CK19、CyclinD1、HBME-1、34βE12、TPO 、galectin-3在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义

林茂华 毛瑛玉 李 婷 苏 谦 郑建瑞

我们通过检测CK19、HBME-1、CyclinD1、34βE12、TPO、galectin-3在甲状腺乳头状癌及腺瘤中的表达，以探讨其对甲状腺乳头状癌的诊断及鉴别诊断的价值。

1 材料与方法

1.1 材料

2012年8月至2013年1月福建医科大学附属宁德市闽东医院收治的经病理检查确诊的86 例甲状腺乳头状癌和60 例甲状腺滤泡性腺瘤。86例PTC年龄15～64岁，平均年龄27岁，女性65例，男性21例。60例FTA的年龄29～60岁，平均年龄44岁，女性48例，男性12例。分别进行HE染色和免疫组织化学染色。

1.2 免疫组化染色

标本均经常规10%中性缓冲福尔马林液固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片。免疫组化采用EnVision两步法。抗体购自福州迈新生物技术有限公司，所用抗体为即用型，实验步骤按说明书进行，DAB显色。选用肿瘤区域进行CK19、HBME-1、CyclinD1、galectin-3、34βE12、TPO等抗体染色，选用同例非肿瘤区域甲状腺组织作为内对照。由两位高职称的病理医师进行镜检观察。阳性结果判断标准：CK19、34βE12均以细胞质内出现棕黄色细颗粒为阳性染色，HBME-1以细胞胞膜着色为阳性，CyclinD1以细胞核着色为阳性，galectin-3、TPO以细胞核或细胞质着色为阳性。高倍镜(×400)下随机选取10个视野，每个视野计数100个细胞，取平均值作为阳性细胞百分数。阳性细胞数≤10%为阴性，11%～25%为(+)，26%～50%为(++)，>50%为(+++)。

1.3 统计学分析

应用SPSSS12.0软件包处理，采用χ2检验。

2 结果

2.1 病理改变

甲状腺乳头状癌光镜下：肿瘤细胞呈细长、多分枝形态，被覆乳头的滤泡上皮细胞肥大，核异型，具有核沟、核内假包涵体，核重叠、极向紊乱，部分乳头状癌有毛玻璃状核，间质中偶可见砂粒体。滤泡性腺瘤60例中58例为常见的亚型，可见纤维性包膜，包膜外甲状腺受压萎缩，部分继发出血、小囊形成、纤维组织增生及钙化等，瘤细胞较一致，细胞无异型；另有2例为非典型腺瘤，瘤细胞呈立方、多边形或不规则形，滤泡中出现非典型性巨细胞，瘤细胞排列呈片状、巢状或束状，缺少完整的滤泡，包膜完整，经过多处取材，均未见包膜或血管侵犯。

2.2 免疫组化结果

从表1及表2中可看出，86例PTC中80例(93.02%)CK19表达++～+++，60例FTA中48例(80.00%)表达++～+++，两者比较,χ2=2.78(P>0.05)。86例PTC中80例(93.02%)CyclinD1表达++～+++；60例FTA中8例(13.33%)表达++～+++，其中1例为非典型腺瘤，χ2=46.87(P<0.01)。86例PTC中80例(93.02%)HBME-1表达++～+++。60例FTA中4例(6.66%)表达++～+++，包括1例非典型腺瘤，χ2=53.94(P<0.01)。86例PTC中78例(90.69%)34βE12表达++～+++；60例FTA中2例(3.33%)表达++～+++，χ2=54.45(P<0.01)。86例PTC中2例(2.33%)TPO 表达++～+++；60例FTA中54例(90.00%)表达++～+++，χ2=57.45(P<0.01)。86例PTC中20例(23.25%)galectin-3 表达++～+++;60例腺瘤中6例(10.00%)表达++～+++，χ2=2.12(P>0.05)。

表1 CK19、HBME-1、CyclinD1在甲状腺乳头状癌及腺瘤组织中的表达情况/例

表2 galectin-3、34βE12、TPO在甲状腺乳头状癌及腺瘤组织中的表达情况/例

3 讨论

CK19主要定位于细胞质，是中间丝蛋白家族。主要表达与单层上皮细胞，也散在表达于复层鳞状上皮的基底层细胞。国内外许多学者在多种癌中检测到CK19表达，包括乳腺癌、甲状腺乳头状癌、大肠癌、膀胱癌、肺鳞状细胞癌等。有文献[1]提出CK19在良性甲状腺病灶中呈灶性表达，而在甲状腺乳头状癌中高表达，提示CK19可能参与甲状腺乳头状癌的发生发展过程。本研究显示CK19在甲状腺乳头状癌中强阳性表达率93.02%，在腺瘤中强阳性表达率为80.00%，两者无明显差异，对甲状腺腺瘤与乳头状癌的鉴别诊断无帮助。

细胞周期调节蛋白 CyclinD1，作用于G1期，参与G0/G1期的转换调控，是细胞周期重要的正性调控因子。有报道显示，CyclinD1在多种肿瘤中均有表达，如非小细胞肺癌、胃癌、鳞状细胞癌、卵巢癌等，并且认为它与肿瘤的发生发展乃至预后都有密切关系。Khoo等[2]研究表明，CyclinD1在甲状腺乳头状癌中显著过度表达，并与肿瘤转移及预后有关。本研究显示CyclinD1在甲状腺乳头状癌中强阳性表达率为93.02%，明显高于甲状腺腺瘤13.30%，表明CyclinD1表达与乳头状癌的发生发展相关。

HBME-1是间皮瘤相关抗体，主要成分为酸性氨基多聚糖蛋白，这种抗体在大多数上皮型间皮瘤中呈强阳性细胞膜表达。在肺癌、胰腺癌、乳腺癌也可表达。有学者认为HBME-1是甲状腺乳头状癌较好的标记[3]，并可用于淋巴结中良性甲状腺组织与转移性乳头状癌的识别。Ito等研究报道HBME-1在PTC阳性表达率达100%[4]。本组研究显示在滤泡性腺瘤中HBME-1强阳性表达率为3.33%，余均为弱阳性或阴性，而在乳头状癌中强阳性表达率为95.60%，故HBME-1是甲状腺乳头状癌较好的标记，而且对良、恶性鉴别诊断亦有帮助。

34βE12与人角蛋白中间丝蛋白1、5、10和14反应，表达于鳞状上皮、导管上皮和其他复层上皮，是前列腺基底细胞的特异性标记物，还可鉴别乳腺导管及小叶上皮来源的肿瘤。目前应用于甲状腺乳头状癌的研究较少，赵丽华等[5]的研究示甲状腺乳头状癌34βE12的阳性表达86.05%，显著高于结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤和桥本氏甲状腺炎。本研究显示34βE12在甲状腺乳头状癌达90.69%，与CyclinD1及HBME-1结果相似，三者在甲状腺乳头状癌中表达特异性较高，联合应用效果更好。

TPO是甲状腺激素合成通道中的重要物质，在T3、T4合成中起重要催化作用。在正常甲状腺及甲状腺良性病变中高表达，而在甲状腺恶性肿瘤中低表达。邓敏等[6]研究示TPO在PTC的鉴别诊断中敏感性89.7%，特异性99.8%，准确度达94%，在PTC与良性病变比较差异具有显著性。陈云[7]在对甲状腺结节性病变中甲状腺过氧化物酶(TPO)mRNA表达的研究结果示良性病变组明显高于恶性病变组(P<0.01)。本组结果显示滤泡性腺瘤90%中等到强阳性，只有1例阴性；PTC强阳性仅2.33%。TPO在PTC与滤泡性腺瘤之间表达差异有显著性。

Galectin-3是半乳糖凝集素家族中的一员，多数研究显示galectin-3可作为甲状腺恶性肿瘤的一个标记。galectin-3在甲状腺乳头状癌中有强表达，而在部分良性病变中也可灶性表达。仅部分研究提示不同的意见，Bernet等[8]研究发现GL-3mRNA在PTC与滤泡状甲状腺腺瘤及正常甲状腺组织中表达的差异统计学意义不大。本研究galectin-3在甲状腺癌强阳性仅23.25%，在腺瘤的强阳性表达10.00%，我们认为galectin-3表达与PTC关系仍不十分清楚，对良恶性的鉴别无统计学差异。

本研究中2例非典型腺瘤，1例CyclinD1+++、HBME-1+++，是否提示有癌变的趋势，有待探讨。CK19在甲状腺乳头状癌的表达率高但与腺瘤的表达无显著差异。galectin-3表达与甲状腺恶性肿瘤的的关系仍不明确。CyclinD1、HBME-1和34βE12表达具有较高的特异性，三者联合应用对甲状腺乳头状癌的诊断及鉴别诊断具有较高的实用价值。TPO表达与CyclinD1、HBME-1和34βE12呈负相关，4种指标联合应用再结合临床及形态学有助于提高甲状腺肿瘤的确诊率。

[1] 巩 雷，陈 萍，刘宪军，等.D2-40，CK19，galectin-3，VEGF和EGFR在甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义〔J〕.中国普通外科杂志,2011,20(11):1203.

[2] Khoo ML,Ezzat S,Freeman JL,et al.CyclinD1 protein expression predicts metastatic behavior in thyroid papillary microcarcinomas but is not associated with gene amplifications〔J〕.J Clin Endocrinol Metab，2002,87(4):1810.

[3] Rossi ED,Raffaelli M,Mule A,et al.Simultaneous immunohistochemical expression of HBME-1 and galectin-3 differentiates papillary carcinomas from hyperfunctioning lesions of the thyoid〔J〕.Histopathology.2006,48(7):795.

[4] Ito Y,Yoshida H,Tomoda C,et al.HBME-1 expression in follicular tumor of the thyroid:an investigation of whether it can used as a marker to diagnose follicular carcinoma〔J〕.Anticancer Res,2005,25(1A):179.

[5] 赵丽华，林 竞，石 柏，等.P53，Ki-67，galectin-3，HBME-1，34βE12，CK19在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义〔J〕.基础医学与临床，2012，32(10):1202.

[6] 邓 敏，叶顾萍，马建中，等.甲状腺乳头状癌中CK19、Galectin-3、HBME-1和TPO的表达及意义〔J〕.临床与实验病理学杂志，2011,27(8):843.

[7] 陈 云.甲状腺结节中TPOmRNA表达与Ret、半乳糖苷凝集素3及黏蛋白1表达的相关性研究〔J〕.实用癌症杂志，2008,23(5):469.

[8] Bernet VJ,Anderson J,Vaishnav Y,et al.Determination of galectin-3 messenger ribonucleic Acid overexpression in papillary thyroid cancer by quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction〔J〕.J Clin Endocrinol Metab,2002,87(10):4792.