维药强力玛得土力阿亚特蜜膏治疗脑血栓及其作用机理研究❋

徐金凤，吕书勤，刘宏炳，张 倩，杨建波，孙 薇，张震中

(新疆医科大学附属中医医院神内二科，乌鲁木齐 830001)

目前，脑中风的高发病率、高死亡率、高致残率、高复发率严重危害人类健康，特别是老年人，一直受到广大临床和基础科研工作者的高度重视。据不完全统计，57%～80%为缺血性脑卒中[1]。本研究使用维药强力玛得土力阿亚特蜜膏即是从调节异常黑胆质体液辨证，使用传统蜜膏制剂治疗脑血栓疾病，主要基于对这种异常体液质进行基础实验研究,试图发现其有效的作用机制和治疗途径。

1 材料与方法

1.1 材料

维药强力玛得土力阿亚特蜜膏由新疆维吾尔自治区维吾尔医医院药剂科负责执行制备；步长脑心通胶囊0.4 g/粒购自咸阳步长制药有限公司(批号20120622)；肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)试剂盒由中国人民总军总医院科技开发中心放免所提供；细胞黏附因子(ICAM-1)试剂盒购自晶美生物工程有限公司；瑞士 HAMILT MICROLAB STAR 酶联仪由江苏省医疗电子研究所提供；YZ20T4型手术显微镜购自苏州医疗器械总厂。

1.2 实验方法

1.2.1 动物模型制备 SD雄性大鼠60只，体质量250±20 g，由新疆医科大学动物实验中心提供。参照 Longa 等[2]报道的实验过程，改良后制作MCAO(大脑中动脉栓塞)模型。模型组大鼠的制备与脑梗死模型的制备基本相同,其区别在于栓线由颈外动脉的断端插入颈内动脉后,保留1 min左右,就将栓线拔出,将颈外动脉断端结扎,其余同脑梗死模型组的制备。

1.2.2 实验分组 将 60 只SD 雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组(15只),给予正常饲料，自由饮水;模型组(15只)造模成功后生理盐水灌胃;阳性药物组造模成功后步长脑心通水溶液灌胃;治疗药物组(15只)造模后给予强力玛得土力阿亚特蜜膏灌胃，后3组造模采用线栓法制成MCAO(大脑中动脉栓塞)模型(15只)。

1.2.3 标本采取与观察指标 造模成功后动物分组，分别连续灌胃7 d。末次灌胃后1 h，用氯胺酮、安定及阿托品各1支配伍稀释至10 ml(0.75 ml/100 g)腹腔注射麻醉，打开腹腔，经腹主动脉取血3～4 ml，待其凝固后以3000 r/min离心 10 min，血清分离，用移液器吸取血清移入 EP 管，-80 ℃冰箱保存，以备测ICAM-1活性、IL-1β、TNF-α的含量和水平。经腹主动脉取血后，断头开颅取出脑组织，用生理盐水冲洗，将残血洗净用滤纸吸干水分，部位选右侧大脑额叶皮层同一部位取脑组织 100 mg 左右，按照 100 mg/1 ml 比例加入生理盐水用匀浆器溶浆 3～5 min，同样方法离心并保存，以备测定脑组织ICAM-1的活性、IL-1β、TNF-α的含量及水平。

大鼠断头取脑后，各组随机留取2只SD大鼠，切除其额极和枕极，于-20 ℃冰箱中速冻2～3 min后，再行冠状切片, 以2 mm的间距切片，将其浸入2%TTC的磷酸盐缓冲溶液中，避光染色30 min，在37 ℃的水浴箱中进行。将制作好的脑片取出后放入10%的甲醛溶液中固定24 h，再用数码相机拍照。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 对局灶性脑缺血大鼠血清中TNF-α、IL-1β、ICAM-1的测定

表1显示，治疗药物组强力玛得土力阿亚特蜜膏组和阳性药物组步长脑心通组与模型组比较，差异有统计学意义(P<0.01，P<0.05)，但治疗药物组强力玛得土力阿亚特蜜膏组和阳性药物组步长脑心通组比较，差异均无统计学意义。

表1 对血清TNF-α、IL-1β、ICAM-1含量的影响

注：与假手术组比较：*P<0.001；与模型组比较：**P<0.05，△P<0.01

2.2 对局灶性脑缺血大鼠脑组织溶浆TNF-α、IL-1β、ICAM-1的测定

表2显示，药物组强力玛得土力阿亚特蜜膏组和阳性药物组步长脑心通组与模型组比较，差异有统计学意义(P<0.01，P<0.05)，但药物组强力玛得土力阿亚特蜜膏组和阳性药物组步长脑心通组比较，差异均无统计学意义。

表2 对脑组织溶浆TNF-α、IL-1β、ICAM-1含量的影响

注：与假手术组比较：*P<0.001；与模型组比较：**P<0.05，△P<0.01

2.3 大鼠TTC染色比较

图1～3显示，大鼠脑组织切片可见，脑组织呈红白区域交界，缺血坏死区颜色呈白色，正常脑组织区域呈红色。模型组可见白色区域较多，提示缺血面积较大(见图1)；步长脑心通胶囊组白色区域较模型组明显缩小，提示脑组织缺血面积较模型组有明显减少(见图1、2)；维药强力玛得土力阿亚特蜜膏组白色区域较模型组明显缩小，较步长脑心通胶囊组白色区域变化不大，提示较模型组其缺血面积较明显减少，较阳性药物步长脑心通胶囊组脑组织缺血面积变化不大。

图1 模型组

图2 步长脑心通胶囊组

图3 维药强力组

3 讨论

缺血性脑中风是一种高发病，严重危害人类尤其是老年人的身体健康，给家庭和社会带来了沉重的负担，而临床上缺血性脑中风最常见的发病部位是大脑中动脉的闭塞，这与大脑中动脉特殊的生理解剖结构相关[3,4]。对于缺血性脑中风，现代医学研究有很多成果，但目前尚没有确切快捷有效的治疗方法。缺血性脑中风急性期对脑组织的损害程度不同，结果也不同，它影响到以后病情的发展及机体功能康复的程度。如何减轻早期脑损伤对于缺血性脑中风死亡率的降低、致残率的减少、各类并发症的出现减少发生具有很重要的现实意义。当前有关脑损伤急性期的相关原因很多，也有不少研究者发现这种情况,许多细胞因子介导出现在炎症反应之前，如ICAM-1、IL-1β、TNF-α的表达。在目前现状下,中医民族医治疗本病具有一定优势, 对此我们从维吾尔医角度进行研究,用药干预后再深入探讨缺血性中风病的病理机制,从而寻找安全、有效的治疗方法，这样缓解脑中风引起的神经功能缺损症状、预防脑中风的复发有着很重要的意义[5]。

为研究缺血性脑中风的发病规律和发病机制，研究者依据临床缺血性脑中风病人的一般情况，成功创建了很多局灶性的脑缺血动物模型。MCAO大脑中动脉线栓法是由Zea Longa首创的，该模型的目的是阻断流向基底节区、额顶皮质区的大部分血供，通过阻断解剖结构特殊的大脑中动脉，将栓线通过颈内动脉达到大脑中动脉，阻塞MCA的开口处[6]。按照大脑中动脉线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型，实验动物状态稳定，重复性好、成模率高。

“维药强力玛得土力阿亚特蜜膏”出自维医经典医著《如意处方》,属《中华人民共和国卫生部药品标准·维吾尔药分册》1999年第一版收载品种，是维医临床常用传统古方[7]。本药是由新疆维吾尔自治区维吾尔医医院药剂科负责执行制备，在传统医方基础上，经现代生产工艺加工制成的现代维药。 维药强力玛得土力阿亚特蜜膏是由干姜、胡椒(黑)、荜拨、肉桂、余甘子、毛诃子肉、白花丹、广防

己、中亚白及、奶桃、白皮松子仁、洋甘菊、洋甘菊子、葡萄干(红)流浸膏等药物组成，性状为棕色蜜膏，气特异、味甜、辛、微辣，具有强壮肌体、止痛、益肾、补脑之功效，用于偏瘫、关节骨痛、痴呆舌重、腰酸阳痿、齿松等。

本研究利用药物组强力玛得土力阿亚特蜜膏组和阳性药物组步长脑心通组治疗脑血栓，结果证实维药强力玛得土力阿亚特蜜膏可改善MCAO大鼠神经功能缺损症状，减少脑梗死面积，减轻脑组织病理学损伤的改变;可以通过抑制TNF-α、IL-1β、ICAM-1的产生,达到缓解缺血缺氧后炎症级联反应,从而控制局部组织水肿和坏死的发生,间接地达到保护神经细胞的作用，可能是维药强力玛得土力阿亚特蜜膏治疗脑缺血疾病的基础。

综上所述，维药强力玛得土力阿亚特蜜膏对SD大鼠局灶性脑缺血模型具有保护作用，其机制可能与抑制脑缺血后多种炎症相关细胞因子ICAM-1、IL-1β、TNF-α、的级联性表达有关。

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