闽南地区人乳头状瘤病毒16及18感染与食管鳞癌的关系*

吴培仁 尤 俊 洪清琦

人乳头状瘤病毒（human papilloma virus，HPV）是人类易感病毒，它与人类鳞状上皮具有高度亲和性。HPV目前已分离鉴定出118型，2003年流行病学分类研究定义了15种高危型HPV（如HPV16、HPV18等）和12种低危型HPV（如HPV6、HPV11等）。1982年Syrjanen［1］首次报道HPV与食管鳞癌关系后，大量研究揭示HPV是导致食管鳞癌发病率高的一个重要病因学因素［2-3］，但其致瘤机制尚未完全阐明。本研究采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitation polymerase chain reaction，FQ-PCR）技术对闽南人的食管鳞癌、癌旁正常组织标本进行HPV检测，探讨HPV16、18型在闽南人食管鳞癌和癌旁正常组织中感染情况以及与闽南人食管鳞癌发生的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

选取2009年10月至2012年12月厦门大学附属第一医院肿瘤外科，出生生长于闽南地区未做任何化学、放射治疗经手术病理证实的食管鳞癌患者100例，年龄35～78岁，男64例，女36例；病理组织学分级，Ⅰ级3例，Ⅱ级77例，Ⅲ级20例；有淋巴结转移61例，无淋巴结转移39例；肿瘤浸润程度，T11例，T220例，T336例，T443例。

1.2 方法

将手术切除的新鲜食管鳞癌标本的癌组织及癌旁正常组织各取100份，所有标本均在手术后2 h内收集。采用FQ-PCR技术进行HPV-DNA检测，检测试剂盒为中山大学达安基因股份有限公司生产。按照试剂盒提供的操作流程提取各份样本DNA，每份样本分别构建两个PCR体系，两个体系的通用引物和探针包含的亚型分别为：高危HPV16型和HPV18型；同时在罗氏480PCR扩增仪上进行扩增，扩增程序按试剂要求编辑。阳性结果判断：如果增长曲线呈S型曲线且Ct值＜40，则实验结果判为阳性，最终根据每份样本两个体系的阳性结果情况综合判断HPV型别情况。

1.3 统计学方法

采用行×列表资料的χ2检验方法，对多个样本率进行比较，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 高危型HPV16、18在食管鳞癌组织中感染情况

高危型HPV16、18在食管鳞癌组织中的阳性率分别为14.00%（14/100）、15.00%（15.00/100）。男女患者高危型HPV16、18阳性率分别为14.06%（9/64）、15.63%（10/64）和13.89%（5/36）、13.89%（5/36）；差异无统计学意义（χ2=0，P＞0.05；χ2=0.054，P＞0.05）。高危型HPV16和18在食管鳞癌组织中的淋巴结转移组感染率40.98%（25/61）明显高于无淋巴结转移组10.25%（4/39），差异有统计学意义（χ2=10.91，P＜0.01）；其中HPV16型的淋巴结转移组感染率19.91%（12/61）明显高于无淋巴结转移组5.13%（2/39），差异具有统计学意义（χ2=4.18，P＜0.05）；HPV18型的淋巴结转移组感染率21.31%（13/61）明显高于无淋巴结转移组5.13%（2/39），差异具有统计学意义（χ2=4.88，P＜0.05）。HPV16、18感染与患者年龄、性别、病理类型、肿瘤分级、肿瘤浸润程度均无相关性，均P＞0.05。

2.2 高危型HPV16、18在癌旁组织中感染情况

高危型HPV16、18在癌旁组织中的阳性率分别为7.00%（7/100）、8.00%（8/100），男女患者高危型HPV16、18阳性率分别为6.25%（4/64）、6.25%（4/64）和8.33%（3/36）、11.11%（4/36）；差异无统计学意义（χ2=0.153 6，P＞0.05；χ2=0.739 7，P＞0.05）。高危型HPV16和18在癌旁的有无淋巴结转移组感染率分别为14.52%（9/61）、15.38%（6/39），差异无统计学意义（χ2=0.741 8，P＞0.05）。HPV16、18感染与患者年龄、性别、病理类型、肿瘤分级、肿瘤浸润程度均无相关性，均P＞0.05。

2.3 高危型HPV16、18在食管鳞癌和癌旁组织中感染的比较

高危型HPV16、18在食管鳞癌组织中的阳性率为14.00%、15.00%，高于相应癌旁组织7.00%、8.00%，差异无统计学意义（χ2=1.303 6，P＞0.05；χ2=1.203 6，P＞0.05）。

3 讨论

HPV是一类双链闭合环状DNA病毒，具有高度组织特异性和宿主特异性，基因组约为8 000 bp［4］，HPV DNA基因组按其功能分为3个编码区：1）早期基因编码参与病毒DNA复制、转录及细胞转化的蛋白；2）晚期基因编码病毒结构蛋白；3）上游调节区位于E区和L区之间，包含启动子等调控元件，与病毒DNA复制转录的调控有关［5］。现已经明确基因组全序列有80多种DNA病毒分型［6］，其中15种高危致病亚型包括HPV-16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68，而HPV6、11、42、43、44为低危型［7］；目前已有证实HPV16和HPV18病毒分型也是食管鳞癌的主要高危致病亚型［8］。曹邦伟等［9］使用Meta分析1982年至2009年关于HPV感染与食管癌关联的病例对照研究发现，HPV高危型别（16和18型）的感染与食管癌的发生依然显示出明显的易感关联。

本研究应用FQ-PCR技术检测100例闽南人的食管鳞癌和对应100例癌旁正常鳞状上皮组织HPV感染情况，结果显示食管鳞癌高危型HPV16、18阳性率高于癌旁组织（14.00%vs.7.00%和15.00%vs.8.00%），提示高危型HPV16、18与闽南地区食管鳞癌的发生存在关联。刘新胜等［10］应用导流杂交法检测河南地区57例食管鳞癌组织及相应癌旁组织进行HPV16、18检测，结果显示：高危型HPV16、18在河南地区食管鳞癌组织中的阳性率为36.84%（21/57）和19.30%（11/57），明显高于癌旁组织阳性率14.04%和10.53%，且两组感染HPV的阳性率差异具有统计学意义（P＜0.05），提示高危型HPV16、18感染与该地区食管鳞癌的发生存在明显关联。姚品芳等［11］应用免疫组化S-P法检测湖北钟祥和麻城食管鳞癌及正常食管黏膜HPV16/18E6阳性率分别为45.0%和0%，且两组感染HPV的阳性率差异具有统计学意义（P＜0.05），认为HPV16、18感染在该地区食管癌发生上具有普遍意义。崔明辰等［12］研究也提示食管鳞癌与HPV16、18感染有关，认为造成食管HPV感染率差异的原因可能与标本来源、标本数量、环境地理因素、遗传易感性和检测方法不同有关。本研究与国内外研究不符考虑存在以下因素：1）HPV感染可能存在种族差异；2）HPV在正常人群消化系中都有一定的感染率，具有自限性，大部分感染是暂时的，当机体的防御机制改变或基因发生突变时，HPV感染可发生恶性转化；3）可能与检测方法不同有关。

本研究显示高危型HPV16、18在食管鳞癌组织中的淋巴结转移组感染率明显高于无淋巴结转移组（40.98%vs.10.25%）；提示HPV16、18可能参与食管鳞癌的进化步骤和淋巴结转移的过程，HPV与癌细胞的转移关系有待进一步研究。刘新胜等［10］研究河南地区HPV16、18感染在食管鳞癌淋巴结转移组感染率明显高于无淋巴结转移组（77.78%vs.36.67%）；认为HPV感染与食管癌发生发展不同阶段可能发挥重要作用。许建功等［13］研究也认为高危型HPV16和18感染与食管鳞癌淋巴结转移呈正相关。由于HPV一般要在感染二、三十年后致癌，这么长的潜伏期可能与病毒整合到宿主适当的位置需要很长的时间有关；病毒整合入宿主细胞不仅使病毒癌蛋白得到长期稳定的表达，而且因为插入造成宿主DNA的重排，由此造成基因絮乱，对细胞的恶性转化起着至关重要的作用。

本研究表明HPV16、18感染与食管鳞癌组织分化程度、肿瘤浸润程度、患者性别、年龄、病理类型均无明显相关性，提示HPV16、18感染可能仅作为食管鳞癌发生的危险因素。陈卫刚等［14］研究表明哈萨克族食管鳞癌HPV感染率无男女性别差异。

杨兰等［15］研究认为：HPV DNA在良性和癌前病变中以游离形式存在，而在恶性肿瘤中整合于基因细胞中，下游区域HPV16、18E6和E7整合入宿主细胞后参与细胞的增殖与转化，E7基因可通过与Rb家族相互作用使细胞周期失控，DNA大量合成并丧失DNA复制的保真度；E6基因则通过结合并降解P53，阻止DNA的修复或阻止细胞进入程序性死亡。显示HPV18在已有HPV16感染的食管鳞癌中可加强HPV16的致癌作用，即当HPV16，18合并感染时提高了细胞病变的风险，说明HPV16、18感染在致癌功能上存在协同互补作用。提示HPV16、18感染与食管鳞癌发病有关，与本研究结果相同，说明HPV16、18感染可能是闽南地区食管鳞癌发病原因之一。

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