置50 mL具塞锥形量瓶中，加10%氢氧化钠溶液10 mL，混匀，震荡10 min，加乙醚振摇提取4次（20、20、20、20 mL），合并乙醚液，加1%氢化化钠溶液（20 mL）洗涤，弃去洗液，乙醚液加入20 mL盐酸乙醇溶液（1→20），混匀，水浴蒸干，残渣加10%甲醇少量多次溶解并转移至10 mL量瓶中，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液制备 取本品阴性样品，按照“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制备。

2.3 专属性试验 阴性对照样品对供试品溶液中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱测定无干扰，供试品溶液中两主色谱峰对称性好，与其他峰基线分离（见图1）。

2.4 线性关系 取盐酸麻黄碱对照品和盐酸伪麻黄碱对照品适量，精密称定，加甲醇配制成每1 mL各含124、103.8μg的溶液，精密吸取对照品溶液1、3、5、7、10、15μL，注入色谱仪，记录色谱图。以进样量（μg）为横坐标X，相应面积为纵坐标Y，按照最小二乘法原理拟合，得回归方程：盐酸麻黄碱 Y＝2 202.2X－0.345 7，r＝0.999 9；盐酸伪麻黄碱Y＝2 113.7X－0.543 2，r＝0.999 9。结果表明：盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱分别在0.124～1.86μg和0.103 8～1.557μg范围内与峰面积呈良好线性。

2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10μL，按照“2.1”项下条件测定，连续进样6次，测定峰面积，结果盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰面积平均值分别为1 365.4和1 097.6，峰面积的RSD分别为0.52%和0.68%，表明精密度良好。

2.6 重复性试验 取样品（批号：1403010）适量，按照“2.2.2”项下制备方法制备供试品溶液，平行6份，再按照“2.1”项下条件测定样品中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量，盐酸麻黄碱平均含量为0.311 mg·g－1，RSD为1.25%；盐酸伪麻黄碱平均含量为0.104 mg·g－1，RSD为1.75%，表明重复性良好。

2.7 稳定性试验 精密量取同一供试品溶液，于0、2、4、8、12、16、20、24 h，分别测定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰面积，平均峰面积分别为1 543.1和 567.3，RSD分别为0.89%和1.35%，表明供试品在24 h时内稳定。

图1 对照品（A、B）、供试品（C）、阴性对照（D）色谱图

2.8 回收率试验 取已知含量样品（批号：1403010，盐酸麻黄碱含量0.311 mg·g－1，盐酸伪麻黄碱含量0.104 mg·g－1）适量，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中［已加入盐酸麻黄碱对照品溶液（124 μg·mL－1）2.5 mL，盐酸伪麻黄碱对照品溶液（103.8μg·mL－1）1.0 mL，用热氮气吹干，备用］，按照“2.2.2”项下制备方法制备样品，平行6份，按照“2.1”项下条件测定盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量，计算回收率。盐酸麻黄碱的平均回收率为99.99%，RSD为1.24%；盐酸伪麻黄碱的平均回收率为99.33%，RSD为1.93%。结果表明回收率良好，见表1。

2.9 样品测定 取样品3批（批号：1403010、1403011、1403012），按照“2.2.2”项下制备方法制备样品，按照“2.1”项下条件测定，计算盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量，结果3批样品中盐酸麻黄碱含量分别为0.311、0.339、0.298 mg·g－1；盐酸伪麻黄碱含量分别为0.104、0.108、0.097 mg·g－1。

3 讨论

3.1 供试液制备方法 有文献报道［2～4］采用氢氧化钠或氨水溶液碱化样品，乙醚或三氯甲烷萃取、最后加盐酸溶液成盐的方法制备样品；《中国药典》中小儿肺热咳喘口服液、小青龙合剂标准采用样品通过大孔吸附树脂D101柱，用醇液洗脱方法制备供试品；经试验，采用样品碱化、乙醚萃取、酸成盐的制备方法适合本品。曾试验用三氯甲烷做萃取溶剂，经比较，含量测定结果基本一致，但三氯甲烷毒性较大，污染环境，最后选用乙醚做萃取溶剂。

表1 回收率试验结果表

3.2 流动相选择 有文献报道采用以下流动相检测含麻黄样品：乙腈－0.2%磷酸溶液（3∶97）［5］、乙腈－0.1%磷酸溶液（含0.1%三乙胺）（4∶96）［6］、甲醇－0.02 mol·L－1磷酸二氢钠溶液（含0.2%三乙胺，磷酸调pH值2.5）（9∶91）［7］、乙腈－磷酸钠缓冲液（含17.5mmol·L－1十二烷基硫酸钠的0.07 mol·L－1磷酸钠溶液，用磷酸调节pH 6.0）（30∶70）［8］；经摸索调整，当流动相为乙腈－0.20%磷酸溶液（含0.2%三乙胺）（2∶98），柱温为25℃时分离效果和峰形最优。

3.3 色谱柱选择 《中国药典》中麻黄采用以极性乙醚链接苯基键合硅胶为填充剂的色谱柱，但药典制剂均采用C18色谱柱，本方法也采用C18色谱柱。

3.4 检测波长 在选定条件下，分别测定盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱对照品及供试品，在DAD检测器下查看对应色谱峰光谱图，发现盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱均在206 nm左右有最大吸收，且阴性对照样品无干扰，因此选定206 nm为样品测定波长。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：376.

［2］王戈，赵培敬.HPLC法测定宣清止咳糖浆中盐酸麻黄碱的含量［J］.齐鲁药事，2012，31（10）：577－578.

［3］解玲，范秀玉.宁嗽露中盐酸麻黄碱的含量测定［J］.齐鲁药事，2011，30（4）：213－215.

［4］景金柱，余卫兵，毕雪艳，等.HPLC测定麻杏止咳糖浆中盐酸麻黄碱的含量［J］.齐鲁药事，2005，24（7）：409－410.

［5］太成梅，那微，赵晓霞，等.HPLC法测定小儿肺热咳喘口服液中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量［J］.中国药品标准，2010，11（5）：380－383.

［6］王启砚，陈洁.HPLC法测定麻黄止嗽丸中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量［J］.中国药师，2013，16（10）：1512－1513.

［7］覃晓媚，韦薇，黄妹春，等.HPLC法测定小儿清热止咳口服液中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量［J］.广西科学，2012，19（3）：244－246.

［8］张妤琳，李玉萍.HPLC同时测定止喘灵口服液中氢溴酸东莨菪碱、硫酸阿托品、盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量［J］.中国中药杂志，2013，38（19）：3291－3294.

Determ ination of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Biyan Syrup by HPLC

RAN Ya-dong，YUAN Huan-huan，GUAN Liu
（Taiji Group Chongqing Fuling Pharmaceutical Co.，Ltd.，Chongqing 408000，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Biyan Syrup.M ethodsThe Agilent Zorbax SB－C18（4.6 mm×250 mm，5μm）column was used.Themobile phase consisted of acetonitrile－0.20%phosphoric acid（containing 0.2%triethylamine）（2∶98）with the flow rate of1.0 mL·min－1.The detection wavelength was 206 nm and the column temperature was 25℃.ResultsThe linear range of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloridewas0.124～1.86μg（r＝0.999 9）and 0.103 8～1.557μg（r＝0.999 9）with the average recovery of 99.99%（RSD＝1.24%，n＝6）and 99.33%（RSD＝1.93%，n＝6），respectively.ConclusionThemethod was accurate and reproducible.It can be used for the determination of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Biyan Syrup.

Biyan Syrup；Ephedrine hydrochloride；Pseudoephedrine hydrochloride；HPLC

R927.2

A

2095－5375（2014）12－0699－003

冉亚东，男，研究方向：新药开发和药品质量，E－mail：ranyadong＠163.com