聊城地区手足口病病原构成的临床研究

于金林　孟卫东　孙爱霞　初瑞雪

[摘要] 目的 探讨聊城地区手足口病（HFMD）的病原构成及临床特点。 方法 采集2010年6月聊城地区240例HFMD患者（包括23例重症患者）咽拭子并提取病毒RNA。采用real-time RT-PCR方法，以肠道病毒5′UTR区通用引物及探针对病毒RNA进行初步筛查，初筛阳性标本进一步采用CA16及EV71 VP1区特异性引物及探针进行型别鉴定。 结果 普通患者EV71阳性143例、CA16阳性6例、其他肠道病毒阳性21例；重症患者中EV71阳性率达82.6%（19/23），CA16感染未见引起重症。 结论 聊城地区HFMD患者以1～3岁儿童为主，男性高发于女性，农村高发于城市；HFMD的病原包括EV71、CA16及其他肠道病毒，主要病原为EV71，且EV71感染容易引起重症并发症。

[关键词] 手足口病；柯萨奇病毒；肠道病毒

[中图分类号] R512.5 [文献标识码] B [文章编号] 1674-4721（2014）01（a）-0163-03

手足口病（hand foot mouth disease，HFMD）是由肠道病毒引起的急性传染病，常发生于学龄前儿童，以<3岁儿童的发病率最高，表现为发热和手、足、口腔、臀、膝等部位的皮疹、斑丘疹，少数病例可出现无菌性脑膜炎、脑炎、脑脊髓炎、肺水肿、循环衰竭等并发症，个别出现脊髓灰质炎样麻痹后遗症，甚至死亡。肠道病毒为HFMD病原，主要为柯萨奇病毒（Coxsackie virus）A组部分血清型，如A2、A4、A5、A8、A10、A16；部分B组柯萨奇病毒血清型，如B2、B4；埃可病毒（ECHO virus）和肠道病毒（enterovirus）71型，以CA16和EV71型常见。为了解本地区HFMD病原构成及临床特点，本研究采集一定时期HFMD患者鼻咽拭子进行了real-time RT-PCR检测，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2010年6月1～9日聊城市人民医院HFMD门诊依据原卫生部《手足口病诊疗指南2010年版》诊断为HFMD的240例患者，其中，男143例，女97例；年龄6个月～40岁（8、12、14、33、40岁各1例），平均3.2岁。轻型患者217例，重症（并发脑炎、脑脊髓炎、脑膜炎、肺水肿、循环衰竭及心肌炎即为重症）患者23例；并发脑炎7例，并发脑炎、肺炎11例，并发肺炎1例；农村178例，城市62例。

1.2 标本采集

由专业医护人员用专用采样棉签，适度用力拭采咽后壁和两侧扁桃体部位，避免触及舌部，迅速将采样棉签放入装有保存液的外螺旋盖采样管中，旋紧管盖，密封以防止干燥，在采样管外注明标本唯一性编号。2 h内送达实验室，超低温（-80℃）冷冻保存。采集鼻咽拭子置病毒保存液中，送实验室由专业人员严格按操作程序检测。

1.3 标本检测

咽拭子于标本保存液中充分振荡20 min，洗下拭子上粘附的病毒及含有病毒的细胞等，冻融1次使细胞破裂，释放病毒颗粒，并在4℃条件下10 000 r/min离心20 min。采用北京金豪制药股份有限公司（简称“北京金豪”）生产的核酸分离试剂盒（硅胶膜吸附法），按试剂盒说明书提取病毒RNA。所得RNA首先应用针对肠道病毒5′UTR区的肠道病毒通用引物荧光检测试剂盒（北京金豪）进行real time RT-PCR检测，阳性标本再以分别针对EV71和CA16 VP1基因的肠道病毒EV71和CA16型双通道荧光检测试剂盒（北京金豪）进行型别鉴定。扩增体系及循环程序均参照试剂盒要求，在Roche Light Cycler 480Ⅱ上完成扩增。

1.4 结果的判读与分析

根据Roche Light Cycler 480Ⅱ分析软件进行分析，得到各标本的肠道病毒通用性RNA的检测结果。每次试验应设置阳性对照和阴性对照，且应符合以下要求，否则试验结果不成立：无Ct值或Ct值为0报告该反应阴性；Ct值≤37.0报告该反应阳性；37.0

2 结果

<3岁儿童占64.2%，<5岁儿童占87.2%，EV71阳性患者143例，CA16阳性患者6例，其他肠道病毒21例（表1）。19例EV71阳性重症患者中，农村患儿占68%（13/19），城市患儿占32%（6/19）；<1岁患儿中，男5例，女1例；2岁以下患儿男6例、女1例；3岁以下患儿男3例、女0例；4岁以下患儿男女均0例；5岁以下患儿男3例、女0例；男性占89%（17/19），女性占11%（2/19）。

3 讨论

HFMD是由肠道病毒感染引起的儿童传染病，传染性强，传播途径广，速度快，流行强度大，短期内可引起大流行。1957年新西兰首次报道HFMD，1958年分离出CA16型病毒。自1972年美国首次确认EV71引起HFMD以来，HFMD在世界各地均有流行，且EV71与CA16病毒感染交替出现，成为HFMD的两种主要病原体。本研究提示，EV71阳性患者143例，CA16阳性患者6例，其他肠道病毒22例，与上海、深圳、北京等地区存在差异[1-3]。近年来，马来西亚、新加坡、香港等地EV71病毒多次大规模暴发流行，出现中枢神经系统症状，甚至暴发性死亡病例[4-6]。EV71病毒耐酸耐热，耐酸决定其可通过粪-口途径传播，耐热使其能在较高温度下存活和自我复制。EV71病毒的复制能力与神经毒性有关，导致患儿神经系统发育迟缓和认知功能减退，亦可引起成人急性脑炎[7-9]。通过周围运动神经元轴突逆向轴浆运输可能是EV71型病毒侵入中枢神经的主要途径[10-11]。本研究提示，本地区重症手足口病主要由EV71型肠道病毒引起，CA16病毒未引起重症感染。CA16病毒阳性较少，这与CA16病毒小范围传播及CA16病毒感染后大多数患者呈隐形携带，症状较轻，就诊者少有关。本研究证实，聊城地区引起HFMD流行的病原主要为EV71和CA16病毒，同时存在其他型别肠道病毒。

本研究提示，<3岁儿童占64.2%，<5岁儿童占87.2%，男性发病率高于女性。与文献报道聊城地区HFMD主要集中在<5岁儿童接近，男女比例略有差异，这可能与病例选择的地域范围和时间段不同有关。而男性患病率高于女性，这与男孩活泼好动，卫生清洁意识较弱有关。本研究发现，HFMD患者农村与城市比例为2.9∶1，且以<5岁农村幼托儿童为主，这与农村卫生条件差及该年龄段儿童抵抗力弱、相互接触密切、室内通风不良易发生交叉感染等因素有关。

本研究240例咽拭子中有170例肠道病毒阳性，阳性率为70.8%，另外有70份标本肠道病毒阴性，分析其原因，主要有以下几方面：①肠道病毒为RNA病毒，RNA在外界很容易被核酸酶降解，标本保存、运输、解冻不当等都能导致RNA破坏；②临床诊断误诊，有类似临床症状患儿被误诊为HFMD；③实时荧光PCR具有较高的特异度、灵敏度，易导致一定假阴性；④临床标本取材不当、患者口腔表现不明显、药物影响等；⑤本次研究中部分重症患者从其他医院转院而来，存在采集时间不当，其中1例门诊及入院时均采取咽拭子，门诊采取标本测定为CA16阳性，入院采集标本肠道病毒为阴性；2例肠道病毒阴性患者，在其他实验室不同时间检测到EV71，提示不同病程阶段采集标本可出现假阴性。咽拭子标本进行real time RT-PCR检测存在一定假阴性，在临床试验方面仍显示了很好的可行性和有效性，在传染病流行或暴发时，采集咽拭子进行简便、快速、稳定的RT-PCR试验，对病原体的早期鉴定和分型具有重要意义，在控制疫情、应对突发公共卫生事件中发挥重要作用。

有关部门应加强HFMD知识的宣传教育，对易感人群（<5岁儿童），特别是幼托机构、农村居住者进行HFMD相关知识教育，提高认识，控制传染源、切断传播途径。广大科研工作者应加强病毒检测和控制、基因组重组变异及疫苗、药物的研究，有效控制疾病的发生、发展、暴发和流行，保护人类的健康。

[参考文献]

[1] 杨智宏，朱启镕，李秀珠，等.2002年上海手足口病病例中肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型的调查[J].中华儿科杂志，2005，43（3）：648-652.

[2] 张寿斌，廖华，黄呈辉，等.深圳237例手足口病肠道病毒血清型基因及临床特征[J].中国当代儿科杂志，2008， 10（1）：38-41.

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[4] Ahmad K.Hand，foot，and mouth disease outbreak reported in Singapore[J].Lancet，2000，356（9238）：1338.

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[10] Chen CS，Yao YC，Lin SC，et al.Retrograde axonal transport：a major transmission route of enterovirus 71 in mice[J].J Virol，2007，81（17）：8996-9003.

[11] Wong KT，Munisamy B，Ong KC，et al.The distribution of inflammation and virus in human enterovirus 71 enceph alomyelitis suggests possible viral spread by neural pathways[J].J Neuropathol Exp Neurol，2008，67（2）：162-169.

（收稿日期：2013-09-27 本文编辑：袁 成）endprint

本研究提示，<3岁儿童占64.2%，<5岁儿童占87.2%，男性发病率高于女性。与文献报道聊城地区HFMD主要集中在<5岁儿童接近，男女比例略有差异，这可能与病例选择的地域范围和时间段不同有关。而男性患病率高于女性，这与男孩活泼好动，卫生清洁意识较弱有关。本研究发现，HFMD患者农村与城市比例为2.9∶1，且以<5岁农村幼托儿童为主，这与农村卫生条件差及该年龄段儿童抵抗力弱、相互接触密切、室内通风不良易发生交叉感染等因素有关。

本研究240例咽拭子中有170例肠道病毒阳性，阳性率为70.8%，另外有70份标本肠道病毒阴性，分析其原因，主要有以下几方面：①肠道病毒为RNA病毒，RNA在外界很容易被核酸酶降解，标本保存、运输、解冻不当等都能导致RNA破坏；②临床诊断误诊，有类似临床症状患儿被误诊为HFMD；③实时荧光PCR具有较高的特异度、灵敏度，易导致一定假阴性；④临床标本取材不当、患者口腔表现不明显、药物影响等；⑤本次研究中部分重症患者从其他医院转院而来，存在采集时间不当，其中1例门诊及入院时均采取咽拭子，门诊采取标本测定为CA16阳性，入院采集标本肠道病毒为阴性；2例肠道病毒阴性患者，在其他实验室不同时间检测到EV71，提示不同病程阶段采集标本可出现假阴性。咽拭子标本进行real time RT-PCR检测存在一定假阴性，在临床试验方面仍显示了很好的可行性和有效性，在传染病流行或暴发时，采集咽拭子进行简便、快速、稳定的RT-PCR试验，对病原体的早期鉴定和分型具有重要意义，在控制疫情、应对突发公共卫生事件中发挥重要作用。

有关部门应加强HFMD知识的宣传教育，对易感人群（<5岁儿童），特别是幼托机构、农村居住者进行HFMD相关知识教育，提高认识，控制传染源、切断传播途径。广大科研工作者应加强病毒检测和控制、基因组重组变异及疫苗、药物的研究，有效控制疾病的发生、发展、暴发和流行，保护人类的健康。

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（收稿日期：2013-09-27 本文编辑：袁 成）endprint

本研究提示，<3岁儿童占64.2%，<5岁儿童占87.2%，男性发病率高于女性。与文献报道聊城地区HFMD主要集中在<5岁儿童接近，男女比例略有差异，这可能与病例选择的地域范围和时间段不同有关。而男性患病率高于女性，这与男孩活泼好动，卫生清洁意识较弱有关。本研究发现，HFMD患者农村与城市比例为2.9∶1，且以<5岁农村幼托儿童为主，这与农村卫生条件差及该年龄段儿童抵抗力弱、相互接触密切、室内通风不良易发生交叉感染等因素有关。

本研究240例咽拭子中有170例肠道病毒阳性，阳性率为70.8%，另外有70份标本肠道病毒阴性，分析其原因，主要有以下几方面：①肠道病毒为RNA病毒，RNA在外界很容易被核酸酶降解，标本保存、运输、解冻不当等都能导致RNA破坏；②临床诊断误诊，有类似临床症状患儿被误诊为HFMD；③实时荧光PCR具有较高的特异度、灵敏度，易导致一定假阴性；④临床标本取材不当、患者口腔表现不明显、药物影响等；⑤本次研究中部分重症患者从其他医院转院而来，存在采集时间不当，其中1例门诊及入院时均采取咽拭子，门诊采取标本测定为CA16阳性，入院采集标本肠道病毒为阴性；2例肠道病毒阴性患者，在其他实验室不同时间检测到EV71，提示不同病程阶段采集标本可出现假阴性。咽拭子标本进行real time RT-PCR检测存在一定假阴性，在临床试验方面仍显示了很好的可行性和有效性，在传染病流行或暴发时，采集咽拭子进行简便、快速、稳定的RT-PCR试验，对病原体的早期鉴定和分型具有重要意义，在控制疫情、应对突发公共卫生事件中发挥重要作用。

有关部门应加强HFMD知识的宣传教育，对易感人群（<5岁儿童），特别是幼托机构、农村居住者进行HFMD相关知识教育，提高认识，控制传染源、切断传播途径。广大科研工作者应加强病毒检测和控制、基因组重组变异及疫苗、药物的研究，有效控制疾病的发生、发展、暴发和流行，保护人类的健康。

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[10] Chen CS，Yao YC，Lin SC，et al.Retrograde axonal transport：a major transmission route of enterovirus 71 in mice[J].J Virol，2007，81（17）：8996-9003.

[11] Wong KT，Munisamy B，Ong KC，et al.The distribution of inflammation and virus in human enterovirus 71 enceph alomyelitis suggests possible viral spread by neural pathways[J].J Neuropathol Exp Neurol，2008，67（2）：162-169.

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