复方中药对热应激蛋鸡肝脏、空肠和卵巢HSP70表达量的影响

■韩喜彬 谢建中 巴彩凤

（1.辽宁医学院基础医学院，辽宁锦州121001；2.辽宁医学院实验动物中心，辽宁锦州121001）

夏季高温会导致热应激的发生，致使蛋鸡生产性能下降，因此，抗热应激添加剂的研究备受关注，并取得了一系列成果，如维生素C、复合电解多维等。近年来，中草药的研发与使用受到更多关注，中草药抗热应激添加剂成为研究的热点。相关研究表明，中草药添加剂可以提高热应激蛋鸡的采食量、产蛋率，降低料重比，并能提高机体免疫力等[1]，其抗热应激机制一般认为与调节机体酸碱平衡、甲状腺激素分泌以及超氧化物歧化酶（SOD）活性等有关[2]。本试验通过研究中药复方对热应激蛋鸡的肝脏、卵巢和空肠HSP70基因表达的影响，初步探讨了所选中药复方的分子调控机制，为中草药添加剂开发利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物与试验设计

选用60周龄海兰褐蛋鸡80只，随机分为4组，每组20只,即空白对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组。根据产蛋期营养需要配制基础日粮，常规饲喂和饮水，预试期1周，正式试验期40 d，慢性热应激条件为：平均温度31～32℃、平均相对湿度75%～80%。

1.2 试验材料与试验仪器

黄芪、人参、白术、茯苓和甘草65℃烘干2 h,按1∶1∶1∶1∶0.5比例配合，混合均匀后粉碎，经200目筛制得干粉，分装备用。空白对照组饲喂基础日粮，基础日粮组成及营养水平见表1，试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组在基础日粮中分别添加0.5%、1.0%、1.5%中药干粉。中草药均购自锦州辽西国药大众药房。试验所用仪器包括酶标仪680 ELX-800型（美国伯乐）、电动玻璃匀浆机DY89-Ⅱ型（广州深华）、离心机TG16W型（长沙湘智）、分光光度计UV-1500型（上海美析）。

1.3 HSP70表达检测

在正式试验第7、10、20、30、40 d每组随机抽取2只鸡，剖杀取出肝脏、卵巢和空肠，各称取0.5 g，液氮快速冷冻，研磨，加入10倍的0.9%冷生理盐水，电动玻璃匀浆机破碎组织细胞，3 200 r/min离心5 min，取上清液用鸡HSP70定量试剂盒测定含量（上海酶联生物），具体步骤参照试剂盒说明书进行。

表1 基础日粮组成及营养水平

1.4 数据处理

2 结果

2.1 复方中药对蛋鸡肝脏HSP70表达的影响(见表2)

表2 复方中药对蛋鸡肝脏HSP70表达的影响(ng/ml)

由表2可见，各组蛋鸡肝脏HSP70蛋白含量在第7、10、40 d存在显著差异（P＜0.05），在第20、30 d差异不显著（P＞0.05）；对照组（热应激组）蛋鸡肝脏HSP70蛋白含量随时间变化持续升高，试验组无明显变化规律，但HSP70蛋白含量均在第10 d达到最高；各试验组HSP70蛋白含量在第7、10 d高于对照组，在第20、30、40 d低于对照组；3个试验组间差异均不显著（P＞0.05），即中草药添加剂量与蛋鸡肝脏HSP70表达量间无相关性。

2.2 复方中药对蛋鸡卵巢HSP70表达的影响(见表3)

表3 复方中药对蛋鸡卵巢HSP70表达的影响(ng/ml)

由表3可见，各组蛋鸡卵巢HSP70蛋白含量在第7、10、40 d存在显著差异（P＜0.05），在第20、30 d差异不显著（P＞0.05）；对照组蛋鸡卵巢HSP70蛋白含量随时间变化先降低后持续升高，试验组表现为先升后降，在第10 d达到最高；试验组HSP70蛋白含量在第7、10、20 d均高于对照组，在第30、40 d低于对照组；3个试验组间差异不显著（P＞0.05），即中草药添加剂量与蛋鸡卵巢HSP70表达量间无相关性。

2.3 复方中药对蛋鸡空肠HSP70表达的影响(见表4)

表4 复方中药对蛋鸡空肠HSP70表达的影响(ng/ml)

由表4可见，试验Ⅲ组蛋鸡空肠HSP70蛋白含量在第20 d显著高于对照组(P＜0.05)，在其余时间差异均不显著(P＞0.05)；对照组蛋鸡空肠HSP70蛋白含量随时间变化持续升高，试验组表现为先升高后降低，在第20 d达到最高；试验组HSP70蛋白含量在第10、20 d高于对照组，在第30、40 d低于对照组；3个试验组组间差异不显著（P＞0.05），即中草药添加剂量与蛋鸡空肠HSP70表达量间无相关性。

3 讨论

根据近年报道显示，HSP70主要通过三方面增强机体热耐受性：①分子伴侣作用，特别是对蛋白质分子的折叠、转运、寡聚体的形成和解聚等，可以维持细胞的结构和功能，在不利条件下，提高细胞的抵抗力，起到应激保护作用[3]；②抗氧化作用，可以提高血清SOD、GSH-Px活性，同时降低MDA含量，缓解过氧化过程的发生[4]；③免疫协同作用，可以作为抗原肽的载体，通过其表面的肽结合位点与肽段结合增强后者的抗原性，发挥抗原提呈作用[5]。由于HSP70保护作用得到证实，如何通过饲养手段提高HSP70的表达量已成为当今畜禽抗应激研究的热点，但肖敏华等[6]、祁延泽[7]认为，HSP70的保护作用有限，当应激时间过长，细胞凋亡后溢出的HSP70会破坏其他细胞膜的完整性，使机体受损进程加快。本研究结果显示，中药组蛋鸡肝脏HSP70表达量在试验初期存在高于对照组（热应激组）（P＜0.05或P＞0.05）的情况，空肠表达量在中期存在高于对照组（P＜0.05或P＞0.05）的情况，对照组(热应激组)的各指标表达量在整个试验期持续升高，而试验组经过高峰期后在中草药调节下HSP70表达量下降，说明复方中药具有双向调节作用，在应激初期诱导机体高表达HSP70，对机体细胞形成保护，减轻胞核损伤，增强机体热抵抗力，而随着热应激时间的延长，中草药可以抑制HSP70的表达，以防止过表达造成的伤害，HSP70表达量的动态变化说明细胞的热适应过程。上述研究结果与钟翠红等[8]、毛帅等[9]的研究结果相似，中草药抗热效应属于多靶点调节，包括提供免疫器官指数，增强免疫功能，调节体液平衡等，而中草药对HSP70表达的调节机制尚不明确，有待进一步的研究。

4 结论

所选中药复方在蛋鸡慢性热应激初、中期可以促使肝脏、卵巢和空肠HSP70表达量升高，提高机体耐热和抗损伤能力，在热应激后期可诱导HSP70表达量下降，防止过表达造成的进一步伤害。