葛根-丹参组方对动脉粥样硬化鹌鹑血管内皮组织的影响

樊利娜, 张鑫, 赵兴冉, 李佳川, 谭睿, 顾健

(1.西南民族大学民族医药研究院, 成都 610041; 2.西南交通大学生命科学与工程学院, 成都 610031))

葛根-丹参组方对动脉粥样硬化鹌鹑血管内皮组织的影响

樊利娜1, 张鑫1, 赵兴冉1, 李佳川1, 谭睿2, 顾健1

(1.西南民族大学民族医药研究院, 成都 610041; 2.西南交通大学生命科学与工程学院, 成都 610031))

目的: 考察葛根-丹参(1:1)组方对动脉粥样硬化鹌鹑血管内皮组织的影响. 方法: 连续喂养高脂饲料造模同时给药, 观察葛根-丹参对动脉粥样硬化鹌鹑主动脉组织脂质斑块、内皮及内膜组织的影响. 结果: 葛根-丹参组方配伍后, 无论乙酸乙酯部位还是水提物, 均能较好的减少泡沫细胞及脂质的沉积, 改善内皮细胞的肿胀、变性, 抑制血管内膜的增厚及巨噬细胞的数量, 尤以乙酸乙酯部位作用明显. 结论: 葛根丹参组方配伍具有一定的减少主动脉组织脂质斑块形成,保护血管内皮细胞作用, 有效地阻止AS的形成与发展.

葛根-丹参; 动脉粥样硬化; 鹌鹑; 血管内皮组织

动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是心脑血管疾病发生的病理基础, 以动脉粥样硬化为基础的各类疾病正急剧增加, 因此, 加速抗动脉粥样硬化药物的开发研究具有重要意义. 脂质沉积于血管内膜壁诱发AS斑块[1]、血管内皮功能异常反映AS发展的严重程度[2-3]. 葛根-丹参药对具有活血化瘀, 去瘀生新的功效[4], 前期药效学研究表明葛根-丹参药对可以改善动脉粥样硬化鹌鹑的脂质代谢, 为进一步探索其对动脉粥样硬化的作用机制,本实验建立高脂血症鹌鹑动脉粥样硬化模型, 观察了药物对动脉粥样硬化鹌鹑模型主动脉脂质斑块和内皮细胞功能方面的影响, 为葛根-丹参抗动脉粥样硬化提供一定的实验依据.

1 材料与方法

1.1 试验药物

葛根-丹参组方(1: 1)乙酸乙酯提取物, 水提物, 由西南民族大学民族医药研究院提供; 辛伐他汀片, 由杭州默沙东制药有限公司提供, 规格: 20mg*7, 批号: 110737.

1.2 动物

朝鲜种鹌鹑, 雄性, 体重100±10g, 6周龄, 成都新津万新鹌鹑养殖专业合作社订购.

1.3 试剂

胆固醇, 成都市科龙化工试剂厂, 批号: 20120409; 猪胆酸钠, 北京奥博星生物技术有限责任公司, 批号: 120422; 丙硫氧嘧啶, 北京嘉林药业股份有限公司, 批号: 20110812; 高脂饲料配方: 胆固醇1%、猪油16%、丙硫氧嘧啶0.1%、猪胆酸钠0.2%、其余为基础饲料; 鹌鹑基础饲料, 成都市新津希望饲料厂.

1.4 方法

1.4.1 高脂饲料的制备

参照徐淑云造模方法[5], 猪油15%、胆固醇5%、猪胆酸钠0.2%、丙硫氧嘧啶0.1%, 其余为基础饲料.

1.4.2 动物分组、造模及给药

朝鲜种鹌鹑76只, 全雄, 体质量100±10g. 按体质量分层随机分为7组, 即空白组、模型组、辛伐他汀组、葛根丹参药对乙酸乙酯部位 (7.5g/kg、5.0g/kg、2.5g/kg)剂量组和葛根丹

参药对水提物(7.5g/kg)组. 除模型组16只动物外(其中6只用于定期病理学检测, 鉴别模型建立程度, 每次2只), 其余每组10只. 各组鹌鹑按设计剂量灌胃给药, 每日1次, 连续16周, 实验期间除空白组给予基础饲料外,其余各组鹌鹑均同步给予高脂饲料20g/只·d, 建立

鹌鹑动脉粥样硬化动物模型.

1.4.3 检测指标

鹌鹑处死后, 取上述鹌鹑主动脉组织(需包含主动脉分叉处和主动脉弓), 10%甲醛固定, 逐级乙醇脱水, TO透明液透明, 2次浸蜡, 石蜡包埋, 5μm切片, HE染色, 切片以TO透明液透明, 加拿大树胶封片供镜检. 以上标本均按四川省医学科学院·四川省人民医院实验动物研究所质量监控室病理组病理检验SOP程序进行, 最后在10×10倍光镜下镜检, 检测主动脉组织脂质斑块、内皮及内膜组织的病理变化.

2 结果与分析

葛根-丹参对动脉粥样硬化鹌鹑主动脉组织脂质斑块、内皮及内膜组织的影响

表1 脂质斑块病理评分标准

由表1～4和图1 A～H结果所示, 空白组主动脉内膜光滑, 无粥样病损, 肉眼观察并未形成脂质斑块, 光镜下组织学切片观察显示主动脉壁、内膜、中膜都清晰可见, 结构正常, 内膜无泡沫细胞, 更无脂质沉积改变, 含有少量胶原纤维和平滑肌纤维, 弹力纤维分布均匀, 无异常改变; 与空白组相比较, 如箭头所示, 模型组主动脉内膜异常增厚, 内皮有一定程度的损伤、脱落, 表层纤维帽薄, 其下有大量的泡沫细胞, 泡沫细胞圆形体积大,胞质内大量空泡化(制片时脂肪已被溶解所致)以及少许平滑肌细胞、细胞外脂质及炎性细胞, 这些病理表现符合AS症的早期脂纹纤维斑块期改变. 与模型组相比较, 葛根丹参组方配伍后, 无论乙酸乙酯部位还是水提物, 均能较好的减少泡沫细胞及脂质的沉积, 改善内皮细胞的肿胀、变性, 抑制血管内膜的增厚及巨噬细胞的数量(均P<0.05～0.01), 尤以葛根丹参乙酸乙酯部位作用最为明显, 显示出一定的减少脂质斑块形成, 保护血管内皮结构及功能的作用.

表2 对动脉粥样硬化鹌鹑模主动脉脂质斑块的影响

表3 对动脉粥样硬化鹌鹑模主动脉内皮细胞的影响

表4 对动脉粥样硬化鹌鹑模主动脉内膜的影响

图1 主动脉脂质斑块病理图(HE, ×100)

3 讨论

动脉粥样硬化基本损害表现为动脉内膜局部呈现壁膜增厚, 并伴随动脉粥样硬化斑块, 病理表现形式有脂质条纹及纤维斑块. AS的发生一般会累及全身动脉血管, 以主动脉、脑动脉、肾动脉、肌弹力型动脉等部位为主, 严重者会导致动脉血管变狭窄甚至完全堵塞, 致使机体某些重要器官因缺血缺氧而发生多种病变. 在AS整个发病过程中, 脂质代谢的紊乱和血管内皮细胞的功能损伤是AS发生发展过程的关键环节[6]. 医学上现已公认脂质沉积与AS的发生发展有着密切的关系, 过多的血脂会引发脂质代谢障碍, 可导致机体血液粘稠度增高, 脂质沉积于血管内膜壁上, 从而诱发AS斑块; 同时血管内皮功能异常是AS形成早期的始动环节, 也是其它心血管疾病发生的重要因素[7-8]. 因此, 本研究从减少脂质斑块、保护血管内皮功能两方面入手共同探讨葛根丹参药对抗AS的作用机制. 本实验病理检测结果表明葛根-丹参组方配伍能抑制泡沫细胞及斑块, 达到稳定血管内皮细胞功能, 减少血栓形成的作用, 提示葛根丹参药对对AS有一定治疗作用. 这可能是葛根丹参药对抗动脉粥样硬化作用的药理学基础. 本研究为临床上从改善脂质代谢、改善细胞内皮细胞方面防治AS提供一定的实验依据,也为开发葛根-丹参组方配伍新药开辟新途径.

[1] 李玉洁, 朱晓新, 杨庆, 等. 参莲提取物对动脉粥样硬化家兔血管病理形态和脂质代谢的影响[J]. 中草药,2011,42(4):760-764. [2] 山丽梅, 张锦超, 汪海. 血管内皮细胞功能与动脉粥样硬化关系的研究进展[J]. 解放药学学报, 2002, 18(5): 294-297.

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[5] 徐淑云, 卞如濂, 陈修. 药理实验方法学[M]. 3版. 北京: 人民卫生出版社, 2003: 1201-1205.

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The pathology study of Gegen-Danshen prescription on aorta in atherosclerosis quail

FAN Li-na1, ZHANG Xin1, ZHAO Xing-ran1, LI Jia-chuan1, TAN Rui2, GU Jian1
(1.Institute of National Medicine, Southwest University for Nationalities, Chengdu 610041, P.R.C.; 2.School of Life Science and Engineering, Southwest Jiaotong University, Chengdu 610031, P.R.C.)

Objective:To observe the effect of Gegen-Danshen Prescription(1:1) on aorta in atherosclerosis quail.Method:Feeding quail with high fat continuously establishes atherosclerosis models. At the same time, groups quail are administered orally once daily to observe the effect of Gegen-Danshen Prescription on aorta lipid plaque, endothelial cells and intima tissue in atherosclerosis quail.Results:Gegen-Danshen ethyl acetate extract and water extract, especially ethyl acetate extract can better reduce the foam cells and deposition of lipid, improve swelling and degeneration of endothelial cell, restrain vascular intimal thickening and decrease the number of macrophages.Conclusion:Gegen-Danshen can reduce the formation of aorta lipid plaque and protect vascular endothelial cells, which can prevent the formation and development of AS.

combination of Puerariae and Salviae; AtheroscIerosis; quail; vascular endothelial tissue

R285

A

1003-4271(2014)01-0058-05

10.3969/j.issn.1003-4271.2014.01.12

2013-11-29

顾健(1967-), 男, 教授, 硕士生导师, 研究方向: 民族药物及中药研究开发, E-mail: gujian_3@163.com.

国家自然科学基金项目(81173594); 四川省科技支撑计划项目(2013SZ0124); 四川省应用基础研究项目(2012JY0025).