一起病毒性腹泻聚集性事件的调查分析

陆 岚，丁 明，刘 青，潘丽峰

腹泻是影响全世界最广泛人群的一种疾病，病毒已被认为是最重要的一类腹泻病原［1］。引起腹泻的病毒主要有诺如病毒(norovirus，NV)、轮状病毒(rotavirus，RV)、扎如病毒(sapovirus，SPV)，星状病毒(astrovirus，ASTV)和肠道腺病毒(enteric adenovirus，EADV)等。上海市浦东新区某学校于2013年11月发生1起急性胃肠炎疫情，病例主要临床表现呕吐、腹痛、腹泻等，为了确定病原，以实时荧光定量方法(real-time quantitative polymerase chain reaction，RQ-PCR)对上述病毒进行检测，确认该起聚集性事件的病原。现将结果报道如下。

1 对象与方法

1.1 采集对象

首日采集腹泻病例的肛拭标本12例，环节样品15例，继续采集环节标本及病例、生活老师、工作人员的肛拭标本共计387例。具体的采集日期及数量见表1。

1.2 仪器和试剂

1.2.1 主要仪器 QIAxtractor全自动核酸抽提仪(德国QIAGEN公司)、OPTICON2实时荧光定量PCR仪(美国BIO-RAD公司)、7500fast实时荧光定量PCR仪(美国Applied Biosystems公司)、7000实时荧光定量PCR仪(美国Applied Biosystems公司)。

表1样本的采集情况(例)

1.2.2 主要试剂 检测试剂均采用商品化核酸扩增荧光检测试剂盒，其中，诺如病毒、肠道腺病毒试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司，轮状病毒、星状病毒和扎如病毒试剂盒购自上海之江生物科技有限公司。所有试剂均在有效期内使用。

1.3 实验方法

1.3.1 粪便标本处理 将肛拭子插入含0.5 ml生理盐水的Eppendorf管中，混匀，4 000 r/min离心2 min，r=6.0 cm，取上清用QIAxtractor全自动核酸抽提仪提取核酸，得到总核酸体积为60 μl，备用。

1.3.2 RQ-PCR 检测根据商品化的轮状病毒、诺如病毒、星状病毒、扎如病毒和肠道腺病毒实时荧光试剂盒说明书，将提取好的核酸样本在OPTICON2实时荧光定量PCR仪、7500fast实时荧光定量PCR仪以及7000实时荧光定量PCR仪上进行RQ-PCR反应。试剂配制及荧光PCR反应条件参见试剂盒说明书。

2 结果

2.1 首日检测结果

12例肛拭样本中，有2份标本检出诺如病毒，轮状病毒、扎如病毒、星状病毒和肠道腺病毒均为阴性。检出率为16.67%。因此初步判断本事件是由诺如病毒感染引起的。

2.2 后续检测结果

对后续采集样本的检测结果显示，只有诺如病毒检出，未检出其他与腹泻相关的病毒。后续的腹泻患者、生活老师以及工作人员肛拭标本的检测情况见表2。

3 讨论

诺如病毒感染是引起人类腹泻的主要病因之一。感染对象为成人和较大年龄儿童，全年均有发生［2］。本次疫情发病者均为儿童和成年人，主要症状为恶心伴呕吐，腹胀、腹泻、腹痛。病程一般持续2～3 d，病情较轻。符合诺如病毒感染的一般临床表现［3］。诺如病毒主要通过粪-口途径感染，常见传播途径为诺如病毒污染的食品、水、生活接触等。本次疫情笔者对样品进行多种病原学检测，结果证明为诺如病毒感染。临床表现和流行病学特征均符合诺如病毒感染的特征。

诺如病毒潜伏期一般为24～48 h，实验室在本次聚集性事件中由2012年11月22日至2012年12月6日采集的标本中持续检出部分标本诺如病毒核酸阳性，推测有继代病例发生。诺如病毒对各种理化因子有较强的抵抗力，pH 2.7环境中暴露3 h，或者4℃、20%乙醚处理18 h，或者60℃孵育30 min，仍具有感染性［4］;并且能够耐受普通饮用水中3.75×10-6～6.25×10-6的氯浓度(游离氯0.5×10-6～1.0×10-6)［5］。消毒、灭菌基本原则:重复使用的器具和物品，使用后应首先清洁，再进行消毒灭菌［6］。且食堂工作人员未对抹布进行清洗直接浸入消毒液，因此食堂采用的消毒方法不能够清除诺如病毒。在首次环境样品检测过程中，笔者忽略了该环节，主观认为经过消毒液浸泡的抹布即时表面看来不干净，但是细菌病毒应该清除干净。没有进行抹布的检测，结果未找到传染源，致使疫情不能在短期内控制。

由于诺如病毒感染具有起病急、传播快的特征，一旦出现疫情，应及时准确的进行实验室检测。在确保样品采集质量及运输等各个环节符合规范要求的前提下，实验室采用实时荧光定量(real-time PCR，RQ-PCR)方法进行检测，能够快速、敏感的检测出病源。

表2 腹泻患者、生活老师及工作人员肛拭样本检测结果

［1］张海龙，李苑，张克春，等.2010年广东省深圳市病毒性腹泻监测结果分析［J］.疾病监测，2012，27(1):4-7.

［2］金奇.医学分子病毒学［M］.北京:北京科学技术出版社，2001:565-578.

［3］谢华萍，李巧艳，康燕，等.广州市一起诺如病毒急性胃肠炎暴发的实验室检测［J］.预防医学情报杂志，2010，26(8):669-671.

［4］胡必杰，倪晓平，覃金爱.医院环境物体表面清洁与消毒最佳实践［M］.上海:上海科学技术出版社，2012:110-111.

［5］易彬樘，李东力.诺瓦克病毒流行病学研究概况与防治对策［J］.沈阳部队医药，2007，20(5):344-347.

［6］中华人民共和国卫生部.WS/T367-2012医疗机构消毒技术规范［S］.北京:中华人民共和国卫生部，2012.

(本文编辑:林永丽)