Survivin基因在大肠癌中的表达和临床意义

崔晓宁，舒新刚

(1.唐山职业技术学院医学系外科教研室，河北唐山 063000;2.唐山钢铁公司医院)

大肠癌(colorectal cancer，CRC)是人类常见的消化系统恶性肿瘤之一，每年全球大肠癌新发病例数＞94万，每年近50万人死于大肠癌[1-2]。近25年来，大肠癌已成为我国发病率增长最快的恶性肿瘤[3-4]。目前，随着分子生物学技术的发展，探讨分子生物学标志物与肿瘤预后的关系已成为研究的趋势。大量的实验证实，大肠癌发生发展(包括侵袭和转移)是一个多步骤、多基因、多因素综合作用的复杂过程，与多个原癌基因的激活和过度表达密切相关。为探讨凋亡抑制基因Survivin在大肠癌发生、发展中的作用和意义，本研究采用免疫组化法检测了75例大肠癌组织Survivin的表达情况，并分析了Survivin表达与患者性别、年龄，肿瘤部位、分化程度、Dukes分期和淋巴结转移等参数的关系，探讨Survivin表达与大肠癌生物学行为的关系，以期为大肠癌的早期诊断、早期治疗和预后评估提供资料。

1 材料与方法

1.1 研究对象 唐山市协和医院2009年1月至2013年10月具有完整临床和病理资料的75例大肠癌组织以及正常大肠黏膜12例，大肠癌中男41例、女34例，患者中位年龄58岁。肿瘤组织学分级分型均根据全国大肠癌病理研究统一规范，高分化35例、中分化24例、低分化16例，有淋巴结转移30例、无淋巴结转移45例，Dukes临床分期A期9例、B期24例、C期33例、D期9例。所有患者术前均未接受化疗、放疗和免疫治疗等。

1.2 实验方法 组织标本经10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋，4μ m厚连续切片。鼠抗人Survivin多克隆抗体(1:100)、SP免疫组化试剂盒均由福州迈新生物技术开发有限公司提供。采用SP免疫组化法检测Survivin蛋白的表达，用已知阳性组织切片做阳性对照，以PBS代替一抗做阴性对照。

1.3 免疫组化染色结果判定 Survivin阳性染色位于细胞质和/或细胞核，呈棕黄色颗粒状。采用双盲法评定结果:①每张切片随机选取10个高倍视野(×400)计数100个细胞，按阳性细胞百分比计分:＜5%计0分，6-25%计1分，26-50%计2分，51-75%计3分，＞75%计4分;②依据着色深浅记分:无着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，深棕褐色为3分。以①×②的分值判定结果:＜1.9为阴性(-)，2.0-2.9为弱阳性(+)，3.0-3.9为阳性(++)，＞4.0为强阳性(+++)。

1.4 统计分析 应用SPSS 19.0统计软件行卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同大肠组织Survivin蛋白的表达情况 Survivin蛋白阳性产物主要位于细胞质，呈粗细不一的黄色至深棕黄色颗粒状，也可见部分胞核着色。正常大肠黏膜Survivin的阳性表达为0%，大肠癌组织Survivin的阳性表达率为69.3%(52/75)，大肠癌组织Survivin的阳性表达率明显高于大肠正常黏膜(P＜0.01)。

2.2 Survivin表达与大肠癌临床病理参数的关系 大肠癌组织Survivin表达与年龄、性别、肿瘤部位无关(P＞0.05);与有无淋巴结转移、Dukes分期和分化程度有关(P＜0.01，P＜0.05)。见附表:

附表 Survivin表达与大肠癌临床病理参数的关系

3 讨论

Survivin是1997年耶鲁大学的Ambrosini等[2]在人类基因组文库中利用效应细胞蛋白酶受体-1(effector cell protease receptor-1，EPR-1)的cDNA筛选克隆获得的凋亡抑制蛋白。Survivin是凋亡抑制蛋白(IAP)家族的新成员，是目前发现的作用最强的凋亡抑制因子，具有抑制细胞凋亡和调节细胞分裂的双重功能，被认为是维持细胞增殖与凋亡平衡的界面分子[2-3]。近年来大量研究表明，细胞凋亡调节机制的失控与癌变过程密切相关[5]。本研究发现，75例大肠癌组织中Survivin蛋白的阳性表达率为69.3%(52/75)，明显高于正常大肠黏膜Survivin蛋白的表达(0%)，提示Survivin在大肠癌中的高表达抑制了细胞的正常凋亡，延长了肿瘤细胞的生存期，从而导致细胞的异常增殖和恶化，与国内外相关文献报道一致。Sarela等[6]在114例大肠癌的研究中发现，Survivin mRNA在肿瘤中表达的阳性率明显高于癌旁正常黏膜，同时还发现，Survivin的表达与Ⅰ-Ⅲ期大肠癌患者的生存状态密切相关;Lin等[7]的研究结果也提示，Survivin在肿瘤组织中的表达是一个渐进过程，大肠组织癌变过程的早期就有Survivin的表达，提示Survivin可作为大肠癌早期阶段的分子标记物。

本研究还发现，大肠癌Survivin的表达与淋巴结转移、Dukes分期和分化程度有关。浸润与转移是大肠癌的主要生物学特征，也是大肠癌患者死亡的主要原因。近年来，淋巴结转移已作为重要的独立预后因素引起广泛重视。Survivin表达升高抑制细胞凋亡，肿瘤的恶性程度和生存能力提高，使得肿瘤细胞更容易通过侵袭组织而发生转移。另外，Survivin除具有凋亡抑制作用外，还有血管保护、促进肿瘤血管生成等功能，在肿瘤的浸润转移中扮演重要角色，研究发现，在伴血管侵袭的肿瘤中Survivin的阳性表达率有增高的趋势[8];因此提示，Survivin不仅可以作为一种新的大肠癌诊断标志物，还可作为判断大肠癌恶性程度的参考指标，可能为大肠癌的基因治疗提供新靶点。

目前多方面的研究提示，Survivin表达升高引起肿瘤细胞凋亡的丧失与肿瘤的发生密切相关，且其表达与肿瘤的恶性程度、预后不良呈正向关系，使其在肿瘤的早期诊断、治疗和评价预后等方面具有独特的优势，成为了肿瘤早期诊断研究中的一个热点。随着研究的不断深入，必将发现许多Survivin与肿瘤新的关系，从而为防治肿瘤提供新证据。

[1] Hengarter MO. The biochemistry of apoptosis[J]. Nature, 2000,407(6805): 770-776.

[2] Ambrosini G, Adida C, Altieri DC. A novel anti-apoptosis gene,Survivin, expressed in cancer and lymphoma[J]. Nat Med, 1997,3(8): 917-921.

[3] Takeuchi H, Morton DL, Elashoff D, et a1. Survivin expression by metastatic melanoma predicts poor disease outcome inpatients receiving adjuvant polyvalent vaccine[J]. Int J Cancer, 2005,117(6):1032- 1038.

[4] Suga K, Yamamoto T, Yamada Y, et a1. Correlation between transcriptional expression of survivn isoforms and clinicopatological findings in human colorectal carcinomas[J]. Oncol Rep, 2005,13(5): 891-897.

[5] Lee JE,Lee SJ,Namkoong SE,et a1.Gene-gene and geneenvironmental interactions of p53, p2l and IRF-1 polymorphisms in Korean women with cervix cancer[J]. Int J Gynecol Cancer,2004, 14(1): 118-125.

[6] SarelaAI, Macadam RC, Farmery SM, et a1. Expression of the antiapoptosis gene, survivin, predicts death from recurrent colorectal carcinoma[J]. Gut, 2000,46(5):645-650.

[7] Lin LJ, Zheng CQ, JinY, et a1. Expression of srvivin protein in human colorectal carcinogenesis[J]. World J Gastroenterol, 2003,9(5): 974-977.