1312例妇女人乳头瘤病毒(HPV)感染状况及其亚型分布情况调查

孔令和，柯云霞，高素香，黄洁，杨剑，雷桂萍，史国香

(九江市第三医院，江西九江332000)

·调查报告·

1312例妇女人乳头瘤病毒(HPV)感染状况及其亚型分布情况调查

孔令和，柯云霞，高素香，黄洁，杨剑，雷桂萍，史国香

(九江市第三医院，江西九江332000)

目的探讨我院2013年门诊人群感染人乳头瘤病毒(HPV)的流行情况及感染的亚型分布情况。方法采用凯普医用核酸分子杂交系统对我院的1312例妇科患者进行HPV21分型检测。结果在1312例研究对象中，HPV感染总阳性率为29.4%，最常见的高危感染亚型分别是16、58、18型；最常见的低危感染亚型分别是6型、11型。HPV单一感染和多重感染的阳性率分别为77.5%和22.5%，多重感染主要以二重感染为主，阳性率为16%。研究人群中40～50岁的阳性率最高，其次是30～40岁。结论九江地区最常见的HPV亚型是16亚型;多重感染主要是以二重感染为主；40～50岁是感染的高峰人群，对患有HPV病毒的患者进行定期的跟踪随访，有助于预防尖锐湿疣和宫颈癌的发生。

人乳头瘤病毒；年龄分布；单一感染

DOI∶10.3969/j.issn.1674-1129.2014.06.054

人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)自上世纪70年代被发现与宫颈癌相关以来，一直备受人们关注。据调查分析[1，2]，HPV在宫颈细胞异常及宫颈癌的病理学上具有最为重要的作用。HPV是一双链闭合环状的DNA病毒分子，它容易侵犯鳞状上皮的基底层细胞以及位于宫颈鳞-柱交界处的增生性细胞，主要是通过性传播、皮肤传播、接触污物等途径进入人体内。本篇文章主要是研究了不同年龄段的女性感染HPV的亚型的分布情况，为本地区的HPV疫苗的研发和宫颈癌的筛查提供一定的参考价值。

1 资料与方法

1.1 对象收集2013年3月至2014年3月九江市第三人民医院就诊的门诊患者与住院患者共1312例，并对他们进行HPV基因分型检测，年龄18～89岁，平均年龄为39.5±4.24岁。

1.2 标本采集用洁净生理盐水湿棉签除去女性子宫颈口分泌物，然后取专用洁净毛刷(凯普公司提供)伸入宫颈内稍加用力转动，取含有上皮细胞的标本，

1.3 仪器和试剂美国ABI2720型PCR扩增仪、凯普医用核酸分子快速杂交仪、凯普公司人乳头瘤病毒核酸扩增分型检测试剂盒。

1.4 操作步骤

1.4.1 病原体DNA提取在采样管里取500μl临床样本，14000r/min离心5min，去上清液。加400μl溶液I(溶液I需在45℃水浴中预热)混匀，100℃煮15min，加入400μl溶液Ⅱ，混匀室温放置2min，14000r/min离心5min，去上清液，14000r/min离心1min，去上清液(务必吸干净)，加60μl溶液Ⅲ充分溶解，14000r/min离心5min。取1μl样品扩增，1人份PCR反应体系为25μl(即Premix∶23.5μl、Taq酶：0.75μl)。扩增程序：(温度速率为1℃/s)20℃(10min)→95℃(9min)→95℃(20s)→55℃(30s)→72℃(30s)→72℃(5min)40个循环。

1.4.2 HPV-DNA杂交扩增后产物各反应管放入PCR扩增仪95℃变性5min(迅速放入冰盒中2min以上)，放置杂交膜，加入杂交液0.8ml(预杂交45℃2min以上)，排杂交液，加杂交液0.5ml,将PCR产物加入各反应槽立即混匀，杂交45℃10min排液，杂交液0.8ml清洗3次(清洗第二次时温度调到25℃)，加封阻液0.5ml，放置5min排液,加酶标液0.5ml，放置5min排液,溶液A0.8ml清洗四次(清洗第二次时温度调到36℃)，加显色液0.5ml,盖好杂交仪盖子，放置5min，加溶液B0.8ml(需45℃加热)清洗三次。

1.5 统计学分析采用SPSS19.0统计软件进行统计分析，率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 1312例标本结果HPV21分型检测结果1312例标本中有386例阳性，阳性率为29.4%。在386例样本中，单重高危型有269例，占69.7%(269／386)；单重低危型有30例，占7.8%(30／386)；多重感染有87例，占22.5%(87／386)；其中16型最多，有106例，占27.5%，其次为HPV58型，共50例，占15.0%，HPVl8型阳性率为5．1%，HPV6型阳性率为7．8%，HPV 11型阳性率为6.9%。高危型占了67．7%，远高于低危型(15.8%)，二者阳性率差异有统计学意义性(P＜0.01)。见表1。

表1 299人次HPV单重感染患者的21分型的分布

2.2 单重感染与多重感染的构成比386例HPV阳性患者中，单一感染有299例，占77.5%，多重感染有87例，占22.5%。其中多重感染主要是以二重感染为主，为62例(16%)，并且二重感染大部分是以16型+其他型别，所以无论是单一感染还是多重感染都以感染16亚型为主，见表2。

表2 HPV多重感染情况

2.3 1312例患者不同年龄HPV21亚型感染的情况1312例标本中共分为八组(＜20岁、21～30岁、31～40岁、41～50岁、51～60岁、61～70岁、70岁以上、无年龄信息组)，总阳性有386例，阳性率为29.4%(386／1312)。其中＜20岁检测了6例，阳性2例，阳性率为33.3%(2／6)；21～30岁检测了155例标本，阳性40例，阳性率为25.8%(40／155)；31～40岁检测了359例，阳性93例，阳性率为25.9(93／359)；41～50岁检测了442例，阳性126例，阳性率为28.5%(126／442)；51～60岁检测了151例，阳性55例，阳性率为36.4%(55／151)；61～70岁检测了59例，阳性26例，阳性率为44.1%(26／59)；70岁以上检测了33例，阳性19例，阳性率为57.6%；无年信息龄组检测了107例，阳性25例，阳性率为23.4%(25／107)。见表3。

表3 各年龄段的HPV感染21分型的情况

3 讨论

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率居全球恶性肿瘤第二位。相比于其他的恶性肿瘤，宫颈癌的病因比较明确，能够有效预防、发现并且能早期治疗的癌症[3,4]。早在上世纪70年代楚尔·豪森首先提出了HPV与宫颈癌具有相关性的假说，他先后完成了从生殖器疣中分离HPV6和宫颈癌组织中分离HPV16、18核酸的分析，而HPV的核酸检测引入我国的各大医院的门诊人群的筛查是在上世纪90年代乔友林教授的带领下实现的。许多报道和文献中都得出了高危型人乳头瘤病毒的持续感染是宫颈癌发生的必要条件[5]。

HPV的分型检测对宫颈癌变的预防和治疗具有重要的价值[6]。本结果显示，我院门诊最常见的感染HPV的亚型分别是16(18.7%)、58(12.9%)、18 (5.1%)、6(7.8%)和11(6.9%)型，而浙江地区分别是16、11、58和6型为主，武汉地区分别是16、11、6和18型为主。总的来说不同的地区感染的HPV亚型分布存在一定的相同点[2，6]。从本篇文章的统计中可以了解到，九江地区仍然是以16型高危型的HPV感染为主，并且年龄在40至50岁之间为高发人群，可能存在的原因是中年妇女存在性活跃期并且抗病毒能力低于青年女性导致感染的几率更大，所以提倡在此年龄段的妇女进行定期检查，预防宫颈病变和癌变的发生[7]。数据结果显示高危型中有其他型别的高检出率，58、18型的感染几率较高同样可以说明该地区高危型别存在较高的感染[8,9]，并且HPV的单重感染和二重感染的阳性率分别为77.5%和16.0%，Ho等研究认为持续性多重感染的危害性更大，与单一感染的情况来看，HPV的多重感染更难清除，宫颈病变的概率更高[10]。总之，HPV高危型和多重感染与宫颈癌变具有密切的关系，从九江地区的高危型的阳性率高的情况表明，我们应该在该地区加大HPV持续感染与宫颈癌有关的宣传力度，进一步推进宫颈癌筛查的普遍化，提高早期的宫颈癌检出率，减少死亡病例的发生。

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R737.33

A

1674-1129(2014)06-0780-03

2014-09-17；

2014-11-07)