尿蛋白定量测定方法分析

潘亚男

肇源县人民医院，黑龙江 肇源 166500

尿蛋白定量测定方法分析

潘亚男

肇源县人民医院，黑龙江 肇源 166500

目的探讨尿蛋白的定量试验方法评价及临床意义。方法对26例肾脏病患者尿标本24尿蛋白定量检测分析。结果轻度蛋白尿5例，中度蛋白尿8例，重度蛋白尿分13例。结论磺基水杨酸—硫酸钠比浊法操作简便，反应灵敏，结果显示快，与各类蛋白质均能发生反应。

尿蛋白定量测定；肾脏病

正常人肾小球滤过液中有2～4 g/d小分子的蛋白质，在通过近端肾小管时，由于小管细胞的胞饮作用绝大部分又被重吸收，故终尿中的蛋白质含量很少，一般为20～80 mg/d。当尿中蛋白质增加，24 h超过150 mg时称蛋白尿。24 h尿蛋白定量的测定有沉淀法、比浊法、比色法、染料结合法、免疫法及尿蛋白电泳等。对2013年1月～12月肾脏病患者26例尿蛋白定量试验方法分析 如下。

1 材料与方法

1.1 对象

尿液标本为2013年1月～12月肾脏病患者26例，其中男14例，女12例，年龄15～77岁，其中肾小球肾炎8例，肾病综合征6例，IgA肾病1例，紫瘢肾炎1例，狼疮性肾炎1例，糖尿病肾病3例。尿液标本为晨6时至次日6时所有尿液，混匀后取5 ml进行测定。

1.2 方法

1.2.1 磺基水杨酸-硫酸钠比浊法 磺基水杨酸—硫酸钠比浊法操作简便，反应灵敏，结果显示快，与各类蛋白质均能发生反应；敏感度为0.05～0.1 g/L，但有一定程度的假阳性。如尿蛋白含量过少时，此法难以确证结果的准确性，可采用双缩脲法［1］。免疫法和电泳法具有更高的灵敏度与特异性，是今后的发展趋势。叠氮钠生理盐水：称取氯化钠0.9 g，叠氮钠0.1 g，用蒸馏水溶解并稀释至100 ml。蛋白标准液：将血清总蛋白测定应用标准液用叠氮钠生理盐水稀释成1000 mg/L后使用。冰箱冷藏保存。

1.2.2 双缩脲化学比色法 Tsuchiys溶液：称取7.5 g磷钨酸，加25.0 ml浓盐酸，385 m1 95%乙醇和30.0 ml去离子蒸馏水。Biurets试剂：第1杯：称取34.6 g柠檬酸钠，加20.0 g无水碳酸钠和大约120 ml蒸馏水使其溶解；第2杯：称取3.46 g硫酸铜，加大约20 ml蒸馏水使其溶解；以上两杯混合加蒸馏水至200 ml即可。0.75 mol/L氢氧化钠溶液：取 20.0 ml饱和氢氧化钠溶液加蒸馏水至500 ml即可［2］。蛋白标准液：称取150 mg结晶型冻干人血清蛋白，溶解在100 ml 3 g/L苯甲酸溶液中。测定方法：定性试验：先用磺柳酸试剂将尿标本做定性试验；如果尿蛋白定性阴性则可不做定量试验，结果就直接报阴性；如果尿蛋白定性为微量，应选择其他测定方法进行尿蛋白定量分析。

1.2.3 丽春红S染料结合法 三氯乙酸一丽春红-S试剂原液：称取丽春红-S 1.0 g，溶解在1000 ml 300 g/L三氯乙酸液中。三氯乙酸-丽春红-S试剂应用液：原液100 ml用蒸馏水稀释至1000 ml，在室温下数月稳定。0.2 mol/L氢氧化钠溶液。蛋白标准曲线：蛋白标准液用生理盐水稀释成每升含蛋白200 rag、400 mg、600 mg、800 mg、1000 mg、1200 mg、1600 mg的标准液，各取100 μl，与测定标本操作相同，用560 nm波长比色，制成曲线。

1.2.4 邻苯三酚红钼络合显色法试剂 显色试剂取邻苯三酚红27 mg，钼酸铵30 mg，用0.1 mol/L甘氨酸一盐酸缓冲液（pH3.0）溶解后，稀释至1000 ml，置棕色瓶内，25℃以下保存。蛋白标准液：将血清总蛋白应用标准液用叠氮钠生理盐水稀释成1000 mg/L后使用。冰箱保存。

2 结果

尿蛋白定量0.05～12.8 g,平均6.38 g。轻度蛋白尿5例，中度蛋白尿8例，重度蛋白尿分13例。

3 讨论

磺基水杨酸—硫酸钠比浊法操作简便，反应灵敏，结果显示快，与各类蛋白质均能发生反应；敏感度为0.05～0.1 g/L，但有一定程度的假阳性。如尿蛋白含量过少时，此法难以确证结果的准确性，可采用双缩脲法。免疫法和电泳法具有更高的灵敏度与特异性，是今后的发展趋势。正常人尿蛋白为40～80 mg/24 h，最多不超过150 mg/24 h。轻度蛋白尿多见于下列疾病：各种原因引起的肾间质性肾炎、各种肾炎缓解期、急性肾炎恢复期、肾功能衰竭晚期、肾小动脉硬化性肾病、功能性或体位性蛋白尿。中度蛋白尿见于多种肾脏疾病，以肾小球疾病常见；大量蛋白尿强烈提示肾小球病变，常为肾病综合征。

［1］辛岗，王芳，王梅，等.点时间尿蛋白与尿肌酐比值检测的临床应用评价［J］.中华肾脏病杂志，2005（5）：247-250.

［2］葛君琍，乔正梅，王静.晨尿尿蛋白/尿肌酐比值与24小时尿蛋白的临床研究［J］.医学综述，2008（19）：3026-3027.

An Analysis about the Quantitative Measurement of Urinary Protein

Pan Yanan People’s hospital in Zhao Yuan， Heilongjiang 166500，in China

ObjectiveAn evaluation on the quantitative measurement of urinary protein and its clinical value.MethodsMaking a quantitative analysis of 24 urinary protein samples selected from 26 patients with kidney disease.Results5 out of all samples are taken as mild one， and 8 samples are moderate one， while， 13 samples are severe.Conclusionsulfosalicylic acid-sodium nephelometry is simple and convenient， and it is so sensitive that make the result demonstrated soon. What’s more， it can be reactive with any protein.

Determining total urinary protein concentration；Kidney disease

R446.1

B

1674-9316（2014）18-0125-02

10.3969/J.ISSN.1674-9316.2014.18.085