藿香正气制剂中厚朴不同提取工艺对胃肠活动的影响研究

张慧敏，任虹，何瑶，傅超美，罗妮妮， 蒋燕萍

《中华人民共和国药典》（2010年版）收载藿香正气制剂具有解表化湿、理气和中的功效。厚朴作为该方臣药，功善行气燥湿，主要用于治疗湿滞伤中，食积气滞，腹胀便秘，脘腹胀痛。其功效主治基本符合大部分现代人利用藿香正气系列制剂治疗中暑、感冒和“胃肠道不适”等病症。通过对历版《中国药典》、《中成药部颁标准》等所收载藿香正气制剂标准的查阅，发现其中厚朴一味药材的提取工艺主要有60%、70%、95%乙醇进行热回流提取等[1～4]。提取溶媒对药物有效成分的提取率及药效影响较大，因此本课题组选用藿香正气方中厚朴为模型药物，就其不同提取工艺促进胃肠蠕动作用进行研究。

1 试验仪器与材料

1.1 仪器

数显恒温水浴锅HH-4(国华电器有限公司) ；R501B旋转蒸发仪(上海申顺生物科技有限公司)；常规手术器械。

1.2 试药

吲哚美辛肠溶片（重庆科瑞制药有限责任公司，25 mg/片）；酚酞片（临汾奇林药业有限公司，0.1 g/片）；消旋山莨菪碱片（杭州民生药业有限公司，5 mg/片）；西沙必利片（浙江京新药业股份有限公司，5 mg/片）；L-精氨酸（成都市科龙化工试剂厂）。

1.3 动物

昆明种小鼠，雌雄各半，体重（20±2）g，由成都达硕生物科技有限公司（科技部实验动物生产许可证编号：SCXK(川)2008-24）提供；清洁级SD大鼠，雌雄各半，体重（200±20）g，由四川省医学科学院试验动物中心（科技部实验动物生产许可证编号：SCXK（川）2008-21）提供。

1.4 试验药液的制备

取厚朴40 g ,分别用60%、70%、95%乙醇加热回流3次, 每次200 mL ,每次提取1 h , 合并提取液，滤过，减压回收乙醇后，调整体积为1000 mL；左旋精氨酸加生理盐水溶解，并以盐酸调至pH7.0。

2 方法与结果

2.1 对消旋山莨菪碱模型小鼠排便的影响研究[5～8]

2.1.1 造模方法 选取清洁级昆明种小鼠（20±2）g，雌雄各半。适应数天后，随机分为6组，每组10 只。分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、厚朴药物组1号、2号、3号。正常对照组和模型对照组灌胃蒸馏水(5 mL．kg-1)，厚朴药物组1号、2号、3号每日分别灌胃60%、70%、95%乙醇热回流法厚朴提取物（200 mg．kg-1），阳性对照组灌胃酚酞片（12.5 mg．kg-1)水溶液，连续灌胃7天。在给药后第8 天，各组小鼠禁食不禁水12 h后。正常对照组灌胃蒸馏水(5 mL．kg-1)，其余各组灌胃消旋山莨菪碱片 (4 mg．kg-1)水溶液。30 min 后，各组小鼠灌胃受试药物。

2.1.2 实验结果 观察并记录各组小鼠首次排便时间、6 h小鼠排便的粒数并称量排出粪便的重量。结果见表1。

表1 厚朴提取物对小鼠排便作用的影响(±S,n=10)

组别 首次排便时间/min 6 h排便粒数 6 h排便重量/g空白对照组 44.2±13.1 7.2±3.4 0.36±0.109模型组 61.1±9.8** 4.1±3.1** 0.29±0.094 *阳性对照组 49.8±19.7△△ 5.7±1.3△ 0.37±0.059 △△厚朴药物组1 53.4±17.7△△ 5.2±3.3△ 0.35±0.099△

注：与正常对照组比较 *P＜0.05，**P＜0.01,与模型组比较△P＜0.05，△△P＜0.01

结果显示，与正常对照组相比，模型组的首次排便时间、6 h 排便粒数和6 h 排便重量均有显著性差异，说明便秘模型造模成功（P＜0.05）。与模型组相比，酚酞片阳性组与厚朴提取物各组均能显著缩短小鼠首次排便时间（P＜0.05），显著增加小鼠6 h排便粒数（P＜0.05）和6 h 排便重量（P＜0.05）。表明厚朴提取液能有效缓解消旋山莨菪碱模型小鼠的便秘，而厚朴提取物3组之间的差异不明显，厚朴药物组2号（70%乙醇热回流提取组）有优于其余两组的趋势。

2.2 对左旋精氨酸致胃肠运动障碍模型大鼠的胃肠运动的影响研究[6～11]

2.2.1 造模方法 选取清洁级SD大鼠（200±20）g，雌雄各半，适应数天后，随机分为6组，每组10 只。分别为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、厚朴药物组1号、2号、3号。正常对照组,每日腹腔内注射与其它组容量相同的生理盐水，灌胃蒸馏水5 mL．kg-1；模型组腹腔内注射左旋精氨酸，剂量为：第l 天5 g．kg-1，第2～5天2.5 g．kg-1，同时灌胃蒸馏水5 mL．kg-1；阳性对照组:每日灌胃西沙必利（22.5 mg．kg-1）混悬液，左旋精氨酸用量及用法同造模组；厚朴药物组：厚朴药物组1号、2号、3号每日分别灌胃60%、70%、95%乙醇热回流法厚朴提取物（5mL．kg-1），左旋精氨酸用法和用量同造模组。

连续给药后第6天，即实验前，将各组大鼠禁食不禁水18 h，第7天灌药1 h后，灌胃半固体糊2 mL/只，(半固体糊的配制：取10 g 羧甲基纤维素钠，溶于250 mL 生理盐水中，分别加入奶粉18 g、糖8 g、淀粉8 g和活性炭末2 g，搅拌均匀，配制成300 mL，约300 g 的黑色半固体糊状物；冰箱冷藏，用时恢复至室温)，30 min后采用脱颈法处死。剖开腹腔后迅速取出整个胃肠于实验台上，结扎胃贲门，轻轻剥离，铺直，测量幽门至盲肠部全长及幽门至半固体糊前沿的距离，以幽门至半固体糊前沿距离占幽门至回盲部全长的百分率为半固体糊推进百分率。然后结扎胃幽门，取胃，用滤纸拭干后称全重，沿胃大弯剪开胃体，洗去胃内容物后拭干，称胃净重，以胃全重和胃净重的差值为胃残留物重，以此与所给糊重的百分比为胃内残留率。

2.2.2 实验结果 计算小肠推进率和胃内残留率，结果见表2。

小肠推进率(%)=[幽门至半固体糊前沿距离/幽门至回盲部全长]×100%

胃残留率(%)=[(胃全重－胃净重)/炭糊重]×100%

表2 厚朴提取物对胃肠运动障碍模型大鼠胃肠运动的影响(±S,n=10)

表2 厚朴提取物对胃肠运动障碍模型大鼠胃肠运动的影响(±S,n=10)

注：与正常对照组比较 (1)P＜0.01,与模型组比较(2)P＜0.01

组别 胃残留率/% 小肠推进率/%空白对照组 84.2±13.0 58.3±5.4模型组 99.1±19.8(1) 49.1±7.7(1)阳性对照组 86.8±19.9(2) 55.7±3.9(2)厚朴药物组 -1 89.9±17.7(2) 53.9±4.3(2)厚朴药物组- 2 87.1±10.1(2) 54.1±5.1(2)厚朴药物组- 3 90.1±13.0(2) 53.1±3.5(2)

与正常对照组相比，模型组胃排空、小肠推进显著减慢（P＜0.01），表明造模成功。与模型组相比，西沙必利片阳性组与厚朴提取物各组均能显著改善大鼠胃肠动力障碍模型的胃排空（P＜0.01）和小肠推进（P＜0.01）。表明厚朴提取液能有效促进大鼠胃排空和胃肠蠕动，而厚朴提取物3组之间的差异不明显，其中厚朴药物组2号（70%乙醇热回流提取组）有优于其余两组的趋势。

3 讨论

厚朴中主要成分为厚朴酚、和厚朴酚，味苦，辛，温。归脾、肺、胃、大肠经，具有下气除满、燥湿消痰的功效，主治脘痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳。厚朴在一定程度上能促进实验动物的胃肠蠕动，这与厚朴功效中调节消化系统功能相吻合，亦与藿香正气制剂理气和中的功效相符合。因此，本文选取消旋山莨菪碱模型小鼠实验和左旋精氨酸致胃肠运动障碍模型大鼠实验以考察厚朴不同提取工艺缓解便秘作用和促进胃排空和小肠推进运动作用。

中药疗效的好坏，提取工艺是重要的影响因素之一，从厚朴不同提取工艺对消旋山莨菪碱模型小鼠实验和左旋精氨酸致胃肠运动障碍模型大鼠实验中可以看出70%乙醇热回流提取组优于60%乙醇热回流提取组和95%乙醇热回流提取组，但三者差异不显著。因此接下来有必要采用HPLC、LC-MS 等技术对3 种不同提取工艺制备的提取液进行化学成分的分析，结合厚朴中有效成分含量、其他药效学指标、生产成本等因素，进一步筛选出制备工艺合理、质量稳定可控、临床疗效显著的最佳提取工艺。

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