朱金凤 吴 萍
(青海大学医学院,西宁,810010)
酸脂清胶囊对实验大鼠急性痛风性关节炎模型IL-10和IL-1Ra的影响
朱金凤 吴 萍
(青海大学医学院,西宁,810010)
目的:通过观察酸脂清胶囊的不同提取物对实验大鼠痛风性关节炎模型IL-10和IL-1Ra的影响,研究酸脂清胶囊的抗炎机制和对痛风性关节炎软骨破坏的影响,进一步指导临床用药。方法:酸脂清胶囊不同提取物(水提物,醇提物)给大鼠灌胃7d后,以尿酸钠晶体造成大鼠急性痛风性关节炎模型,分别在造模后9 h和12 h随机抽取8只大鼠测量踝关节直径,下腔静脉取血Elisa检测IL-10和IL-1Ra的量。结果:三个药物组的IL-10和IL-1Ra较模型组均有不同程度的升高,但水提组升高最为明显(P<0.05)。结论:酸脂清胶囊通过提高IL-10和IL-1Ra的水平,达到抗炎、保护关节软骨的作用,尤以水提组为优。
酸脂清胶囊;急性痛风性关节炎;IL-10;IL-1Ra
急性痛风性关节炎是一种严重危害人类健康的代谢性疾病,急性发作主要表现为关节剧烈红肿疼痛,病情多持久迁延,严重的滑膜炎症伴随痛风性关节炎反复发作会导致关节软骨破坏。酸脂清胶囊是青海大学医学院文绍敦教授开发的中药胶囊制剂,临床研究表明酸脂清胶囊对痛风及痛风性关节炎有良好的治疗作用。大量炎症因子参与疾病的发展导致严重的关节炎症和软骨破坏,但也有一部分炎症因子有拮抗炎症的作用,其中炎症因子IL-10和IL-1Ra有明显的抗炎及关节保护作用。本实验拟通过酸脂清胶囊对急性痛风性关节炎模型大鼠IL-10和IL-1Ra的影响,研究其抗炎及关节保护作用。
1.1 材料
1.1.1 实验动物 二级Wistar大鼠(200±20)g,雄性,兰州大学医学院实验动物中心提供。
1.1.2 试验药物 酸脂清提取物的制备:按大黄100 g,姜黄33 g,土茯苓27 g的比例入药,采用清水煎煮和95%乙醇索氏提取、浓缩后,稀释成0.7 g/mL(生药折合量)的溶液。羧甲基纤维素钠(蒸馏水配制,2%)溶液中加入研细的秋水仙碱片制成5 mg/L的混悬剂。
1.1.3 主要试剂 尿酸钠(批号:20120827,上海江莱生物科技有限公司提供),秋水仙碱片(批号:120401,通化盛和药业股份有限公司提供),羧甲基纤维素钠(批号:20120915,天津市百世化工有限公司提供),磷酸缓冲盐溶液(缓冲液,Phosphate Buffersaline,PBS)为自行配制,高温高压灭菌备用。
1.1.4 主要设备 索氏提取器,旋转蒸发仪RE-3000(上海亚荣生化仪器厂),恒温水浴锅,低温冰箱(-80℃),TG16-WS高速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司),恒温箱(上海一恒科学仪器有限公司),酶标定量测定仪(深圳雷杜生命科学有限公司),游标卡尺(桂林可立德量器有限公司)。
1.1.5 Elisa试剂盒(48T) IL-10(批号:JFCX2876)、IL-1Ra(批号:JFCX1321)北京久峰润达生物技术有限公司提供。
1.2 方法
1.2.1 实验分组及给药 按组间均衡原则,将80只大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组(秋水仙碱组)、水提酸脂清组、醇提酸脂清组,每组16只。空白组和模型组分别给予生理盐水灌胃、三个药物组分别给予秋水仙碱和酸脂清胶囊的水提物和醇提物10 mL/kg,2次/d,共7 d。
1.2.2 尿酸钠晶体(尿酸钠,Monosodium Urate,MSU)局部注射诱导大鼠急性关节炎模型 模型组及各药物组于灌胃第7天最后一次灌胃0.5 h后大鼠抓握固定后测量右踝关节直径,并选定踝关节外侧后方为穿刺点向关节腔注入20 mg/mL MSU溶液100μL,诱导急性关节炎模型,空白组注射等体积的PBS。
1.2.3 样本采集 造模9 h后各组随机抽取实验大鼠8只,以20%乌拉坦0.4 mL/100g腹腔麻醉,测量踝关节直径,开腹下腔静脉取血,存于普通真空采血管中,静置0.5 h后3000 r/min离心10 min,取血清分装于1.5 mL离心管中,-20℃保存。12 h后对剩余大鼠同样进行麻醉后测量关节直径、取血。
1.2.4 指标检测 IL-10、IL-1Ra均按照实试剂盒说明书操作进行浓度检测。
1.3 统计学方法 各检测指标组间采用单因素方差分析,各指标9 h和12 h之间的比较采用独立样本t检验。
2.1 一般情况 除空白组外,造模后大鼠右踝关节均不同程度的红肿、活动受限,部分出现三足行走现象。大鼠造模前后关节直径变化见表1。
表1 造模前后大鼠关节直径变化(mm,±s)
表1 造模前后大鼠关节直径变化(mm,±s)
注:与空白组比较,△P<0.05;与模型组比较,▲P<0.05,与水提组比较,□P<0.05,与醇提组比较,■P<0.05。
时间空白组模型组水提组醇提组秋水仙碱组9 h 0.08±0.05 0.85±0.25△0.5±0.26△▲0.62±0.18△▲0.67±0.2△▲□12 h 0.07±0.05 0.91±0.17△0.71±0.25△▲0.75±0.25△▲1.02±0.35△□■t 0.114 4.386-0.303-0.627-0.350 P 0.916 0.012 0.313 0.548 0.548
2.2 酸脂清胶囊对实验大鼠痛风关节炎模型IL-10和IL-1Ra的影响 造模9 h、12 h后,各组的IL-10和IL-1Ra均有不同程度的改变(见表2),模型组因炎症反应抗炎因子浓度下降,各药物组IL-10和IL-1Ra有不同程度的升高,部分药物组IL-10和IL-1Ra浓度可以超过空白组(P<0.05),其中以水提组IL-10和IL-1Ra浓度最高。
表2 IL-10和IL-1Ra检测结果(ng·L-1,±s)
表2 IL-10和IL-1Ra检测结果(ng·L-1,±s)
注:与空白组比较,*P<0.05;与模型组比较,△P<0.05;与水提组比较,▲P<0.05,与醇提组比较,□P<0.05。
组别IL-10 9 h 12 h P IL-1Ra 9 h 12 h P 00 59.395±3.654 0.987模型组44.376±4.837 45.167±4.987 0.704 52.618±8.896 51.065±6.343 0.805水提组64.791±9.175*△66.503±13.929*△0.824 71.276±10.21*△71.680±6.176*△0.942醇提组48.781±9.767▲50.154±9.475▲0.827 69.000±5.488△65.839±6.131△0.415秋水仙碱组61.379±8.561*△□51.355±8.424▲0.099 71.721±7.687*△64.290±10.598△空白组51.111±3.600 51.351±3.633 0.938 59.238±3.7 0.240
3.1 酸脂清胶囊对痛风性关节炎关节炎症的影响体外实验表明细胞因子如IL-4、IL-10可抑制促炎症性细胞因子的活性[1]。滑膜组织培育实验表明IL -10可抑制IL-1β和TNF-α的生成,影响促炎性细胞因子mRNA的稳定性,使其水平下降[2],还可增加由脂多糖刺激的单核细胞IL-1Ra的生成。IL-1Ra为滑膜细胞分泌的IL-1受体的天然拮抗剂,是一种IL-1与IL-1R相互结合的竞争性抑制物,可抑制IL-1β的信号传递,是IL-1有效的拮抗剂[3-4]。本实验结果显示酸脂清胶囊提取物可明显升高模型大鼠血IL-1Ra和IL-10的浓度,表明酸脂清胶囊可通过升高血IL-1Ra和IL-10浓度发挥良好的抗炎作用,其中水提物效果较好。
3.2 酸脂清胶囊对关节软骨破坏的影响 多种细胞因子可多方向调节软骨细胞功能,IL-10是一种抑制或阻止软骨细胞分解的细胞因子[5-7],除可抑制直接破坏软骨的IL-1[8]和TNF等炎性细胞因子的合成,还可抑制软骨细胞NOS和MMPs的表达[9],抑制滑膜组织中的组织蛋白酶K、骨性蛋白配体等[10],从而阻止软骨和关节破坏,同时它还提高I型胶原蛋白的合成水平,对关节软骨有保护和修复作用[11-12]。IL-1Ra能特异性地抑制T细胞表面IL-1R与IL-1结合[13],可抑制关节软骨细胞凋亡[14],在关节炎中起重要的关节保护作用。本实验结果显示痛风模型组IL -1Ra和IL-10浓度较其余各组显著降低,说明痛风性关节炎发作时软骨保护机制降低。酸脂清胶囊提取物可显著升高血IL-1Ra和IL-10的浓度,Zhang等[15]使用基因转染的手段把IL-1Ra基因注射到兔膝关节,使IL-1Ra的表达量增多,结果观察到了关节软骨损伤的减轻,故说明酸脂清胶囊有良好的关节软骨保护作用,其中水提物作用较为明显。
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(2013-05-22收稿 责任编辑:徐晖)
The influence of Suanzhiqing Capsules on IL-10 and IL-1Ra in Rats M odel w ith Acu te Gouty Arthritis
Zhu Jinfeng,Wu Ping
(Qinghai University,Qinghai810010,China)
Objective:To observe the effects of differentextractions of Suanzhiqing capsules on ratswith acute gouty arthritis.To study on the anti-inflammation mechanism and effect on cartilage damages in acute gouty arthritis rats.Methods:Water extractions and ethanol extractions of Chinesemedicines Suanzhiqing capsules were administrated intragastrically to the model rats.Seven days later,the ratswere given uric acid sodium to cause acute gouty arthritis.And after 9 hours and 12 hours,eight ratswere randomly selected each time in each group tomeasure the diameter of the ankle joint,and the contents of IL-1and IL-1Ra through Elisa method on the blood taken from inferior vena cava.Results:The level of IL-10 and IL-1Ra in themedicine groups were increased to some extent compared with the control group.Themost significant increase was observed in the water extraction group.Conclusion:Suanzhiqing capsules can raise the level of IL-10 and IL-1 to cure inflammation and protect articular cartilage,especially with itswater extraction group.
Suanzhiqing capsules;Acute gouty arthritis;IL-10;IL-1Ra
R243;R684.3
A
10.3969/j.issn.1673-7202.2014.01.028
2012年度青海大学医学院中青年教师科研基金团队项目(编号:2012-KYT-01)
朱金凤,E-mail:814043555@qq.com