高效液相色谱法测定钟祥苦荞茶中芦丁的含量

刘娥，郭鹏 （.荆楚理工学院化工与药学院，湖北 荆门448000；.武汉大学药学院，湖北 武汉43007）

苦荞即苦荞麦，是自然界中甚少的药食两用作物。苦荞拥有独特、全面、丰富的营养成份，而且药用特性好，有人体所必须的多种营养成份［1－3］，主要活性物质为黄酮类化合物，具有抗菌消炎、抗氧化、降血脂等多种功效［4－5］。同时，芦丁是一种天然的抗氧化剂，亦可用于美容化妆品行业。苦荞茶为苦荞麦炒制而成。我国苦荞麦主要分布于云南、四川、宁夏、甘肃等地区［6］。本实验采用湖北钟祥彭墩的苦荞茶，测定其中芦丁的含量，为保健食品的开发和质量检测提供参考。

1 材料

1.1 仪器 高效液相色谱仪（Agilent1100）美国Agilent公司、双光束紫外可见分光光度计（TU－1901）、电子分析天平（德国赛多利斯CP－224S），Milli－Q 超纯水机（美国Millipore公司）。

1.2 试药 芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100080200306）；甲醇（色谱纯），水为超纯水，其他试剂均为分析纯；苦荞茶（湖北省钟祥市彭墩生态园，湖北青龙湖农业发 展 有 限 公 司，批 号：20121023、20121028、20121105、20121112、20121123、20121203）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：C18柱（150×4.6 mm，5μm）；流动相：0.2%冰醋酸－甲醇（55∶45），流速：1.0mL·min－1，检测波长：256 nm，柱温：30 ℃。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取干燥的芦丁对照品23.3 mg，置于100 mL量瓶中，用甲醇定容于至刻度，制成0.233 0 g·L－1的芦丁对照品溶液，精密量取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL芦丁对照品储备液，加甲醇稀释至10 mL 量瓶中，用淋洗液稀释至刻度备用。

2.3 供试品溶液的制备 取苦荞茶6.0g，置250 mL 圆底烧瓶中，用100 mL80%乙醇回流提取3次，每次35 min，合并提取液，减压回收溶剂，浓缩物用甲醇定容于250 mL量瓶中，取2 mL用甲醇定容于25 mL 量瓶中，即得供试品试液。精密量取供试品试液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL，加甲醇稀释至10 mL量瓶中，用淋洗液稀释至刻度备用。对照品及样品的色谱图如图1所示。

图1 高效液相色谱图a.芦丁对照品；b.钟祥苦荞茶样品Fig 1 HPLC chromatogramsa.rutin reference substance b.Buckwheat Tea of Zhongxiang

2.4 线性关系考察 精密量取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL芦丁对照品储备液，加甲醇稀释至10 mL 量瓶中，摇匀。分别取以上溶液进样测定，以峰面积（Y）为纵坐标，以进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y＝47 088.04 X－7 292.81，r＝0.999 8，结果表明芦丁在0.233～1.165μg范围内，线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密量取0.023 3 mg·mL－1芦丁对照品溶液，同样色谱条件下，连续进样5 次，测定其峰面积，RSD为0.95%（n＝5）。

2.6 稳定性试验 取同一苦荞茶供试品溶液在相同色谱条件下，于0，2，4，6，8，12 h进样测定，RSD 为0.99%（n＝6），表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.7 重复性试验 取同一批苦荞茶，按“2.3”项下方法制备6份供试品溶液，进行测定，RSD 为1.92%（n＝6）。

2.8 加样回收率试验 精密吸取芦丁浓度为0.233 0 mg·mL－1的对照品溶液1，2，3 mL各3份，分别精密加入样品粉末约0.024 7 g（芦丁含量为18.9 mg·g－1），按样品测定方法进行测定，结果芦丁的平均回收率为99.18%，RSD 为0.89%。

表1 回收率试验结果Tab 1 Results of recovery rate

2.9 样品测定 将6种不同批号的苦荞茶样品按2.3项下方法制备成供试品溶液，分别进样。样品1～6的芦丁含量依次为1.94%、2.01%、1.89%、1.82%、1.86%、1.77%。

3 讨论

3.1 样品处理方法的选择 实验分别考察了提取时间、提取溶剂等因素对苦荞茶中芦丁含量的影响，并进行了单因素实验，结果表明：在80%乙醇，回流时间为每次35 min，提取3次的条件下，芦丁的含量最高。此方法对样品处理简单，快捷。

3.2 流动相的选择 在试验中试过乙腈－水、甲醇－水溶液等为流动相，但分离效果不太理想，采用0.2%冰醋酸－甲醇（55∶45）分离效果有明显改善，峰形较好，故采用0.2%冰醋酸－甲醇（55∶45）为流动相。

本试验建立了HPLC快速测定苦荞茶中芦丁含量的方法，色谱条件：采用0.2%冰醋酸－甲醇（55∶45）为流动相，结果显示的目标色谱峰分离效果良好、精密度、重复性和回收率的测定均符合要求。本HPLC 法检测芦丁方法简便、快捷、可靠，可用于湖北钟祥苦荞麦的质量标准检测。

［1］ 张以忠，陈庆富.荞麦的研究现状与展望［J］.种子，2004，23（3）：39－42.

［2］ 张万明，谭盛春.苦荞的营养与食疗作用［J］.西昌农业高等专科学校学报，2004，18（2）：16－17.

［3］ 尹礼国，钟耕.荞麦营养特性、生理功能和药用价值研究进展［J］.粮食与油脂，2002，5：32－34.

［4］ 宾婕，刘洁，陈克嶙，等.不同来源苦荞中芦丁和槲皮素的含量测定［J］.现代食品科技，2011，27（1）：117－119.

［5］ 黄兴富，黎其万，刘宏程，等.高效液相色谱法同时测定苦荞中芦丁、槲皮素和山柰酚的含量［J］.中成药，2011，33（2）：345－347.

［6］ 曹树明，李菊，胡炜彦，等.HPLC 法测定苦荞茶中芦丁的含量［J］.中国民族民间医药杂志，2007，86：173－175.