米糠脂溶性单体化合物的分离与结构鉴定

刘天行，王 伟，郭 佳，辛志宏,*

米糠脂溶性单体化合物的分离与结构鉴定

刘天行1,2，王 伟1，郭 佳1，辛志宏1,*

（1.南京农业大学食品科技学院，江苏 南京 210095；2.南京农业大学图书馆，江苏 南京 210095）

以米糠为原料，采用有机溶剂提取得到粗提物，利用硅胶柱层析和Sephadex LH-20凝胶柱层析等分离方法从米糠粗提物中分离得到9 个单体化合物，通过核磁共振（nuclear magnetic resonance，NMR）和电喷雾质谱（electrospray ionization mass spectrometry，ESI-MS）鉴定其化学结构分别为油酸、亚油酸、2,3-二羟基硬脂酸丙酯、2,3-二羟基油酸丙酯、3-羟基1,2-二油酸丙二酯、1,3-二油酸丙二酯、1,3-二油酸-2-硬脂酸甘油酯、豆甾醇、麦角甾醇。

米糠；脂溶性化合物；分离纯化；结构鉴定

米糠是稻谷加工的主要副产品，占稻谷总量的5%～6%，我国水稻年产量约为1.85亿t，每年会产生约900万t的米糠，产量巨大[1]。研究发现米糠中含有12%～13%的油、14%～16%的蛋白质，以及4.3%不皂化物[2]；此外，还含有多种能够促进健康的活性物质，如膳食纤维、维生素、矿物质、植酸、谷维素和丹宁等[3]。这些物质共同作用，形成米糠有益人体健康的机制，如抗氧化、抗炎症、降血脂、降胆固醇、抑制脂质过氧化和癌细胞增殖并阻断信号传导等功效。

由于米糠不稳定，目前研究大多集中如何钝化脂酶防止米糠酸败，如挤压膨化技术、微波技术和高温烘烤等[4]，稳定后的米糠主要用来生产高品质的米糠油和提高产量，而米糠油的化学成分特别是米糠油中单体化合物的成分是决定米糠油品质的关键因素。有关米糠油成分分析，最常用的是气相色谱法，这种分析方法将米糠油所有单甘酯、二甘酯和三甘酯水解为游离脂肪酸并甲酯化后，结合标样对酯化产物定性与定量，从而推断各种脂肪酸的组成与比例[5]。随着现代分析技术的发展，也出现了不用甲酯化而直接用于分析脂质成分的色谱方法，这种分析方法需要配备专用的色谱柱，但这种方法因为缺乏有些脂质成分的商业标样而有一定限制[6]。更为先进的脂质成分分析是核磁共振技术，这种方法操作简便且样品不用预处理，可对脂质成分直接定量与定性，但是这种方法所需核磁共振仪价格昂贵，如果脂质成分复杂，信号重叠在一起而不易解析[7]。因此，明确米糠中单体化合物的成分对于建立直接有效的分析方法尤为必要，并为深入研究与开发米糠的功能与有益于人体的健康作用具有重要意义。目前，还尚未见有关米糠中脂质单体成分的报道。

本研究以米糠为原料，采用有机溶剂提取得到米糠油粗提物，利用硅胶柱层析和Sephedex LH-20硅胶柱层析等分离其中的单体化合物，通过核磁共振（nuclearmagnetic resonance，NMR）和电喷雾质谱（electrospray ionization mass spectrometry，ESI-MS）确定这些化合物的结构。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

Sephadex LH-20 瑞典Pharmacia公司；硅胶H（200～400目） 青岛海洋化工厂。

常规提取分离用甲醇、丙酮、乙酸乙酯、石油醚、氯仿等均为工业用化学纯产品，重蒸后使用。

AVANCE3型（400 MHz）核磁共振仪 德国Bruker公司；Mariner ESI-MS-TOF型质谱仪 美国应用生物系统公司；N-1100V-WD立式旋转蒸发仪 日本东京理化有限公司；电子天平 北京赛多利斯仪器系统有限公司；FW200高速万能粉碎机 天津市华鑫仪器厂。

1.2 方法

1.2.1 提取分离

1 kg新鲜米糠经高速万能粉碎机粉碎后加入80%丙酮（1∶10，V/V）过滤，取上清液，重复萃取3次合并上清液，于旋转蒸发器减压浓缩至无丙酮后，加入乙酸乙酯（1∶3，V/V）进行萃取，分液后取乙酸乙酯层，重复萃取3次合并提取液，减压浓缩至干得脂质粗提物22 g。

米糠粗提物22 g用60 g硅胶H干法拌样后上装有200 g硅胶H的减压柱，用环己烷-乙酸乙酯-甲醇（100∶0∶0、0∶100∶0、0∶0∶100，V/V）3个梯度洗脱分离，洗脱的组分减压浓缩后经TLC检测后合并得到4个组分：Fr.1～Fr.4。组分Fr.1（5.1 g）进一步上常压硅胶（300目）柱，石油醚-丙酮（25∶1，V/V）洗脱，TLC检测后合并的到组分Fr.1-1（2.2 g）和Fr.1-2（2.6 g），Fr.1-1继续用常压硅胶柱分离，纯氯仿洗脱，得到化合物1（53 mg），Fr.1-2经过Sephadex LH-20纯化，氯仿-甲醇（1∶1，V/V）洗脱得到化合物2（58 mg）；Fr.2（3.5 g）经过常压硅胶柱分离，氯仿-甲醇（99∶1，V/V）洗脱，得到化合物3（145 mg）和组分Fr.2-1（1.5 g），Fr.2-1经过Sephadex LH-20纯化，氯仿-甲醇（1∶1，V/V）洗脱得到化合物4（180 mg）；组分Fr.3（10.6 g）经常压硅胶柱分离，氯仿-甲醇（99∶1，V/V）洗脱经TLC检测后合并得到组分Fr.3-1（1.3 g）、Fr.3-2（232 mg）和Fr.3-3（8.1 g），组分Fr.3-1经过Sephadex LH-20纯化，氯仿-甲醇（1∶1，V/V）洗脱得到化合物5（115 mg），组分Fr.3-2经常压硅胶柱分离，氯仿-甲醇（50∶1，V/V）洗脱，得到化合物6（123 mg），组分Fr.3-3经常压硅胶柱分离，环己烷-乙酸乙酯（50∶1，V/V）洗脱，得到化合物7（5.6 g）；组分Fr.4（3.5 g）经常压硅胶柱分离，石油醚-丙酮（100∶1，V/V）洗脱得到组分Fr.4-1（2.6 g），Fr.4-1进一步用常压硅胶柱分离，氯仿-甲醇（150∶1，V/V）洗脱，得到化合物8（109 mg）和化合物9（112 mg）。分离过程中其余未检测到TLC斑点的组分，不做进一步分离。分离纯化过程如图1所示。

图1 化合物1～9分离过程Fig.1 Flow diagram for the isolation of compounds 1－9

1.2.2 核磁共振测定

取一定量的样品，用0.5 mL氘代氯仿（CDCl3）溶解后，装入核磁管上机测试。氢谱1H NMR 和1H-1H COSY于400 MHz测定，13C NMR于100 MHz测定。

1.2.3 质谱测定

取少量样品溶解于乙腈-水（1∶1，V/V）的混合溶剂中，直接进样分析。质谱参数：电喷雾离子源，离子源温度：500 ℃，气帘气：25.0 psi，喷雾电压：5 500.0 V，离子源气1：55.0 psi，离子源气2：50.0 psi。

2 结果与分析

米糠经丙酮、乙酸乙酯先后萃取后得到22 g粗提物，该粗提物经过多步硅胶柱层析与Sephadex LH-20柱层析纯化得到9个单体化合物，通过NMR与ESI-MS确定其结构。

2.1 化合物1

无色油状物，ESI-MS给出准分子离子峰281.2 [M-H]－，结合1H NMR和13C NMR数据确定其分子式为C18H34O2。1H NMR 和13C NMR （CDCl3）谱显示出一组典型的不饱和脂肪酸信号。1H NMR低场区δ 11.6（1H, br s）处的宽单峰和13C NMR δ 180.4处的碳信号提示分子中存在一个羧基，1H NMR δ 5.35 （2H, m）处的多重峰和13C NMR δ 130.1和129.8处的两个碳信号，说明分子中有一个双键。1H NMR和13C NMR具体核磁数据为：1H NMR（400 MHz, CDCl3, TMS）：δ 5.34（2H, m, H-9, H-10）、2.34（2 H, t, J = 5.96, H-2）、2.01（4H, ‘d’-like, J =4.56 Hz, H-8, H-11）、1.63 （2 H, m, H-3）、1.25～1.31（20 H, m, H-4-H-7, H-12-H-17）、0.80 （3H, t, J = 5.40, H-18）；13C NMR（100 MHz, CDCl3, TMS）： δ 180.2（C-1）、34.0（C-2）、24.6（C-3）、29.0-29.7（C-4-C-7）、27.2（C-8）、130.2（C-9）、129.7（C-10）、27.1（C-11）、29.0～29.7（C-12-C-15）、31.9（C-16）、22.6（C-17）、14.0（C-18）。结合其他信号以及与文献[8]数据比较，该化合物鉴定为油酸，结构如图2所示。

图2 化合物1的结构Fig.2 Structure of compound 1

2.2 化合物2

无色油状物，ESI-MS给出准分子离子峰281.2 [M+H]+，提示该化合物相对分子质量为280，结合1H NMR和13C NMR （CDCl3）数据确定其分子式为C18H32O2。与化合物1H NMR 和13C NMR相比，化合物2与化合物1信号非常相似，提示二者结构类似。主要差别在于化合物2在1H NMR δ 2.79 （2 H, t, J = 5.32 Hz, H-11）出现一个三重峰，13C NMR 在δ 2×129.7（C-9, C-13）、2×127.8 （C-11, C-12）处出现两个双键信号，说明化合物2分子中有1个双丙烯亚甲基片段。1H NMR和13C NMR具体核磁数据为：1H NMR（400 MHz, CDCl3, TMS）：δ 10.54 （1H, br s, 1-OH）、5.39 （4H, m, H-9, H-10, H-12, H-13）、2.77 （2H, t, J = 5.32 Hz, H-11）、2.34 （2H, t, J = 5.88 Hz, H-2）、2.05（4H, m, H-8, H-14）、1.63 （2H, m, H-3）、1.25～1.31（14H, m, H-4, H-5,H-6, H-7, H-15, H-16, H-17）、0.88 （3H, t, J = 5.68, H-18）；13C NMR （100 MHz, CDCl3, TMS）：δ 180.0（C-1）、34.0 （C-2）、24.7（C-3）、29.3～29.7（C-4-C-7）、27.2 （C-8）、130.0（C-9）、128.1（C-10）、25.6 （C-11）、127.9（C-12）、130.2（C-13）、27.2 （C-14）、29.4（C-15）、31.9（C-16）、22.7（C-17）、14.1（C-18）。以上数据通过与文献[9]比较，与亚油酸数据一致，所以化合物2鉴定为亚油酸，结构如图3所示。

图3 化合物2的结构Fig.3 Structure of compound 2

2.3 化合物3

白色无定型粉末，ESI-MS给出准分子离子峰381.3 [M+Na]+，提示该化合物相对分子质量为358，结合1H NMR和13C NMR（CDCl3）数据确定其分子式为C21H42O4。1H NMR 显示一组典型的饱和单甘油酯信号。δ 4.21 （2H, ddd, J = 4.68, 11.68 Hz, H-1）、3.96（1H, m, H-2）、3.73（1H, dd, J = 3.92, 11.48 Hz, H-3a）和3.63 （1H, dd, J = 5.80, 11.44 Hz, H-3b）处的信号提示分子中存在一个A2BX2自旋体系，说明分子中存在一个丙三醇片段，δ 2.37 （2H, t, J = 7.48 Hz, H-2’）处的三重峰为2’位的氢信号。1H NMR具体核磁数据为：1H NMR （400 MHz, CDCl3, TMS）：δ 4.21 （2H, ddd, J = 4.68, 11.68 Hz, H-1）、3.96（1H, m, H-2）、3.73 （1H, dd, J = 3.92, 11.48 Hz, H-3a）、3.63 （1H, dd, J = 5.80, 11.44 Hz, H-3b）、2.37 （2H, t, J = 7.48 Hz, H-2’）、1.65（2H, ‘t’-like, J = 6.88 Hz, H-3’）、1.27-1.32 （28 H, m, H-4’-H-17’）、0.90 （3H, t, J = 6.48 Hz, H-18’）。以上数据与文献[10]数据一致，所以化合物3鉴定为2,3-二羟基硬脂酸丙酯，结构如图4所示。

图4 化合物3的结构Fig.4 Structure of compound 3

2.4 化合物4

白色无定型粉末，ESI-MS给出准分子离子峰379.0 [M+Na]+，提示该化合物相对分子质量为356，结合1H NMR和13C NMR（CDCl3）数据确定其分子式为C21H40O4。比较化合物3与化合物4的1H NMR和13C NMR数据，发现二者非常相似，唯一的不同在于化合物4中1H NMR δ 5.37（2H, m, H-9’, H-10’）和13C NMR δ130.0（C-9’）、129.7（C-10’）显示存在一个双键，提示该化合物为单不饱和甘油酯。1H NMR和13C NMR具体核磁数据为：1H NMR （400 MHz, CDCl3, TMS）： δ 5.37（2H, m, H-9’, H-10’）、4.21 （2H, ddd, J = 4.68, 11.68 Hz, H-1）、3.96 （1H, m, H-2）、3.73 （1H, dd, J = 3.92, 11.40 Hz, H-3a）、3.63 （1H, dd, J = 5.76, 11.40 Hz, H-3b）、2.37（2H, t, J = 7.52 Hz, H-2’）、2.04 （4H, d, J = 7.24 Hz, H-8’, H-11’）、1.65 （2H, ‘t’-like, J = 6.76 Hz, H-3’）、1.27-1.32 （20 H, m, H-4’-H-7’, H12’-H-17’）、0.90 （3H, t, J = 6.48 Hz, H-18’）；13C NMR （100 MHz, CDCl3, TMS）：δ 65.2（C-1）、70.3 （C-2）、63.3（C-3）、174.4（C-1’）、34.2（C-2’）、24.9（C-3’）、29.1～29.8（C-4’-C-7’）、27.2（C-8’）、130.0（C-9’）、129.7（C-10’）、27.1（C-11’）、29.1～29.8（C-12’-C-15’）、31.9（C-16’）、22.7（C-17’）、14.1（C-18’）。以上核磁数据与文献[11]数据一致，所以化合物3鉴定为2,3-二羟基油酸丙酯，结构如图5所示。

图5 化合物4的结构Fig.5 Structure of compound 4

2.5 化合物5

无色油状物，ESI-MS给出准分子离子峰619.3[M-H]－，提示该化合物相对分子质量为620，结合1H NMR和13C NMR（CDCl3）数据确定其分子式为C39H72O5。比较化合物4与化合物5的1H NMR和13C NMR数据，发现二者比较相似，主要的区别在于化合物5中多了一组油酸信号，提示该化合物为不饱和二甘油酯。1H NMR和13C NMR具体核磁数据为：1H NMR （400 MHz, CDCl3, TMS）：δ 5.34 （4H, m, H-9’, H-10’, H-9”, H-10”）、5.08（1H, m, H-2）、4.31 （1H, dd, J = 4.48, 11.92 Hz, H-1a）、4.23 （1H, dd, J = 5.68, 11.92 Hz, H-1b）、3.73（2 H, d, J = 5.28 Hz, H-3）、2.34 （4H, t, J = 7.68 Hz, H-2’, H-2”）、2.01 （8H, ‘d’-like, J = 5.92 Hz, H-8’, H-11’, H-8”, H-11”）、1.62 （4H, ‘d’-like, J = 6.28 Hz, H-3’, H-3”）、1.25-1.30 （40 H, m, H-4’-H-6’, H-12’-H-17’, H-4”-H-6”, H-12”-H-17”）、0.88 （6H, t, J = 6.44 Hz, H-18’, H-18”）；13C NMR （100 MHz, CDCl3, TMS）：δ 62.0 （C-1）、72.1 （C-2）、61.5 （C-3）、173.9 （C-1’）、174.0 （C-1”）、2×34.1（C-2’, C-2”, overlap）、2×24.9 （C-3’, C-3”, overlap）、2×（29.1～29.7）（C-4’-C-7’, C-4”-C-7”）、2×27.2 （C-8’, C-8”, overlap）、2×130.0 （C-9’, C-9”, overlap）、2×129.7 （C-10’, C-10” , overlap）、2×27.1 （C-11’, C-11”, overlap）、2×29.1-29.7 （C-12’-C-15’, C-12”-C-15”）、 2×31.9 （C-16’, C-16”, overlap）、2×22.7 （C-17’, C-17”, overlap）、2×14.1 （C-18’, C-18”, overlap）。以上核磁数据与文献[12]数据一致，所以化合物5鉴定为3-羟基1,2-二油酸丙二酯，结构如图6所示。

图6 化合物5的结构Fig.6 Structure of compound 5

2.6 化合物6

无色油状物，ESIMS给出准分子离子峰659.5 [M+K]+，提示该化合物相对分子质量为620，结合1H NMR和13C NMR（CDCl3）数据确定其分子式为C39H72O5。比较化合物5与6的1H NMR和13C NMR数据，发现二者比较相似，主要的区别在于化合物6中的丙三醇的1、3位被酯化，提示两个油酸支链与丙酸醇的1、3位连接。1H NMR和13C NMR具体核磁数据为：1H NMR （400 MHz, CDCl3, TMS）：δ 5.36 （4H, m, H-9’, H-10’, H-9”, H-10”）、4.19 （4H, ddd, J = 4.32, 11.36 Hz, H-1, H-3）、4.10 （1H, m, H-2）、2.36 （4H, t, J = 7.48 Hz, H-2’, H-2”）、2.03 （8H, ‘d’-like, J = 5.88 Hz, H-8’, H-11’, H-8”, H-11”）、1.64 （4H, ‘t’-like, J = 7.48 Hz, H-3’, H-3”）、1.27～1.32 （40 H, m, H-4’-H-6’, H-12’-H-17’, H-4”-H-6”, H-12”-H-17”）、0.89 （6H, t, J = 6.44 Hz, H-18’, H-18”）；13C NMR （100 MHz, CDCl3, TMS）： δ 2×65.0 （C-1, C-3, overlap）、68.3（ C-2）、2×173.9（C-1’, C-1”, overlap）、2×34.1（C- 2’, C-2”, overlap）、2×24.8 （C-3’, C-3”, ove rlap）、2×29.1-29.7（C-4’-C-7’, C-4”-C-7”）、2×27.2（ C-8’, C-8”, overlap）、2×130.3 （C-9’, C-9”, overlap）、2×129.7 （C-10’, C-10”, overlap）、2×27.1（C-11’, C-11”, overlap）、2×（29.1～29.7）（C-12’-C-15’, C-12”-C-15”）、2×31.9（C-16’, C-16”, overlap）、2×22.7（C-17’, C-17”, overlap）、2×14.1（C-18’, C-18”, overlap）。其核磁数据与文献[9]数据一致，所以化合物6被鉴定为1,3-二油酸丙二酯，结构如图7所示。

图7 化合物6的结构Fig.7 Structure of compound 6

2.7 化合物7

无色油状物，ESI-MS给出准分子离子峰887.5 [M+H]+，提示该化合物相对分子质量为886，结合1H NMR和13C NMR（CDCl3）数据确定其分子式为C39H72O5。比较化合物7与6的1H NMR和13C NMR数据，二者比较相似，主要的区别在于化合物7中的丙三醇的1、3位被油酸酯化，2位被硬脂酸酯化。1H NMR和13C NMR具体核磁数据为：1H NMR （400 MHz, CDCl3, TMS）：δ 5.35（4H, m, H-9’, H-10’, H-9”, H-10”）、5.25 （1H, m, H-2）、4.30 （2H, dd, J = 4.28, 11.88 Hz, H-1）、4.13 （2H, dd, J = 5.96, 11.88 Hz, H-3）、2.31（6H, m, H-2’, H-2”,H-2’”）、2.01 （8H, ‘d’-like, J = 5.92 Hz, H-8’, H-11’, H-8”, H-11”）、1.61 （4H, ‘d’-like, J = 6.28 Hz, H-3’, H-3”）、1.25～1.29（40 H, m, H-4’-H-6’, H-12’-H-17’, H-4’”- H-17’”）、0.88 （9H, t, J = 6.48 Hz, H-18’, H-18”,H-18’”）；13C NMR （100 M Hz,CDCl3, TMS）：δ 62.1 （C-1, C-3）、68.8 （C-2）、173.3 （C-1’）、172.8 （C-1”）、173.2 （C-1’”）、3×34.1 （C-2’, C-2”,C-2’”, overlap）、3×24.8 （C-3’, C-3”, C-3’”, overlap）、2×（29.1～29.7）（C-4’-C-7’, C-4”-C-7”）、2×27.2 （C-8’, C-8”, overlap）、2×130.0（C-9’, C-9’”, overlap）、2×129.7 （C-10’, C-10” , overlap）、2×27.1 （C-11’, C-11”, overlap）、2×（29.1～29.7）（C-12’-C-15’, C-12”-C-15”）、29.1～29.7（C-4’”-C-15’”）、 3×31.9 （C-16’, C-16”,C-16’”, overlap）、2×22.7 （C-17’, C-17”, C-17’”, overlap）、3×14.1（C-18’, C-18”, C-18”, C-18’”, overlap）。其核磁数据与文献[8]数据一致，所以化合物7被鉴定为1,3二油酸-2-硬脂酸甘油酯，结构如图8所示。

图8 化合物7的结构Fig.8 Structure of compound 7

2.8 化合物8

无色针晶，ESI-MS 给出准分子离子峰413.2 [M+H]+，提示该化合物相对分子质量为412，结合1H NMR和13C NMR （CDCl3）数据确定其分子式为C29H48O。1H NMR 显示出一组典型的甾醇化合物信号。1H NMR高场区0.80～1.00有6个甲基信号：1.05（3H, d, J = 7.36 Hz, H-21）、1.03 （3H, s, H-19）、0.86 （6H, d, J = 6.12 Hz, H-26, H-27）、0.81 （3H, d, J = 6.92 Hz, H-21）、0.72（3H, s, H-18）。3.95（m，1H）是甾醇3位羟基H的特征信号，δ 5.38（1H, d, J = 5.16 Hz, H-6）是环内双键信号，δ 5.17 （1H, dd, J = 8.64, 15.42 Hz, H-22）、5.05（1H, dd, J = 8.64,15.42 Hz, H-23）是侧链上的双键氢信号，偶合常数大于12提示该双键为反式。1H NMR和13C NMR具体核磁数据为：1H NMR （400 MHz, CDCl3, TMS）：δ 5.38（1H, d, J = 5.16 Hz, H-6）、5.17 （1H, dd, J = 8.64, 15.42 Hz, H-22）、5.05 （1H, dd, J = 8.64, 15.42 Hz, H-23）、3.95 （1H, m, H-3）、1.05 （3H, d, J = 7.36 Hz, H-21）、1.03 （3H, s, H-19）、0.86 （6H, d, J = 6.12 Hz, H-26, H-27）、0.81 （3H, d, J = 6.92 Hz, H-21）、0.72（3H, s, H-18）。13C NMR （100 MHz, CDCl3, TMS）：δ 37.2 （C-1）、31.6（C-2）、71.8（C-3）、42.3（C-4）、140.7（C-5）、121.7（C-6）、31.9 （C-7）、31.9（C-8）、50.1（C-9）、36.5（C-10）、21.2 （C-11）、39.7（C-12）、42.2 （C-13）、56.8（C-14）、24.3（C-15）、28.9（C-16）、55.9（C-17）、12.0（C-18）、19.4（C-19）、40.4（C-20）、21.0（C-21）、138.3（C-22）、129.3（C-23）、51.2（C-24）、31.8（C-25）、18.9（C-26）、21.0（C-27）、25.4（C-28）、12.2（C-29）。其核磁数据与文献[13]一致，鉴定其为豆甾醇，结构如图9所示。

图9 化合物8的结构Fig.9 Structure of compound 8

2.9 化合物9

无色针晶，ESI-MS 给出准分子离子峰409.1 [M-H]－，提示该化合物相对分子质量为410，结合1H NMR和13C NMR （CDCl3）数据确定其分子式为C29H46O。比较化合物9与8的1H NMR和13C NMR数据，二者非常相似，唯一的区别在于化合物9在δ 5.35 （1H, d, J = 5.16 Hz, H-7）处被化合物8多了1个环内双键。1H NMR和13C NMR具体核磁数据为：1H NMR （400 MHz, CDCl3, TMS）：δ 5.53 （1H, d, J = 5.16 Hz, H-6）、5.35 （1H, d, J = 5.16 Hz, H-7）、5.17 （1H, m, H-23）、5.15 （1H, m, H-22）、3.59 （1H, m, 3-OH）、1.04 （3H, d, J= 6.64 Hz, H-21）、0.84 （3H, d, J= 6.20 Hz, H-28）、0.82（3H, d, J= 6.50 Hz H-26）、0.81 （3H, d, J= 6.50 Hz, H-27）、1.01（3H, s, H-19）、0.55 （3H, s, H-18）；13C NMR（100 MHz, CDCl3, TMS）：δ 39.4（C-1）、31.9（C-2）、71.0（C-3）、40.8（C-4）、139.5（C-5）、117.4（C-6）、121.7（C-7）、140.7（C-8）、49.4（C-9）、37.1（C-10）、21.1（C-11）、40.2 （C-12）、43.2（C-13）、55.1（C-14）、21.0（C-15）、28.5（C-16）、55.9（C-17）、12.0（C-18）、16.9（C-19）、40.5（C-20）、21.4（C-21）、135.6（C-22）、132.0（C-23）、42.8（C-24）、33.1（C-25）、19.6（C-26）、19.9（C-27）、17.6（C-28）。其核磁数据与文献[14]一致，鉴定其为麦角甾醇，结构如图10所示。

图10 化合物9的结构Fig.10 Structure of compound 9

3 讨 论

本研究采用有机溶剂提取得到粗提物，利用硅胶柱层析和Sephadex LH-20硅胶柱层析等分离方法从中米糠粗提物中分离得到9个单体化合物，通过核磁共振和电喷雾质谱鉴定其化学结构分别为油酸、亚油酸、2,3-二羟基硬脂酸丙酯、2,3-二羟基油酸丙酯、3-羟基1,2-二油酸丙二酯、1,3-二油酸丙二酯、1,3-二油酸-2-硬脂酸甘油酯、豆甾醇、麦角甾醇。该研究结果说明米糠中的脂质成分主要是不饱和脂肪酸及含有不饱和脂肪酸的甘油酯，如油酸不仅供给人体所需的大量热能外，还能调节人体血浆中高、低密度脂蛋白与胆固醇的比例[16]；亚油酸是必需脂肪酸，能降低血液胆固醇，促进胆固醇分解为胆酸，抑制人体对胆固醇的吸收，提高血管壁的弹性，预防动脉粥样硬化，还具有软化血管、扩张动脉的作用，因而对高血压、冠心病等心血管疾病有预防作用[17]。

随着对米糠的化学成分及其生理功能的进一步深入研究，米糠作为功能性食品的潜在价值会逐渐被人们所认识和接受。相信在不久的将来，米糠的研究成果会不断转化为更多的产品而逐步得到充分利用，开发出更多的健康产品，产生更高的附加值和带来显著的经济效益。

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Isolation and Identification of Lipid-Soluble Compounds from Rice Bran

LIU Tian-xing1,2, WANG Wei1, GUO Jia1, XIN Zhi-hong1,*
(1. College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China; 2. Nanjing Agricultural University Library, Nanjing 210095, China)

Crude extract was obtained by the extraction of rice bran using organic solvent. Nine pure compounds were isolated and identified from the extract using silica gel column chromatography and Sephadex LH-20 column chromatography. Their chemical structures were elucidated as oleic acid, linoleic acid, 2,3-dihydroxypropyl stearate, 2,3-dihydroxypropyl oleate, 3-hydroxy-1,2-propyl diolein,1,3-diolein, 1,3-2-oleyl,2-stearoyl triacylglycerol, stigmasterol, and ergosterol by nuclear magnetic resonance (NMR) and electro-spray ionization mass spectrometry (ESI-MS).

rice bran; fat-soluble compounds; isolation and purification; structural identification

TS201.2

A

1002-6630（2014）09-0057-06

10.7506/spkx1002-6630-201409013

2013-11-13

中央高校基本科研业务费专项资金项目（KYZ201118）；“十二五”国家科技支撑计划项目（2012BAD33B10）

刘天行（1975—），女，讲师，硕士，研究方向为食品营养与化学。E-mail：ltx@njau.edu.cn

*通信作者：辛志宏（1974—），男，教授，博士，研究方向为食品营养与化学。E-mail：xzhfood@njau.edu.cn