Guillain-Barre综合征患者B淋巴细胞辅助受体CD21表达研究

袁学谦 朱太卿 张莉峰 王慧贞 王焕荣 王爱丽 肖悠美

郑州人民医院神经内科 郑州 450003



Guillain-Barre综合征患者B淋巴细胞辅助受体CD21表达研究

袁学谦 朱太卿 张莉峰 王慧贞 王焕荣 王爱丽 肖悠美

郑州人民医院神经内科 郑州 450003

目的 本研究通过检测Guillain-Barre综合征(GBS)患者外周血B淋巴细胞辅助受体CD21的表达，探讨CD21与GBS及其严重程度之间的关系。方法 利用流式细胞术检测GBS组(36例)和正常对照组(20例)CD21表达，按病程将GBS组分为急性期亚组与恢复期亚组，按病情轻重将GBS组分为轻症组和重症组，并分析CD21与疾病病程和严重程度之间的关系。结果 与正常对照组(45.32±8.92)%比较，GBS组(73.48±7.63)%B淋巴细胞CD21表达显著升高, 差异有统计学意义(P<0.01)。与恢复期GBS组(70.15±10.00)%比较，急性期GBS组(77.58±7.39)%B淋巴细胞CD21表达无明显差异 (P>0.05)。与轻症GBS组(68.40±4.81%)比较，重症GBS组(75.98±7.90)% B淋巴细胞CD21无明显差异 (P>0.05)。结论 CD21在GBS患者中表达显著升高，但与病程和病情严重程度无关。

CD21；Guillain-Barre综合征；流式细细胞术

Guillian-Barre综合征(GBS)是由细菌感染等因素诱发，细胞免疫及体液免疫共同作用的以周围神经损害为主要表现的自身免疫性疾病。研究表明异常活化的B淋巴细胞可能在GBS发病中起关键作用，最直接的证据就是在患者或者动物模型的血清内均可检测到多种自身抗体。关于B淋巴细胞异常活化的机制研究较少，其中B淋巴细胞表面辅助受体CD21异常表达可能与之有关。研究[1-2]发现，系统性硬化症患者外周血B淋巴细CD21表达显著增高，但系统性红斑狼疮患者外周血B淋巴细胞和类风湿性关节炎患者滑膜B细胞CD21表达却显著降低。本研究通过检测GBS患者外周血B淋巴细胞辅助受体CD21表达水平，来探讨B淋巴细胞辅助受体CD21在GBS的发病中所起的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 入组患者36例，均符合GBS的诊断标准[3]。年龄16～58岁，平均(32.19±11.24)岁，男∶女=1.4∶1，病程1个月～3 a，平均(1±0.2)a。急性期组(发病至症状和体征达到高峰,2～4周)21例，年龄26～58岁，平均(27.42±12.39)岁，病程10 d～4周，平均(2±0.4)周；恢复期组(约发病4周后症状和体征未再加重,即为恢复期) 15例，年龄16～55岁，平均(35.24±10.31)岁，病程4周～1.5 a，平均(1±0.6)a；男∶女=1.2∶1。病情严重程度评分按1978年Hughs标准评估,轻型组(Hughs评分1～3分)23例, 重型(Hughs评分4～5分)13例。Hughes评分标准：6级：死亡；5级：需呼吸机辅助呼吸；4级：卧床不能不行；3级：需帮助能行5 m以上；2级：不需帮助能行5 m以上；1级：症状与体征很轻；0级正常。(2)正常对照组：同期我院健康体检者20例，男12例，女8例，年龄22～59岁，平均(30.31±10.23)岁。各项体检指标正常，无自身免疫性疾病。

1.2 方法 CD21的检测：利用淋巴细胞分离液将肘静脉血分离出单个核细胞。显微镜下计数，调整细胞浓度为105～106个/mL。将细胞液分成4份，1份为空白对照，1份加入FITC 标记抗人CD20抗体，1份加入PE标记抗人CD21抗体，用于调整流式细胞仪参数，1份加入FITC标记抗人CD20抗体(作为B淋巴细胞标记)，PE标记抗人CD21抗体作为检测标本。4℃冰箱避光孵育30 min后上机。用CelQuestPlot软件程序(美国BD公司)分析数据。

2 结果

2.1 GBS组与正常对照组外周血B淋巴细胞CD21表达比较 GBS组(73.48±7.63)%，NC组(45.32±8.92)%， 与正常对照组比较， CD21表达显著升高(P<0.01)。

2.2 急性期组与恢复期组患者外周血B淋巴细胞CD21表达比较 急性期(77.58±7.39)%，恢复期(70.15±10.00)%；与恢复期组比较，急性期组CD21表达差异无统计学意义 (P>0.05)。

2.3 重症与轻症患者外周血B淋巴细胞CD21表达比较 轻症(68.40±4.81)% ，重症(75.98±7.90)%；与轻症组比较，重症组患者CD21表达差异无统计学意义 (P>0.05)。

3 讨论

许多自身免疫性疾病均可检测到异常活化的B淋巴细胞及其分泌的自身抗体[4-5]。目前利用抗CD20单克隆抗体(利妥昔单抗)清除特异性B淋巴细胞的方法有效治疗许多自身免疫性疾病。B淋巴细胞的作用再次凸现，但关于B淋巴细胞异常活化机制的研究较少。

B淋巴细胞异常活化与B细胞抗原受体(BCR)传导的信号密切相关，而BCR传导信号的强弱受到B淋巴细胞表面许多辅助受体的调控。BCR与Igα、Igβ均表达于成熟B淋巴细胞表面，抗原与BCR结合后，抗原刺激信号通过Igα、Igβ向下游传递。该信号受到B淋巴细胞表面许多辅助受体的调控，特别是CD19、CD21的调控。当抗原浓度较低时，CD19通过CD21-C3d复合体连接于BCR上，抗原一方面可以与BCR结合，另一方面与CD21-C3d复合体相连，形成B淋巴细胞的双重抗原识别。这种双重抗原识别模式为B淋巴细胞的活化提供了最大程度的刺激。CD21的主要作用是通过交联抗原特异的BCR到CD21/CD19信号复合物，降低抗原激活B淋巴细胞的阈值。因此，若CD21表达异常可能会导致B淋巴细胞异常活化。

GBS是由细胞免疫及体液免疫共同作用的周围神经脱髓鞘性自身免疫性疾病。B淋巴细胞异常活化被认为是该病的主要发病机制,最直接的证据就是在GBS患者血清中检测到多重特异性的自身抗体[6]。

研究发现CD21缺陷小鼠导致CD5+B1细胞亚群显著降低，IgM依赖的抗体明显缺乏，这表明CD21在B淋巴细胞活化中起重要作用[8]。 研究发现系统性红斑狼疮患者外周血B淋巴细胞和类风湿性关节炎患者滑膜B细胞CD21表达却显著降低。Anna Erdeia认为在系统性红斑狼疮中，CD21表达降低可能与疾病发展过程中的下调机制发挥作用有关，而不是CD21表达缺陷导致疾病发生、发展[9]。系统性硬化症患者外周血B淋巴细CD21表达显著增高。与此类似，本研究也发现GBS患者CD21表达显著高于正常对照组，但与病程及病情轻重无关，提示CD21表达的增加可能降低了B淋巴细胞的活化阈值，导致B淋巴细胞异常活化，从而促进GBS的发生、发展。不同的自身免疫性疾病CD21表达的不同，提示CD21在不同自身免疫性疾病所起的作用不同。关于CD21在自身免疫性疾病中的作用有待进一步研究。

[1] Sato S, Hasegawa M, Fujimoto M, et al. Quantitative geneticvariation in CD19 expression correlates with autoimmunity [J].J Immunol ,2000,165(11):6 635-6 643.

[2] Gergely IAJr. Physiological up-regulation of inhibitory receptors Fc gamma RII and CR1 on memory B cells is lacking in SLE patients [J].Int. Immunol,2008,20(2), 185-192.

[3] Asbury A, Cornblath D. Assessment of current diagnostic criteria for Guillain-Barre syndrome [J] . Ann Neurol, 1990,27(suppl):21-24.

[4] Browning JL. B cells move to centre stage: novel opportunities for autoimmune disease treatment [J]. Nat Rev Drug Discov，2006,5(7):564-576.

[5] Martin and Chan, Martin F，Chan AC. B cell immunobiology in disease: evolving concepts from the clinic[J]. Annu Rev Immunol，2006,24:467-496.

[6] Yu R, Usuki S, Ariga T. Ganglioside molecular mimicry and it s pathological roles in Guillain-Barrésyndrome and related diseases [J].Infect Immun ,2006,74(12):6 517-6 527.

[7] Teddel TF，ZhouL Engel P. The CD19/CD2l signal transduction complex of B lymphocytes[J].Immunology Tday，1994,15(9):437-442.

[8] Woodcock S, Shimabukuro-Vornhagen A.Functional activity of natural antibody is altered in Cr2-deficient mice[J].J Immunol, 2002，169(10):5 433-5 440.

[9] Anna Erdeia,b,Andrea Isaákb,Katalin.Expression and role of CR1 and CR2 on B and T lymphocytes under physiological and autoimmune conditions Molecular Immunology[J] 2009,46(10):2 767-2 773.

(收稿2013-08-27)

Expression of co-receptor CD21 on peripheral B lymphocytes in patients with Guillian-Barre syndrome

YuanXueqian，ZhuTaiqing，ZhangLifeng，WangHuizhen，WangHuanrong,WangAili,XiaoYoumei

DepartmentofNeurology,thePeople'sHospitalofZhengzhou,Zhengzhou450003,China

Objective To explore the corelation between the expression of CD21 and the severity of GBS by detection of CD21 of B lymphocyte co-receptor in peripheral blood mononuclear cells(PBMNCs) of patients with GBS.Methods GBS group(36 cases)and healthy controls (HC) group(20 cases) were investigated. The expression of CD21 on peirpheral B lymphocytes were examined by flow cytometry. According to course of disease,GBS group was divided into acute subgroup and recovery subgroup. According to the severity of disease，GBS group was divided into mild group and severe group, Furthermore, the corelation between the expression of CD21 and the course and severity of the disease were analyzed.Results Compared with HC group(45.32+8.92) %, the CD21 increased significantly in GBS group (73.48+7.63%)(P<0.01).Compared with recovery subgroup(70.15+10.00)%, the CD21 in the acute subgroup(77.58+7.39)% has no significant differences(P>0.05). Compared with mild group)(68.40+4.81)%, the CD21 in severe group(75.98+7.90)% had no significant differences(P>0.05).Conclusion CD21 expression in GBS significantly increases, but has no correlaiton with the the course and severity of the disease.

CD21;Guillain-Barre syndrome;Flow cytometry

R745

A

1673-5110(2014)01-0037-02