红龙镇痛片提取工艺的改进

姬涛　李怀平　王朔

[摘要] 目的 优选红龙镇痛片的最佳提取工艺。 方法 采用正交实验法L9（34）分别以獐牙菜苦苷提取率和干膏得率作为考察指标，优选红龙镇痛片制备过程中的提取工艺。 结果 最终确定最佳醇提取工艺为每次加8倍量75%乙醇回流提取3次，第一次提取2 h，第二、三次各提取1 h。 结论 该制备工艺稳定、合理、可行。

[关键词] 红龙镇痛片；正交实验法；醇提取

[中图分类号] R94 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）01（a）-0009-03

红龙镇痛片为藏医古验方，由龙骨、印度獐牙菜、红花等十五味药组成，具有醒脑开窍、通络止痛的功效，原方收载于云丹嘉措的《藏医临床札记》，一百多年的临床应用证明，其对偏头痛、血管性头痛效果良好。对该药品原工艺中小部分药材进行提取，大部分药材直接粉碎入药，有效成分释放缓慢，同时因为原药材细粉入药，也影响到卫生学不合格的问题。本实验根据配方中药材所含化学成分的理化性质，选用不同的溶剂进行分开提取，保证药材中的药效成分能够被充分的提取出来。本研究将红龙镇痛片制剂前工艺分为以下3个部分。①醇提部分：印度獐牙菜、红花、金腰草、川西小黄菊、马尿泡、波棱瓜子6味药；②水提部分：铁棒锤、唐古特乌头、珍珠母、龙骨、泉华、石花、短穗兔耳草7味药；③粉碎部分：安息香、熊胆粉2味药。本研究着重对醇提两部分进行了工艺研究，采用正交试验，优选了最佳提取工艺。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

1.1.1 仪器 KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；高效液相色谱仪：日立L-2100泵，日立L-2400检测器；岛津AUW220D电子天平；HH-4数显恒温水浴锅（常州荣冠试验分析仪器厂）。

1.1.2 试药 药材由青海金珂藏药股份有限公司提供；獐牙菜苦苷对照品（0785-200303）由中国食品药品检定研究院提供；水为纯化水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

1.2 方法

本品原标准中以獐牙菜苦苷含量为含量测定项，因此本试验以獐牙菜苦苷提取率作为指标之一，进行了醇提工艺的考察。

1.2.1 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2%磷酸溶液（18∶82）为流动相；检测波长235 nm；进样量5 μl；流速1 ml/min，柱温室温[1]。

1.2.2 对照品溶液的制备 取獐牙菜苦苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含50 μg的溶液，摇匀，即得。

1.2.3 药材溶液的制备 取印度獐牙菜药材细粉约0.5 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超声处理40 min，取出，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.2.4 供试品溶液的制备 取实验制得样品细粉约1.0 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超声处理40 min，取出，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.2.5 醇浓度筛选 取印度獐牙菜20.1 g、红花20.1 g、金腰草4.2 g、川西小黄菊20.1 g、马尿泡4.05 g、波棱瓜子4.05 g，6味药材混合共计72.6 g，共取4份，分别加入8倍量35%、55%、75%、95%乙醇回流提取2次，每次2 h，滤过，滤液浓缩干燥，研细，按“1.2.4”项下制备供试品溶液，测定獐牙菜苦苷含量，计算提取率。

1.2.6 正交试验 为进一步优选醇提最佳工艺，选定加醇量、提取时间和提取次数作为考察的三个因素，各取三个水平，以獐牙菜苦苷提取率及干膏得率为指标综合评分。正交试验设计见表1。

实验室中的提取时间是由提取次数确定，提取时间由前往后依次进行。

称取印度獐牙菜等6味药材混合共计72.6 g，共取9份，按正交表顺序进行工艺试验，按“1.2.4”项下制备供试品溶液，测定獐牙菜苦苷含量，计算提取率。

2 结果

2.1 不同浓度乙醇獐牙菜苦苷提取率的比较

不同浓度乙醇獐牙菜苦苷提取率的比较具体结果见表2。结果表明，醇浓度越高，獐牙菜苦苷提取率越高，而75% 乙醇和95% 乙醇的提取效果差异较小，为保证药物中有效成分能最大限度的提取出来，同时也能够节约生产成本，确定采用浓度为75%乙醇进行提取。

印度獐牙菜药材中獐牙菜苦苷含量为0.70%

2.2 醇提正交试验

醇提正交试验直观分析具体见表3，醇提正交试验方差分析具体见表4。由方差分析结果看，三个因素对提取效果影响的作用次序为C>A>B，其中C因素对结果有显著性影响，即提取次数影响最大，加醇量次之，提取时间影响最小，再结合直观分析结果，确定醇提的最佳工艺参数为A2B1C3，即每次加8倍量75%乙醇回流提取3次，第一次提取2 h，第二、三次各提取1 h。

2.3 验证试验

按配方配比称取醇提药材共计363 g，共取3份，采用正交试验优选得到的条件进行醇提，测定獐牙菜苦苷提取率及干膏率，结果与正交试验基本一致，说明提取工艺条件稳定可行（表5）。

印度獐牙菜药材中獐牙菜苦苷含量为0.70%

3 讨论

方中金腰草、川西小黄菊中含黄酮类等有效成分[2-3]，马尿泡中含有生物碱类等成分[4]，波棱瓜子中含有木质素及油脂类成分等[5]，这些成分在醇中都有很好的溶解度，同时也有报道，印度獐牙菜[6]、红花[7]醇提效果也较好，因此本文将上述六味药合并进行醇提取，优选最佳提取方案。

本实验参考原标准以獐牙菜苦苷含量为主要指标，同时以干膏得率为次要指标，两者结合，综合评价，可以比较客观地反映各个因素及因素水平对提取工艺的影响。

本实验以最大程度提取药材中有效成分为原则，通过系统的研究得到最佳工艺为药材每次加8倍量75%乙醇回流提取3次，第一次提取2 h，第二、三次各提取1 h，验证结果表明此工艺稳定可行，适用于工业生产。

对本方原工艺中小部分药材进行提取，大部分药材直接粉碎入药，而传统藏药中很多成药都以药材粉末直接入药，存在生产方式粗放、质量较难控制等缺点[8]，因此，怎样将现代技术引入藏药的二次开发中，成为目前制约藏药发展的一个因素。通过本实验的研究，希望能为其他藏药品种的研发提供借鉴。

[参考文献]

[1] 国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编经络肢体脑系分册[M].北京：人民卫生出版社，2002：71.

[2] 王玉平，杨云裳，杨林西，等.藏药金腰草中黄酮诱导K562细胞凋亡及其分子机制研究[J].实用癌症杂志，2005， 20（4）：374-376.

[3] 杨爱梅，鲁润滑，师彦平.藏药川西小黄菊化学成分的研究[J].中药材，2007，30（5）：546-548

[4] 朱华勇，吴娟，黄帅，等.马尿泡化学成分的研究[J].华西药学杂志，2011，26（4）：305-307

[5] 徐冰.藏药波棱瓜子化学成分研究[D].重庆：西南大学，2012.

[6] 黄一平，毕丽丽，陈超，等.藏药印度獐牙菜提取工艺研究[J].中成药，2008，30（2）：190-192.

[7] 李璘，陆茵，马骋，等.红花醇提物对心肌缺血犬的血流动力的作用[J].中药药理与临床，2002，（6）：24-26.

[8] 曹越，孟宪纪. 藏药及其研究现状[J].甘肃中医，2004，17（10）：32-33.

（收稿日期：2013-10-15 本文编辑：林利利）

[摘要] 目的 优选红龙镇痛片的最佳提取工艺。 方法 采用正交实验法L9（34）分别以獐牙菜苦苷提取率和干膏得率作为考察指标，优选红龙镇痛片制备过程中的提取工艺。 结果 最终确定最佳醇提取工艺为每次加8倍量75%乙醇回流提取3次，第一次提取2 h，第二、三次各提取1 h。 结论 该制备工艺稳定、合理、可行。

[关键词] 红龙镇痛片；正交实验法；醇提取

[中图分类号] R94 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）01（a）-0009-03

红龙镇痛片为藏医古验方，由龙骨、印度獐牙菜、红花等十五味药组成，具有醒脑开窍、通络止痛的功效，原方收载于云丹嘉措的《藏医临床札记》，一百多年的临床应用证明，其对偏头痛、血管性头痛效果良好。对该药品原工艺中小部分药材进行提取，大部分药材直接粉碎入药，有效成分释放缓慢，同时因为原药材细粉入药，也影响到卫生学不合格的问题。本实验根据配方中药材所含化学成分的理化性质，选用不同的溶剂进行分开提取，保证药材中的药效成分能够被充分的提取出来。本研究将红龙镇痛片制剂前工艺分为以下3个部分。①醇提部分：印度獐牙菜、红花、金腰草、川西小黄菊、马尿泡、波棱瓜子6味药；②水提部分：铁棒锤、唐古特乌头、珍珠母、龙骨、泉华、石花、短穗兔耳草7味药；③粉碎部分：安息香、熊胆粉2味药。本研究着重对醇提两部分进行了工艺研究，采用正交试验，优选了最佳提取工艺。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

1.1.1 仪器 KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；高效液相色谱仪：日立L-2100泵，日立L-2400检测器；岛津AUW220D电子天平；HH-4数显恒温水浴锅（常州荣冠试验分析仪器厂）。

1.1.2 试药 药材由青海金珂藏药股份有限公司提供；獐牙菜苦苷对照品（0785-200303）由中国食品药品检定研究院提供；水为纯化水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

1.2 方法

本品原标准中以獐牙菜苦苷含量为含量测定项，因此本试验以獐牙菜苦苷提取率作为指标之一，进行了醇提工艺的考察。

1.2.1 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2%磷酸溶液（18∶82）为流动相；检测波长235 nm；进样量5 μl；流速1 ml/min，柱温室温[1]。

1.2.2 对照品溶液的制备 取獐牙菜苦苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含50 μg的溶液，摇匀，即得。

1.2.3 药材溶液的制备 取印度獐牙菜药材细粉约0.5 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超声处理40 min，取出，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.2.4 供试品溶液的制备 取实验制得样品细粉约1.0 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超声处理40 min，取出，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.2.5 醇浓度筛选 取印度獐牙菜20.1 g、红花20.1 g、金腰草4.2 g、川西小黄菊20.1 g、马尿泡4.05 g、波棱瓜子4.05 g，6味药材混合共计72.6 g，共取4份，分别加入8倍量35%、55%、75%、95%乙醇回流提取2次，每次2 h，滤过，滤液浓缩干燥，研细，按“1.2.4”项下制备供试品溶液，测定獐牙菜苦苷含量，计算提取率。

1.2.6 正交试验 为进一步优选醇提最佳工艺，选定加醇量、提取时间和提取次数作为考察的三个因素，各取三个水平，以獐牙菜苦苷提取率及干膏得率为指标综合评分。正交试验设计见表1。

实验室中的提取时间是由提取次数确定，提取时间由前往后依次进行。

称取印度獐牙菜等6味药材混合共计72.6 g，共取9份，按正交表顺序进行工艺试验，按“1.2.4”项下制备供试品溶液，测定獐牙菜苦苷含量，计算提取率。

2 结果

2.1 不同浓度乙醇獐牙菜苦苷提取率的比较

不同浓度乙醇獐牙菜苦苷提取率的比较具体结果见表2。结果表明，醇浓度越高，獐牙菜苦苷提取率越高，而75% 乙醇和95% 乙醇的提取效果差异较小，为保证药物中有效成分能最大限度的提取出来，同时也能够节约生产成本，确定采用浓度为75%乙醇进行提取。

印度獐牙菜药材中獐牙菜苦苷含量为0.70%

2.2 醇提正交试验

醇提正交试验直观分析具体见表3，醇提正交试验方差分析具体见表4。由方差分析结果看，三个因素对提取效果影响的作用次序为C>A>B，其中C因素对结果有显著性影响，即提取次数影响最大，加醇量次之，提取时间影响最小，再结合直观分析结果，确定醇提的最佳工艺参数为A2B1C3，即每次加8倍量75%乙醇回流提取3次，第一次提取2 h，第二、三次各提取1 h。

2.3 验证试验

按配方配比称取醇提药材共计363 g，共取3份，采用正交试验优选得到的条件进行醇提，测定獐牙菜苦苷提取率及干膏率，结果与正交试验基本一致，说明提取工艺条件稳定可行（表5）。

印度獐牙菜药材中獐牙菜苦苷含量为0.70%

3 讨论

方中金腰草、川西小黄菊中含黄酮类等有效成分[2-3]，马尿泡中含有生物碱类等成分[4]，波棱瓜子中含有木质素及油脂类成分等[5]，这些成分在醇中都有很好的溶解度，同时也有报道，印度獐牙菜[6]、红花[7]醇提效果也较好，因此本文将上述六味药合并进行醇提取，优选最佳提取方案。

本实验参考原标准以獐牙菜苦苷含量为主要指标，同时以干膏得率为次要指标，两者结合，综合评价，可以比较客观地反映各个因素及因素水平对提取工艺的影响。

本实验以最大程度提取药材中有效成分为原则，通过系统的研究得到最佳工艺为药材每次加8倍量75%乙醇回流提取3次，第一次提取2 h，第二、三次各提取1 h，验证结果表明此工艺稳定可行，适用于工业生产。

对本方原工艺中小部分药材进行提取，大部分药材直接粉碎入药，而传统藏药中很多成药都以药材粉末直接入药，存在生产方式粗放、质量较难控制等缺点[8]，因此，怎样将现代技术引入藏药的二次开发中，成为目前制约藏药发展的一个因素。通过本实验的研究，希望能为其他藏药品种的研发提供借鉴。

[参考文献]

[1] 国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编经络肢体脑系分册[M].北京：人民卫生出版社，2002：71.

[2] 王玉平，杨云裳，杨林西，等.藏药金腰草中黄酮诱导K562细胞凋亡及其分子机制研究[J].实用癌症杂志，2005， 20（4）：374-376.

[3] 杨爱梅，鲁润滑，师彦平.藏药川西小黄菊化学成分的研究[J].中药材，2007，30（5）：546-548

[4] 朱华勇，吴娟，黄帅，等.马尿泡化学成分的研究[J].华西药学杂志，2011，26（4）：305-307

[5] 徐冰.藏药波棱瓜子化学成分研究[D].重庆：西南大学，2012.

[6] 黄一平，毕丽丽，陈超，等.藏药印度獐牙菜提取工艺研究[J].中成药，2008，30（2）：190-192.

[7] 李璘，陆茵，马骋，等.红花醇提物对心肌缺血犬的血流动力的作用[J].中药药理与临床，2002，（6）：24-26.

[8] 曹越，孟宪纪. 藏药及其研究现状[J].甘肃中医，2004，17（10）：32-33.

（收稿日期：2013-10-15 本文编辑：林利利）

[摘要] 目的 优选红龙镇痛片的最佳提取工艺。 方法 采用正交实验法L9（34）分别以獐牙菜苦苷提取率和干膏得率作为考察指标，优选红龙镇痛片制备过程中的提取工艺。 结果 最终确定最佳醇提取工艺为每次加8倍量75%乙醇回流提取3次，第一次提取2 h，第二、三次各提取1 h。 结论 该制备工艺稳定、合理、可行。

[关键词] 红龙镇痛片；正交实验法；醇提取

[中图分类号] R94 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）01（a）-0009-03

红龙镇痛片为藏医古验方，由龙骨、印度獐牙菜、红花等十五味药组成，具有醒脑开窍、通络止痛的功效，原方收载于云丹嘉措的《藏医临床札记》，一百多年的临床应用证明，其对偏头痛、血管性头痛效果良好。对该药品原工艺中小部分药材进行提取，大部分药材直接粉碎入药，有效成分释放缓慢，同时因为原药材细粉入药，也影响到卫生学不合格的问题。本实验根据配方中药材所含化学成分的理化性质，选用不同的溶剂进行分开提取，保证药材中的药效成分能够被充分的提取出来。本研究将红龙镇痛片制剂前工艺分为以下3个部分。①醇提部分：印度獐牙菜、红花、金腰草、川西小黄菊、马尿泡、波棱瓜子6味药；②水提部分：铁棒锤、唐古特乌头、珍珠母、龙骨、泉华、石花、短穗兔耳草7味药；③粉碎部分：安息香、熊胆粉2味药。本研究着重对醇提两部分进行了工艺研究，采用正交试验，优选了最佳提取工艺。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

1.1.1 仪器 KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；高效液相色谱仪：日立L-2100泵，日立L-2400检测器；岛津AUW220D电子天平；HH-4数显恒温水浴锅（常州荣冠试验分析仪器厂）。

1.1.2 试药 药材由青海金珂藏药股份有限公司提供；獐牙菜苦苷对照品（0785-200303）由中国食品药品检定研究院提供；水为纯化水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

1.2 方法

本品原标准中以獐牙菜苦苷含量为含量测定项，因此本试验以獐牙菜苦苷提取率作为指标之一，进行了醇提工艺的考察。

1.2.1 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2%磷酸溶液（18∶82）为流动相；检测波长235 nm；进样量5 μl；流速1 ml/min，柱温室温[1]。

1.2.2 对照品溶液的制备 取獐牙菜苦苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含50 μg的溶液，摇匀，即得。

1.2.3 药材溶液的制备 取印度獐牙菜药材细粉约0.5 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超声处理40 min，取出，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.2.4 供试品溶液的制备 取实验制得样品细粉约1.0 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超声处理40 min，取出，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.2.5 醇浓度筛选 取印度獐牙菜20.1 g、红花20.1 g、金腰草4.2 g、川西小黄菊20.1 g、马尿泡4.05 g、波棱瓜子4.05 g，6味药材混合共计72.6 g，共取4份，分别加入8倍量35%、55%、75%、95%乙醇回流提取2次，每次2 h，滤过，滤液浓缩干燥，研细，按“1.2.4”项下制备供试品溶液，测定獐牙菜苦苷含量，计算提取率。

1.2.6 正交试验 为进一步优选醇提最佳工艺，选定加醇量、提取时间和提取次数作为考察的三个因素，各取三个水平，以獐牙菜苦苷提取率及干膏得率为指标综合评分。正交试验设计见表1。

实验室中的提取时间是由提取次数确定，提取时间由前往后依次进行。

称取印度獐牙菜等6味药材混合共计72.6 g，共取9份，按正交表顺序进行工艺试验，按“1.2.4”项下制备供试品溶液，测定獐牙菜苦苷含量，计算提取率。

2 结果

2.1 不同浓度乙醇獐牙菜苦苷提取率的比较

不同浓度乙醇獐牙菜苦苷提取率的比较具体结果见表2。结果表明，醇浓度越高，獐牙菜苦苷提取率越高，而75% 乙醇和95% 乙醇的提取效果差异较小，为保证药物中有效成分能最大限度的提取出来，同时也能够节约生产成本，确定采用浓度为75%乙醇进行提取。

印度獐牙菜药材中獐牙菜苦苷含量为0.70%

2.2 醇提正交试验

醇提正交试验直观分析具体见表3，醇提正交试验方差分析具体见表4。由方差分析结果看，三个因素对提取效果影响的作用次序为C>A>B，其中C因素对结果有显著性影响，即提取次数影响最大，加醇量次之，提取时间影响最小，再结合直观分析结果，确定醇提的最佳工艺参数为A2B1C3，即每次加8倍量75%乙醇回流提取3次，第一次提取2 h，第二、三次各提取1 h。

2.3 验证试验

按配方配比称取醇提药材共计363 g，共取3份，采用正交试验优选得到的条件进行醇提，测定獐牙菜苦苷提取率及干膏率，结果与正交试验基本一致，说明提取工艺条件稳定可行（表5）。

印度獐牙菜药材中獐牙菜苦苷含量为0.70%

3 讨论

方中金腰草、川西小黄菊中含黄酮类等有效成分[2-3]，马尿泡中含有生物碱类等成分[4]，波棱瓜子中含有木质素及油脂类成分等[5]，这些成分在醇中都有很好的溶解度，同时也有报道，印度獐牙菜[6]、红花[7]醇提效果也较好，因此本文将上述六味药合并进行醇提取，优选最佳提取方案。

本实验参考原标准以獐牙菜苦苷含量为主要指标，同时以干膏得率为次要指标，两者结合，综合评价，可以比较客观地反映各个因素及因素水平对提取工艺的影响。

本实验以最大程度提取药材中有效成分为原则，通过系统的研究得到最佳工艺为药材每次加8倍量75%乙醇回流提取3次，第一次提取2 h，第二、三次各提取1 h，验证结果表明此工艺稳定可行，适用于工业生产。

对本方原工艺中小部分药材进行提取，大部分药材直接粉碎入药，而传统藏药中很多成药都以药材粉末直接入药，存在生产方式粗放、质量较难控制等缺点[8]，因此，怎样将现代技术引入藏药的二次开发中，成为目前制约藏药发展的一个因素。通过本实验的研究，希望能为其他藏药品种的研发提供借鉴。

[参考文献]

[1] 国家药品监督管理局.国家中成药标准汇编经络肢体脑系分册[M].北京：人民卫生出版社，2002：71.

[2] 王玉平，杨云裳，杨林西，等.藏药金腰草中黄酮诱导K562细胞凋亡及其分子机制研究[J].实用癌症杂志，2005， 20（4）：374-376.

[3] 杨爱梅，鲁润滑，师彦平.藏药川西小黄菊化学成分的研究[J].中药材，2007，30（5）：546-548

[4] 朱华勇，吴娟，黄帅，等.马尿泡化学成分的研究[J].华西药学杂志，2011，26（4）：305-307

[5] 徐冰.藏药波棱瓜子化学成分研究[D].重庆：西南大学，2012.

[6] 黄一平，毕丽丽，陈超，等.藏药印度獐牙菜提取工艺研究[J].中成药，2008，30（2）：190-192.

[7] 李璘，陆茵，马骋，等.红花醇提物对心肌缺血犬的血流动力的作用[J].中药药理与临床，2002，（6）：24-26.

[8] 曹越，孟宪纪. 藏药及其研究现状[J].甘肃中医，2004，17（10）：32-33.

（收稿日期：2013-10-15 本文编辑：林利利）