开产麻鸭坦布苏病毒感染的诊断

林贵富

（1.江西省赣州市章贡区农业和粮食局能源办，赣州341004；2.江西省赣州市章贡区农业和粮食局动物防疫检疫站，赣州341004；3.福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州350013）

开产麻鸭坦布苏病毒感染的诊断

谢海军1林贵富1蔡小敏2陈红梅3 傅光华3

（1.江西省赣州市章贡区农业和粮食局能源办，赣州341004；2.江西省赣州市章贡区农业和粮食局动物防疫检疫站，赣州341004；3.福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州350013）

2013年9月，江西省赣州市章贡区沙石镇东风村某养殖户饲养的220日龄麻鸭2 100余羽，产蛋率在一周内从87%降至15%左右，共死亡11羽。经过临床流行病学调查和实验室检测确定该病为鸭坦布苏病毒病。

麻鸭鸭坦布苏病毒诊断

2013年9月，江西省赣州市章贡区沙石镇东风村某养殖户饲养的220日龄麻鸭2 100余羽，产蛋率在一周内从87%降至15%左右，共死亡11羽。经过临床流行病学调查和实验室检测确定该病例为鸭坦布苏病毒病。现将具体的诊治情况报道如下。

1 临床症状

患鸭表现精神沉郁、食欲减退，有的患鸭排绿色稀粪。

2 病理变化

剖检病死鸭可见卵泡膜出血，卵泡变性、液化，有的卵泡破裂；肝脏局灶性出血、脑组织轻度出血；其他脏器无肉眼可见病变。

3 实验室检查

3.1 细菌分离无菌取病死鸭的脑组织，接种血琼脂平板于37℃温箱有氧条件下和烛罐中分别培养24～48 h，结果培养48 h后未见细菌生长。

3.2 病毒分离与鉴定对严重出血、坏死的卵泡膜按照组织重量1∶4加入灭菌PBS缓冲液，匀浆后反复冻融3次，10 000 r/min离心5 min，取上清液用220 nm滤膜过滤，滤液经尿囊腔接种11胚龄番鸭胚，每枚胚0.5 mL，每天观察2次，另设空白对照，收集24～96 h死亡鸭胚的胚液，进行细菌污染检验和鸡红细胞凝集试验，结果无细菌污染，也无血凝活性，置-20℃保存备用。

取病毒液按10 000 r/min、4℃离心10 min以去除杂质，收集上清液参照TRIzol说明书操作对病毒RNA进行提取，最后每250μL尿囊液的病毒RNA用5μL DEPC水溶解。反转录按M-MLV Reverse Transcriptase说明书进行。

参照鸭I型副粘病毒、鸭呼肠孤病毒、禽流感病毒、鸭坦布苏病毒、减蛋综合征病毒的检测引物进行PCR检测。扩增体系为50μL，其中2×GoTaq Master Green Mix 25μL、上下游引物（20μm/mL）各1μL、c DNA模板1μL，补充灭菌去离子水至总体积50μL。反应程序是94℃5 min；94℃30 s、53℃30 s、72℃45 s，35个循环；72℃10 min。取PCR产物5μL，在1.0%琼脂糖凝胶上电泳，应用凝胶成像系统进行观察拍照。结果表明，用鸭坦布苏病毒特异性引物可扩增到1条约330 bp的特异性片段（见图1），而鸭I型副粘病毒、鸭呼肠孤病毒、禽流感病毒、减蛋综合征病毒未扩增到相应片段。

图1 所分离病毒的RT-PCR鉴定（注：M：DL 2 000 Marker；1：所分离病毒的扩增结果；2：鸭I型副粘病毒；3：鸭呼肠孤病毒；4：禽流感；5：减蛋综合征病毒；6：空白对照）

4 诊断

据该麻鸭场的发病情况、临床症状、剖检病变以及实验室检测结果，确诊所送检的病例为鸭坦布苏病毒病。

5 小结与讨论

1）2010年4月，鸭坦布苏病毒病作为一种新发疫病首先发现于浙江、福建等地[1]，随后在华东、华南、华北、华中等地区流行[2-5]，对我国养鸭业造成严重的经济损失。该病病原是鸭坦布苏病毒，是一种危害我国种鸭、蛋鸭的新病毒，该病毒几乎可感染所有品种的鸭，其中对麻鸭的致病力最强，主要侵害鸭的生殖系统，致使种（蛋）鸭发热、采食量和产蛋量急剧下降。

2）对于鸭坦布苏病毒病的诊断，可根据鸭群的发病情况、临床症状、剖检病变进行初步的判断，再经过实验室检查进行确诊。实验室诊断方法很多，其中最实用、快速的还是RT-PCR[6]方法，即简单、快捷地检测病料以达到迅速诊断的目的，为患鸭群的后续治疗赢得宝贵的时间。

3）目前针对该病的预防用疫苗还处于研究阶段，对发病鸭群在确诊的前提下，通过饮水或饲料途径投放抗病毒药物进行治疗，同时添加多维、多糖等以提高鸭群的免疫力，使用广谱抗生素以防止继发细菌感染。

[1]曹贞贞，张存，黄瑜，等．鸭出血性卵巢炎的初步研究[J]．中国兽医杂志，2010，46（12）：3-6．

[2]万春和，施少华，程龙飞，等．一种引起种（蛋）鸭产蛋骤降新病毒的分离与初步鉴定[J]．福建农业学报，2010，25（6）：663-666．

[3]滕巧泱，颜丕熙，张旭，等．一种新的黄病毒导致蛋鸭产蛋下降及死亡[J]．中国动物传染病学报，2010，18（6）：1-4．

[4]廖敏，牟小东，耿阳，等．鸭传染性产蛋减少症（暂定名）的病原分离初报[J]．中国动物传染病学报，2011，19（1）：22-26．

[5]刘友生，彭春香，黄瑜，等．2010-2011年我国部分地区鸭坦布苏病毒感染及分子变异分析[J]．中国动物传染病学报，2012，20（1）：47-53．

[6]万春和，施少华，程龙飞，等．鸭出血性卵巢炎病毒RTPCR检测方法的建立[J]．福建农业学报，2011，26（1）：10-12．

B

1003-4331（2014）04-0074-02