南昌血站病毒灭活血浆制品主要质量控制指标的分析

钱献，杨南

(南昌市中心血站，江西南昌330025)

南昌血站病毒灭活血浆制品主要质量控制指标的分析

钱献，杨南

(南昌市中心血站，江西南昌330025)

目的了解本血站经亚甲蓝/光化学法病毒灭活后，新鲜冰冻血浆、冷沉淀、冷上清中总蛋白、纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ的含量是否符合《全血及成份血质量要求》(GB18649-2012)的质量要求。方法随机采集100袋新鲜冰冻血浆，经亚甲蓝/光化学法病毒灭活过滤后留取1份标本(病毒灭活新鲜冰冻血浆实验组)，解冻后制备冷沉淀前各留取1份标本(病毒灭活新鲜冰冻血浆实验组)，采用改良快速融化离心法制备冷沉淀后各留取1份标本(冷沉淀实验组)，留取冷上清标本各1份(冷上清实验组)，三个实验组分别检测总蛋白、纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ含量。结果病毒灭活新鲜冰冻血浆总蛋白和凝血因子Ⅷ含量分别为57.7g/L、0.66IU/ml,冷沉淀的纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ含量分别为154.4mg/袋、87.8IU/袋，冷上清的总蛋白含量为46.3g/L。结论本站制备的病毒灭活新鲜冰冻血浆、冷沉淀符合《全血及成份血质量要求》(GB18649-2012)的质量要求，冷上清的血浆蛋白含量不足，不能标注为病毒灭活冰冻血浆在临床上使用。

新鲜冰冻血浆；冷沉淀；冷上清；蛋白；凝血因子

由于ELISA、NAT检测技术的局限性、检测项目的有限性,即使通过加强对低危献血者的招募和血液的筛选，仍不可能完全避免经血传播病原体的漏检，为有效降低疾病经血传播的风险，亚甲蓝/光化学法用于血浆病毒灭活在中国血站系统已得到广泛采用。南昌血站于2009年开展亚甲蓝/光化学法制备病毒灭活血浆，目前病毒灭活血浆已在南昌市各医院得到广泛应用，为进一步改进病毒灭活血浆的制备方法、规范质量控制，本站随机抽取200份经过亚甲蓝/光化学法进行病毒灭活处理的血浆样本，进行质量指标检测。

1 材料与方法

1.1 研究对象随机抽取符合《献血者健康检查标准》的无偿献血者血样100份，使用ACD-B保养液血袋采集血液。

1.2 试剂与仪器ZBK-YBM-01医用血浆病毒灭活柜(山东淄博中保康医疗器具公司)，HXL血液滤白柜(青岛海尔公司)，WG-G型低温操作柜(山东威高集团医用高分子制品公司)，SDJ-20血浆速冻机(天津天商冰冻科技有限公司)；KJX-111冰冻血浆解冻箱(苏州医用仪器厂)，Thermo CRYOFUGE6000i大容量离心机(赛默飞世尔科技公司)，WG-JGJ-I型无菌接管机(山东威高集团医用高分子制品公司)，FB-20型血凝仪(山西亚森)，超低温冰箱MDF-U50V(日本SANYO公司)。总蛋白测定试剂盒(四川迈克生物科技公司)，凝血因子Ⅷ促凝活性检测试剂盒、纤维蛋白原检测试剂盒(成都协和生物技术公司)，一次性使用病毒灭活装置配套用输血过滤器(山东淄博中保康医疗器具公司)。

1.3 方法血液采集后4h内按照标准操作规程分离新鲜血浆，向血浆中加入一定量亚甲蓝，混匀后使亚甲蓝最终浓度为1μg/ml，25 000～40 000 Lx光照强度的可见光照射35min，病毒灭活柜的温度保持为5℃，将经过光照后的血浆通过病毒灭活过滤器去除残余的亚甲蓝和白细胞后，各留取1份2ml标本(病毒灭活FFP实验组)，血浆连同留取的标本置于-50℃血浆速冻机速冻2h后保存于-30℃，48h后，标本(病毒灭活FFP实验组)置于37℃解冻，解冻后检测总蛋白、凝血因子Ⅷ含量，病毒灭活FFP采用改良快速融化离心法制备冷沉淀，制备好的冷沉淀各留取1份2ml标本(冷沉淀实验组)，检测纤维蛋白原、凝血因子Ⅷ含量，去除冷沉淀后的血浆各留取1份2ml标本(冷上清实验组)检测总蛋白含量。

1.4 统计学分析样本测定结果采用IBM SPSS Statistics v19进行统计，剔除离群值，所得结果用x±s表示。由于本次研究只分析样品测定结果是否符合国家标准下限值，而非样本均数与总体均数的比较，所以不需要进行统计学比较。

2 结果

检测得三种病毒灭活血浆制品主要质量指标与国家标准的比较见表1。

表1 三种病毒灭活血浆制品主要质量指标与国家标准的比较

病毒灭活新鲜冰冻血浆总蛋白和凝血因子Ⅷ含量分别为57.7g/L、0.66IU/ml,冷沉淀的纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ含量分别为154.4mg/袋、87.8IU/袋，符合《全血及成份血质量要求》(GB18649-2012)的质量要求，冷上清的总蛋白含量为46.3g/L，低于国家标准≥50g/L的要求。

3 讨论

亚甲蓝可与病毒核酸的鸟嘌呤以及病毒的脂质包膜相结合，在可见光的作用下，可使病毒的核酸断裂，包膜破损，使病毒完全失去穿透、复制及感染能力，从而达到灭活病毒的目的。亚甲蓝/光化学法用于血浆病毒灭活在中国血站系统已得到广泛采用，其效果与安全性已得到广泛的验证。

病毒灭活新鲜冰冻血浆富含多种凝血因子，特别是凝血因子Ⅷ，因此主要用于补充凝血因子特别是不稳定因子，起止凝血作用，如甲乙型血友病患者出血，大容量的血浆置换，大面积烧伤体液外渗等。冷沉淀含有大量的凝血因子Ⅷ、血管性血友病因子(vWF)、纤维蛋白原、纤维结合蛋白，因容量小，有效成分浓度高，可以快速输入迅速提升体内的凝血因子水平，主要用于补充纤维蛋白原缺乏症和甲型血友病患者出血[1-4]。有研究表明[5,6]经过病毒灭活后，灭活病毒新鲜冰冻血浆与冷沉淀各种有效成份均有不同程度的下降，但没有统计学上的差异，本站制备的病毒灭活新鲜冰冻血浆总蛋白和凝血因子Ⅷ含量分别为57.7g/L、0.66IU/ml，冷沉淀的纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ含量分别为154.4mg/袋、87.8IU/袋，符合国家标准。目前冷沉淀的制备，有的血站从病毒灭活新鲜冰冻血浆制备，有的血站认为从新鲜冰冻血浆制备可以获得更高的质量指标，但是从安全输血的角度来看，冷沉淀输注量大，传染病毒的风险显然较高，因此采用病毒灭活新鲜冰冻血浆制备冷沉淀就显得更为安全。

与病毒灭活新鲜冰冻血浆与冷沉淀相比较，冷上清其不稳定凝血因子、稳定凝血因子、vWF和血浆蛋白的含量都明显较低[5-7]，本站冷上清的总蛋白含量为46.3g/L，低于国家标准≥50g/L的要求，因此不能把冷上清标识为普通冰冻血浆而应用于临床。而英国血液学标准委员会输血工作组于2004年发布的英国血液学标准委员会输血特别委员会在《新鲜冰冻血浆、冷沉淀和冷上清使用指南》中亦指出：冷上清血浆去除了Ⅷ因子和纤维蛋白原，缺乏vWF大分子量多聚体，但含有vWF金属蛋白酶[8]，血栓性微血管疾病(TTP)是由于患者体内vWF金属蛋白酶活性的严重缺乏而致使vWF不能水解，从而形成超大vWF多聚体，后者可直接导致血小板聚集，很多临床研究[9-11]也表明，冷上清在治疗方面有确切的疗效，如果能明确vWF金属蛋白酶、vWF大分子量多聚体的质量标准，就能成为一种新型的成分血，从而能充分利用宝贵的血液资源。

[1]杨成民.基础输血学[M].北京:中国科学技术出版社,2001:674.

[2]肖星甫.输血技术手册[M].成都:四川科学技术出版社,1992:272.

[3]傅平,杨爱莲,张宏.冷沉淀在治疗大量失血患者中的应用[J].实验与检验医学,2009,27(6):610-618.

[4]池春燕,林力红.外科DIC患者输注冷沉淀凝血因子的疗效观察[J].实验与检验医学,2014,32(1):53-56.

[5]陈爱华,刘永梅.病毒灭活血浆中主要质量指标及亚甲蓝残留量的检测分析[J].国际检验医学杂志,2013,34(14)1811-1812.

[6]黎添华,劳丽嫦,邢启明.病毒灭活FFP提取冷沉淀凝血因子中主要成分含量分析[J].中外医学研究,2013,11(23):151-152.

[7]姚根宏.冷沉淀中血管性血友病因子含量测定及意义[J].中国输血杂志,2012,25(9):853-854.

[8]成都血液中心组稿.新鲜冰冻血浆、冷沉淀和冷上清使用指南[J].四川:国外医学输血与血液学分册,2004,27(5):463-470.

[9]孙先玲,吕运来,马红丽,等.冷上清做置换液置换治疗栓性血小板减少性紫癜[J].中国输血杂志,2004,17(1):39-40.

[10]李忠俊.血浆置换治疗血栓性血小板减少性紫癜的临床研究[J].重庆医学,2007,36(17):1728．

[11]汪安友,董宁征,阮长耿.血栓性血小板减少性紫癜的研究进展[J].国际输血及血液学杂志,2008,3l(3):257-260.

R457.1+4

A

1674-1129(2014)04-0432-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.04.023

2014-04-02；

2014-06-17)

杨南。