全自动免疫组化仪的应用体会

刘 爽

（江苏省扬州市第一人民医院 病理科，江苏 扬州225002）

全自动免疫组化仪的应用体会

刘 爽

（江苏省扬州市第一人民医院 病理科，江苏 扬州225002）

免疫组织化学技术在病理诊断与鉴别诊断中具有十分重要的作用。为保证免疫组化制片的准确性，可重复性与整体染色的一致性，全自动免疫组化染色机已被广泛使用。作者总结了全自动免疫组化染色机在使用过程中的体会，旨在通过加深对全自动免疫组化染色机的了解，以提高免疫组化制片质量。

免疫组织化学；全自动免疫组化染色机；制片质量；应用体会

免疫组织化学技术作为病理诊断的辅助技术，已成为目前临床诊断不可或缺的手段之一，免疫组化技术的使用大大提高了病理诊断的水平，使原来很多疑难的病例，通过免疫组织化学的技术而得以解决。为确保免疫组织化学的准确性，可重复性及整体染色的一致性，全自动免疫组化染色机已广泛使用。我科于2012年2月也已经开始使用，通过一段时期的临床摸索实践，将全自动免疫组化染色机的使用体会总结如下。

1 材料与方法

1.1 仪器设备与试剂

采用美国Ventana全自动免疫组化染色仪；所选试剂中，一抗选用中杉生物有限公司产品，二抗及显色系统均为全自动免染色仪自带封闭套盒，衬染液为Gill苏木精染色液。

1.2 操作流程与大部分报道的文献相似[1-2]

①肿瘤常规包埋后4 μm连续石蜡切片，玻片上标记一抗名称；②根据当日免疫组化检测项目，电脑分别输入免疫组化号与各一抗的病理号，Ebar条码打印机打印出标签后对应贴到每张玻片上，全自动仪器不需要额外烤片；③全部切片入雀巢奶粉中浸泡20 min；④仔细检查机器自带试剂与各散装试剂是否足够完成试验；⑤将标签表面水分与切片背面擦干，平稳放置于切片盘上；⑥将DAB试剂盒、苏木素、返蓝液等试剂置于检测试剂架上（注意擦干条形码上水珠）；⑦准备完毕后，电脑启动运行程序；⑧染色完成后，打开切片盘，取出切片后先入洗洁精除去玻片表面油质，然后常规脱水、透明、封片；⑨使用仪器自带清洁功能清洗仪器。

2 结 果

使用Ventana全自动免疫组化染色仪，大大减少了手工操作时间，染色结果稳定，定位准确，染色信号表达清晰，无背景及非特异性染色。

3 讨 论

采用全自动免疫组化染色机进行免疫组化制片与以往的人工制片相比，具有以下的优点：①工作效率提高。手工免疫组化的操作需要不断的计时间，为了保证满意的实验结果常常需要40C过夜。而全自动免疫组化染色机通过程序预设，可从脱蜡、抗原修复、滴加一抗、DAB显色直至复染自动满意运行，而仅仅需要完成人工脱水与封片的步骤，一次可完成30张切片，染色全过程一般需要3 h左右，省时、省力；②免疫组化操作标准化。在Ventana自动染色机上，所有程序，包括脱蜡、修复、封闭、一抗和二抗的孵育、DAB显色及衬染均是由标准的程序完成，时间、温度、试剂添加量均由仪器控制，避免手工操作的误差。仪器自带的涡流混匀功能，可使试剂覆盖整张玻片，消除边缘效应和染色不均一；液体封盖膜可以保证抗原修复和一抗孵育的温度保持恒定；超强清洗功能减少了染色的背景和非特异性染色。实验结果具有很好的可重复性；③免疫组化试剂的标准化。仪器使用的脱蜡液、修复液、液体封盖膜、清洗缓冲液、DAB显色试剂盒及衬染试剂均是由Ventana生产，经过严格质检出厂，保证了每个批次间的稳定性。减少手工配制试剂的批间差。每次开机前，仪器会进行自检，确保每次实验有足够的试剂；④便于玻片归档。全自动免疫组化染色机通过使用配套打印机，于载玻片上清晰打印标签，所打印的标签具有耐热，防水、防腐蚀的功能，且终生储存不会褪色；⑤安全环保。全自动免疫组化仪配有废液回收系统，可将废液集中回收，使环境保护达到标准化的要求。还有液面提示功能，避免过多的废液溢出，造成污染；⑥全自动免疫组化仪有完整的质控记录。每张玻片都有详细的实验过程，可追溯到实验时间，试剂的批次和效期。对于已经过期的试剂，仪器会提醒用户，避免过期试剂造成的实验误差。这些内容均是仪器自动记录，不需要手工记录，可实现快速高效的质量控制；⑦方便科室的库存管理。全自动免疫组化仪对已经注册的试剂有库存记录，可以快速查看到库存清单，及时订购试剂。

同时在使用过程中需注意以下方面因素[3]：①组织的前期处理。组织固定时间以4～6 h为宜，最长不超过24 h，过长过短都会对染色结果产生不良影响。因组织固定时间过长会封闭或破坏组织的抗原活性，而固定时间过短则抗原弥散和组织结构不清晰；②保证切片质量。满意的切片质量是保证染色质量的基本要求，切片时要做到平整和厚薄适中，以4～6 μm为宜，避免出现皱褶；③涂胶片的制备。为避免脱片对染色结果的影响，需染色前对玻片进行处理。最好使用配套的涂胶玻片，目前常用的是用APES与多聚赖氨酸（Poly-L-Lysine）制成的涂胶玻片，其防脱效果较为满意；④试剂瓶的安装及定期检查。虽然全自动免疫组化染色机通过条形码识别试剂瓶，对试剂瓶的安装顺序无严格要求，但仪器不能发现试剂瓶安装位置的细微偏差，有试剂不能顺利通过滴加孔而造成结果假阴性的可能。因此待仪器运行后，需定期检查试剂瓶是否与滴加孔满意对接。

近些年来，由于病理诊断倡导质量控制与标准化，各项指标都要求达到标准化水平，因而对免疫组化制片的质量与可重复性要求增加，而全自动免疫组化染色仪就是作为病理免疫组化诊断质量提高与标准化的可靠工具，对提高免疫组化制片质量具有十分重要的作用。

综上所述，在病理诊断中，成功的开展免疫组化学制片的关键是标准化制作[4]。标准化制作可提高免疫组化切片的质量与结果的可重复性，为正确做出临床病理诊断提供了有力依据与可靠保证。全自动免疫组化染色仪具有省力，省时、操作便捷等特点，对我国病理实验室与国际标准化发展接轨起到重要作用。

[1] 杨月红,袁静萍,袁修学,等.自动免疫组化仪的使用体会[J].临床与实验病理学杂志,2011,27(3):333-334.

[2] 罗玉凤,曹金伶.简介免疫组化染色机[J].诊断病理学杂志,2012, 19(4):319.

[3] 虞杰,石伟强.全自动免疫组化仪的应用及影响其染色质量的因素探讨[J].泰州职业技术学院学报,2011,11(6):69-71.

[4] 郑杰,邹万忠,吴秉铨.成功开展免疫组织化学的关键标准化[J].中华病理学杂志,1996,25(6):323-325.

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：1671-8194（2014）03-0034-02