蒙医灸疗对PCPA致失眠模型小鼠血清5－羟色胺和多巴胺的影响△

乌云格日乐 阿古拉

(1.北京中医药大学基础医学院，北京 100029);2.内蒙古医科大学蒙医药学院，内蒙古 呼和浩特 010110)

蒙医灸疗对PCPA致失眠模型小鼠血清5－羟色胺和多巴胺的影响△

乌云格日乐1、2阿古拉2

(1.北京中医药大学基础医学院，北京 100029);2.内蒙古医科大学蒙医药学院，内蒙古 呼和浩特 010110)

目的:研究蒙医灸疗对对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠模型小鼠的神经递质5－羟色胺(5－HT)及多巴胺(DA)含量的影响，分析蒙医灸疗对失眠症的作用。方法:将40只清洁级健康昆明小鼠按体重分为对照组、模型组、灸疗组和安定组;除对照组外其余3组小鼠腹腔注射PCPA致失眠模型，造模成功后，灸疗组小鼠给予施灸因素，安定组给予舒乐安定片混悬液灌胃，模型组给予抓取固定、生理盐水灌胃，共治疗15d;采用酶联免疫法测定血清5－HT和DA的值。结果:①血清5－HT:模型组与对照组比较明显降低，有显著性差异(P＜0.01)，灸疗组、安定组与模型组比较有明显增高(P＜0.01)，灸疗组与安定组间比较无显著性差异(P＞0.05);②血清DA:模型组与对照组对照明显降低，有显著性差异(P＜0.01)，灸疗组、安定组与模型组比较有明显增高(P＜0.01)，灸疗组与安定组间比较无显著性差异(P＞0.05);结论:蒙医灸疗“顶会穴”、“赫依穴”可逆转由PCPA引起的失眠，改善血清5－HT和DA的含量，为蒙医灸疗法治疗失眠症提供实验依据。

蒙医灸疗;失眠;5－羟色胺;多巴胺

1 实验材料

1.1 动物:清洁级健康昆明小鼠40只，体重20±2g，雄性，由内蒙古大学动物中心提供，合格证号为SCXK(蒙)2002－0001。

1.2 主要试剂及器材:舒乐安定片(江苏常州第二制药厂，批号920828)、戊巴比妥钠(上海化学试剂有限公司，批号SCRC69020181)、PCPA(美国 sigma公司，批号LOT#SHBC0245V)、5－HT试剂盒(美国 sigma公司，批号E03H0106 BG)、DPA试剂盒(美国 sigma公司，批号E03D0007 BG)、自贴艾灸管(南阳卧龙汉医艾绒厂，批号YZB/豫0031－2003);电子天平(天津天马艺有限公司，批号ELECTRONICSCACET5000)、全自动多功能酶标仪(MULTISKAN MK3，Thermo，USA)、电 热 恒温 培 养 箱(DH4000A，天津泰斯特)。

2 方法与结果

2.1 动物分组、造模及治疗方法:将40只小鼠按体重随机分为4组，对照组10只，模型组10只，灸疗组10只，安定组10只。每组小鼠分放于2个笼中，以大鼠颗粒饲料、自由饮水喂养。除对照组外，其余3组小鼠腹腔注射 PCPA混悬液300 mg/kg，每隔24h1次，共注射2次。对照组小鼠腹腔注射同体积的生理盐水溶液［4］［5］。2天后，造模小鼠出现毛发变黄，易惊觉，记忆减退，食量减少，体重变轻等改变，表示造模成功。之后开始治疗，对照组:不做任何处理;模型组:同灸疗组一样抓取，固定，同安定组一样体积生理盐水灌胃;灸疗组:取穴参照文献［1］［6］，制定小鼠“顶会穴”(在顶骨正中处)和“赫依穴”(在第7颈椎与第1胸椎间，背部正中)。每次取1穴，交替使用，灸疗1d休2d。用自贴艾灸管在所取的小鼠穴位上直接灸，时间15min，共治疗15d;安定组:舒乐安定片混悬液0.2mg/10g灌胃，1次/d，共治疗15d。

2.2 标本收集及检测方法:每组小鼠观察进食量/日、体重、精神、活动动作、毛发及检测血清5－HT和 DA含量。治疗第15d，各组小鼠禁食12h，断头取血。血液4℃放置90min，3500r/min、10min离心，取血清，－20℃冰箱保存，待测。血清用酶联免疫分析法(ELISA)，按照试剂盒说明的操作程序测定血清5－HT和DA含量。

2.3 统计学处理:采用SPSS 17.0统计软件进行分析处理，各项指标结果采用(±s)表示，组间做t检验分析，P＜0.05有统计学意义。

2.4 结 果

表1 小鼠血清5－HT、DA含量比较表(±s，ng/mL)

表1 小鼠血清5－HT、DA含量比较表(±s，ng/mL)

* 模型组与对照组比较P＜0.01，灸疗组、安定组与模型组比较P＜0.01;＊＊灸疗组与安定组间比较P＞0.05。

组别 动物数 5－HT(ng/mL) DA(ng/mL)正常组＊＊10 16.25 ±1.29 12.07 ±1.19模型组 10 7.13 ±2.30* 4.34 ±0.72*灸疗组 9 14.07 ±2.20* 12.78 ±1.76*安定组 9 16.06±2.81＊＊ 11.65±0.88

3 讨论

PCPA是通过抑制色氨酸轻化酶来降低5－HT的合成，不造成神经元的器质性损害，是常用的失眠模型［4－7］。本实验采用腹腔注射PCPA制造失眠小鼠模型，观察蒙医灸疗法治疗失眠的作用。造模后，与对照组比较，给予PCPA小鼠出现明显的失眠特征，毛发变黄、易惊觉、活动频繁、记忆减退、兴奋性增高，攻击性增强，昼夜节律紊乱，食量减少，体重变轻等。

5－HT作为神经递质，主要分布于松果体和下丘脑，可能参与痛觉、睡眠和体温等生理功能的调节，PCPA是5－HT合成抑制剂，造成睡眠昼夜节律消失，达到完全失眠。脑内5－HT浓度的升高，会使机体产生疲劳感和睡意。DA神经元胞体主要集中于中脑，通过脑内DA能神经系统发挥作用，主要在觉醒状态中起着极其重要的作用［8］［9］。但研究发现，失眠患者血清DA的含量，明显低于对照组［10］，表明失眠后血清DA含量降低。本实验结果显示，对失眠模型小鼠"顶会穴"和"赫依穴"施灸治疗后，灸疗组5－HT和DA的含量与模型组比较都有显著提高(P＜0.01)，与舒乐安定组比较都无显著差异(P＞0.05)，表明蒙医灸疗法具有很好的治疗失眠作用，可能通过提高血清5－HT和DA的含量而起到改善睡眠作用，其复杂机制还有待于进一步研究。

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R291.2

A

1006－6810(2014)04－0049－02失眠是现代社会最常见的疾病之一，由于社会节奏的加快和工作压力的不断增大，失眠的人数越来越多，失眠成为困扰人们生活的严重疾病。蒙医灸疗法是通过在人体体表的特定穴位给以温热刺激，达到预防和治疗疾病目的的一种峻疗法［1］。蒙医灸疗法治疗失眠有其独特的功效，且无毒副作用，能避免药物依赖性，在蒙医临床治疗失眠方面较常用的疗法［2］［3］。为探讨蒙医灸疗法对失眠的治疗作用及其机理，我们观察了蒙医灸疗对失眠小鼠的血清5－HT、DA含量的影响。

*通讯作者:阿古拉，教授，博士生导师。

△资助项目:国家自然科学基金研究项目(No:81260571)。

2014年2月10日收稿