自建胱抑素C检测系统分析性能的评价

王志勇，顾桂兰，李友建，姚扬美，金灿灿（扬州大学附属泰兴医院检验科，江苏泰兴 225400）

胱抑素C存在于人体大多数体液中。由于它相对分子质量低（13.3×103）和在生理pH值中带正电的特性，可以自由地从肾小球完全滤过，在近端肾小管几乎完全再吸收及分解，其浓度亦不受感染、肝脏疾病或免疫因素等影响，血液中胱抑素C浓度完全取决于肾小球滤过能力[1]。因此，许多研究认为其可作为新的肾小球滤过率（GFR）评估指标[2－3]。本研究参考美国临床和实验室标准委员会（CLSI）的EP－5A2（临床化学设备精密度性能的评价）[4]，EP－6A（定量分析方法线性的评价）[5]，EP－9A2（用患者标本的方法比较和偏差的估计）[6]评价方案对国产试剂结合日立7600全自动生化分析仪建立的检测系统的分析性能进行了评价，并将其与进口检测系统进行比对，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 日立7600－020全自动生化分析仪购自日本日立公司；宁波美康胱抑素C检测试剂盒（批号：20130312）及配套校准品（批号：20130312）购自宁波美康公司；西门子BN PROSPEC全自动特定蛋白仪，西门子胱抑素C检测试剂盒（批号：167845）及配套校准品（批号：049858）均购自西门子公司。

1.2 方法 参照美国临床与实验室标准委员会系列评估方案EP－10A、EP－5A2、EP－6A，对试剂的不精密度、线性、检测限进行评估，参照EP－9A2方案与西门子检测系统进行比对。

1.2.1 不精密度 参考EP－5A2文件，采用国产试剂对低、中、高3份混合血浆，连续测定10d，每天测定两批，批间间隔的时间不少于2h，每批对样品做双份测定，取均值，计算批内、批间、天间及总不精密度。

1.2.2 线性分析 取异常高值混合血浆1份，正常值混合血浆1份，分别按1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2和9∶1混合，加上未混合的两份标本，共计11份，随机排列，各检测两次。

1.2.3 最低检测限 连续10d测定空白标本，每天测定2次，测定结果的均值加3倍标准差即为最低检测限。

1.2.4 稳定性试验 将试剂开瓶后放入4℃冰箱，每日取出进行标本检测，观察其试剂稳定性。

1.2.5 方法学比对 采用EP－9A2文件，西门子检测系统和美康试剂－日立7600检测系统分别作为比较方法和试验方法，测定40例高、中、低值临床标本。每天测定8个标本，连续5d。每个标本重复测定2次，前后两次按照相反的顺序测定。每个标本在2h内完成试验方法和比较方法的测定。

1.3 数据处理与统计学分析 数据处理采用Microsoft Excel2003及SPSS12.0统计分析软件包处理。

1.3.1 不精密度 分别计算高、中、低浓度样品测定结果的均值、标准差与变异系数（CV）及批内、批间、天间及总不精密度，测量结果应符合CLIA′88的规定。

1.3.2 线性 以理论浓度为纵坐标，以测量均值为橫坐标，计算两组数据之间的相关性和线性方程的斜率和截距，相关系数应r≥0.99，得到的线性回归Y＝aX＋b中，若a接近于1，b接近于0，说明试剂的线性范围较好，能满足临床要求，在线性范围内测定值和预期值相关性良好。

1.3.3 方法学比对 以待检测系统测量数据（xi）为自变量，比较检测系统测量数据（yi）为因变量求出线性回归方程，计算线性相关系数（r）：

如果r≥0.975（或r2≥0.95），则认为X范围适合，数据满足要求。在医学决定水平，利用回归方程计算预计偏差，预期偏差Bx＝a＋（b－1）X，相对偏差＝Bx／X，判断相对偏差是否在规定范围内。

1.3.4 统计学处理 所有数据处理采用SPSS12.0统计分析软件包处理。两组数据之间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 不精密度 结果见表1。美康－日立7600检测系统的批内、批间、天间及总不精密度均小于8%。

表1 美康－日立7600检测系统不精密度

2.2 线性分析 线性分析结果见图1，美康－日立7600检测系统在胱抑素C浓度为0.5～8.0mg／L时，检测结果具有较为良好的线性关系。

2.3 最低检测限 最低检测限试验结果0.02mg／L，SD 0.03mg／L，故其最低检测限为0.11mg／L。

2.4 稳定性试验 将试剂开瓶后放置于4℃冰箱中每日取出检测储存的混合血浆1次，连做30d，结果表明30d内，试剂稳定性没有发生明显改变。

2.5 比对试验 比对试验结果见图2，美康－日立检测系统结果与西门子BN PRO SPEC系统检测结果表明美康－日立检测系统与进口检测系统相关性较好，但美康－日立检测系统检测结果则比西门子检测系统检测结果偏高，比临界值1.10mg／L处约高0.18mg／L，差异无统计学意义（P＞0.05）。相关方程为Y＝0.829 1X＋0.007 5，回归系数r为0.9969，r2＝0.993 8。

图1 美康－日立7600检测系统线性分析结果

图2 美康－日立检测系统结果与西门子检测系统结果间比对

3 讨 论

血清胱抑素C检测具有重要的临床意义，越来越多的循证医学证据证明，其在肾脏疾病的早期诊断、治疗、预后判断等诸多方面有较为广泛的应用[7－8]。目前，胱抑素C检测进口试剂价格昂贵，限制了其在临床的广泛应用，故胱抑素C检测试剂的国产化显得尤为必要，从而降低其检测成本，适用于临床推广使用[9]。

胱抑素C检测方法主要为颗粒增强免疫比浊法[10]，包括免疫透射比浊法（PETIA）和免疫散射比浊法（PENIA），PENIA需要特殊的仪器设备，而PETIA则可以直接在自动生化分析仪上进行。然而，胶乳增强透射比浊法有一定的缺陷：在自然条件下聚丙乙烯胶乳颗粒能够自身凝集，而且胶乳球直径越大，趋势越明显。由此带来的共性问题是精密度相对较差，日间稳定性不好，此外各种方法间的检测偏差缺乏试验证据[11]。对自建系统应进行详细论证与评估，以保障临床检验结果的准确性及各实验室结果间的可比性[12]。因此，本研究对国产胱抑素C检测试剂盒结合日立7600生化分析仪建立的检测系统进行了标准化的检验性能评估。评估结果表明，以该国产胱抑素C检测试剂盒建立的自建检测系统、精密度、检测限、线性和准确度均与其说明书标明的各指标数据相符。比对结果表明，与进口检测系统相关性较好，但检测结果则比西门子检测系统检测结果偏高，比临界值1.10mg／L处约高0.18 mg／L，尽管这种差异无统计学意义（P＞0.05），但这提示在临床应用该试剂盒结果例如估算GFR时应注意这种差异，是否可以利用二者的相关方程进行结果间的换算，则需大标本量研究。总体而言，该试剂盒结合日立7600生化分析仪建立的检测系统检验性能良好，可以满足临床需要。

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