子宫颈上皮内瘤变及鳞癌组织Survivin与C-myc蛋白表达及其意义

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(青岛大学医学院，山东 青岛 2660021 病理学教研室； 2 附属医院病理科)

子宫颈癌是女性生殖系统最常见恶性肿瘤之一，近年来其发病率有增高且呈年轻化的趋势，非早期者严重影响女性身体健康。研究结果表明，宫颈癌的发生、发展受多种因素的影响，有多个阶段及多种原癌基因的活化和抑癌基因的失活参与其中[1]。由于子宫颈癌的发生往往伴有一系列的前驱病变并可存在多年，如果能够早期发现，就可早期进行相应的监控和治疗，从而将癌变消灭在萌芽状态，降低宫颈癌的发生率及危害性。因此，探讨子宫颈癌早期诊断的分子生物学指标具有重要的临床价值。本文通过对Survivin、C-myc蛋白在子宫颈上皮内瘤变(CIN)及鳞状细胞癌(SCC)组织中的表达及关联性研究,探讨两者在CIN及SCC发生、发展中的作用,旨在为临床选择该病的治疗方案提供指导。现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

随机选取我院2010年1月—2012年1月手术活检及切除的子宫颈CIN及SCC标本100例，病人年龄20～76岁，平均41.6岁。CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ级各20例。鳞癌40例，其中高中分化鳞癌22例，低分化鳞癌18例；临床Ⅰ～Ⅱ期24例，Ⅲ～Ⅳ期16例；淋巴结转移者8例；术前均未经过放化疗。同时收集10例非瘤变宫颈鳞状上皮组织作为对照。

1.2 研究方法

所有组织标本以4 μm厚连续切片，二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化处理，以体积分数0.03的 H2O2溶液消除内源性过氧化物酶，PBS缓冲液(pH 7.4)洗片，以柠檬酸缓冲液(pH 6.0)抗原修复鼠抗人C-myc、羊抗人Survivin抗体，待其自然冷却后，分别采用PV-6000、 PV-9003法检测相关组织中C-myc、Survivin蛋白的表达情况。鼠抗人C-myc单克隆抗体(北京中杉金桥生物有限公司)1∶100，羊抗人Survivin抗体(Santa Cruz Biotechnology, Inc)1∶100。实验分别用已知阳性组织切片作为阳性对照，用PBS代替两种一抗作为阴性对照。

1.3 免疫组化结果判定

Survivin蛋白阳性表达为细胞核或细胞浆出现棕黄色颗粒，C-myc蛋白阳性表达为细胞核出现棕黄色颗粒。免疫组化结果判定标准参照文献[2-3]的方法。

2 结 果

2.1 不同病变子宫颈组织中Survivin、C-myc蛋白的表达

本文10例非瘤变子宫颈鳞状上皮组织均未发现Survivin、C-myc蛋白表达。由表1可见，与非瘤变组相比，CIN及SCC组Survivin的阳性表达强度显著增高(Hc=23.209,q=18.497、26.022；P均<0.01)；随CIN分级的增高，Survivin的阳性表达强度也显著增高(Hc=45.633,q=6.905～11.498；P均<0.01)；CINⅢ组与SCC组、CINⅠ组与非瘤变组比较，Survivin的阳性表达强度显著增高(q=24.438、6.078；P均<0.01)。

由表2可见，与非瘤变组相比，CIN及SCC组C-myc的阳性表达强度表达强度显著增高(Hc=21.315,q=18.086、25.437；P均<0.01)；随CIN分级的增高，C-myc的阳性表达强度显著增高(Hc=36.383,q=6.331～9.244，P均<0.01)；CINⅢ组与SCC组、CINⅠ组与非瘤变组比较，C-myc的阳性表达强度均显著增高(q=26.156、6.463，P均<0.01)。

2.2 Survivin、C-myc蛋白的表达与子宫颈SCC主要临床病理特征的关系

子宫颈SCC组织中Survivin及C-myc蛋白的表达阳性率在高中、低分化组间、淋巴结有无转移组间及临床Ⅰ～Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ期组间比较，差异均有显著性(χ2=6.000～10.909，P<0.05)。见表3、4。

表1 Survivin在不同病变子宫颈组织中的表达(例)

表2 C-myc在不同病变子宫颈组织中的表达(例)

表3 Survivin蛋白表达与子宫颈SCC主要临床病理特征的关系

表4 C-myc蛋白表达与子宫颈SCC主要临床病理特征关系

2.3 Survivin、C-myc蛋白表达的相关性

Survivin、C-myc蛋白在CIN组织的表达呈显著正相关(r=0.680,P<0.01)。见表5。Survivin、C-myc蛋白在SCC组织的表达亦呈显著正相关(r=0.722,P<0.01)。见表6。

表5 Survivin和C-myc蛋白在CIN组织表达相关性(例)

表6 Survivin和C-myc蛋白在子宫颈SCC组织中表达的相关性(例)

3 讨 论

3.1 Survivin蛋白在CIN及SCC组织中表达意义

Survivin蛋白是目前发现的最强的凋亡抑制因子[4]，生理状态下，除胎盘和胸腺组织中存在程度不同的Survivin蛋白表达外，大多数组织中均无Survivin蛋白的表达[5]。它在正常成熟的组织中不表达，但广泛表达于许多人体肿瘤组织中，通过抑制Caspase的表达，促使DNA受损细胞无限增殖，导致恶性肿瘤的发生。

本文结果提示， Survivin表达增强出现在CIN的初始阶段，且随CIN分级的增高而增强，在SCC组织中表达最强，且与SCC分化、临床分期及淋巴结转移有关，这与许多研究结果一致[6-7]。BRANCA等[6]的研究结果显示，Survivin是一种可以预测宫颈癌发生的早期标志物。朱燕等[7]对40例CIN及64例宫颈癌组织的研究结果显示，低分级瘤变(L-CIN)与高分级瘤变(H-CIN)间及L-CIN 与宫颈癌间Survivin表达差异均有显著性。此差异性可能与CIN病例的分组不同及免疫组化结果判断标准不同有关。上述结果表明，Survivin参与了CIN和SCC的发生和发展过程，其异常是预示SCC可能发生的一个早期事件，提示临床应注意随访Survivin阳性的CIN病人或尽早给予及时有效治疗。另外，上述结果亦表明，Survivin可作为评估子宫颈SCC生物学行为的一个重要指标。

3.2 C-myc蛋白在CIN及SCC组织中表达的意义

c-myc是一种原癌基因，其表达产物位于癌细胞核内，属于信号传导通路的下游基因[8]，该基因是决定细胞从G0/G1期进入S期的开关，在细胞由正常转向肿瘤性生长过程中起到至关重要的作用[9]。研究表明，正常宫颈组织中c-myc不表达，CINⅢ组织比CINⅡ、CINI组织表达增强,宫颈癌组织中有c-myc基因扩增或过度表达且与病人的不良临床预后有关，其表达强度随恶性程度的增高而增强[10]。本文结果亦与上述报道基本一致。说明C-myc的过表达亦出现在CIN的初期并在CIN和SCC的发生发展过程中发挥重要的作用。提示C-myc阳性的CIN病人具有癌变的高危性，应注意随访，同时亦可作为评估子宫颈SCC生物学行为的重要指标。

3.3 Survivin、C-myc蛋白在CIN及SCC组织中的相关关系

关于两者在CIN及SCC组织中的相关关系，文献中鲜有报道。成克伦[11]通过对survivin和c-myc在前列腺癌组织中表达的研究显示，两者呈显著正相关关系；PAPANIKOLAOU等[12]对乳癌细胞系研究显示，HER2通过核转录因子NF-κB 和c-myc调控Survivin的表达，这一研究揭示出HER2阳性的乳癌细胞的放疗抵抗作用是通过HER2诱导NF-κB和c-myc表达，激活下游靶基因Survivin而抑制凋亡实现的。本文研究结果显示，Survivin、C-myc蛋白在CIN及SCC组织表达均呈显著正相关,提示两者共同促进CIN及SCC的发生及发展。联合检测Survivin、C-myc，对于筛查高危CIN个体并密切随访或尽早给予及时有效治疗，具有重要的临床价值。

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