21种人乳头瘤病毒基因亚型分布特征的分析

黄秀珍

大量流行病学及分子生物学研究资料已经表明，反复持续高危型HPV感染是宫颈癌及其癌前病变发生的必要条件[1]。HPV DNA检测作为细胞学的辅助方法，已经广泛用于宫颈癌的筛查[2]。HPV DNA的检测方法众多，近年来，导流杂交技术逐步应用于临床，其性能亦获得广泛肯定。本研究应用导流杂交技术检测了1 623例女性患者HPV DNA，并对其HPV基因型分布特征进行分析，报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取2010年7月-2013年4月在我院进行HPV DNA检查的1 623例疑诊宫颈癌患者作为研究对象。患者年龄为20～80岁，平均(45.3±17.5)岁。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 达安公司生产的DA-7600荧光定量PCR仪，凯普生物科技有限公司生产的HybriMaxTM医用核酸分子快速杂交仪、HPV DNA抽提试剂盒、HPV DNA扩增分型检测试剂盒。

1.2.2 标本采集 由医生用棉拭子先除去宫颈口处多余的分泌物，用凯普专用宫颈刷伸入宫颈内1～2 cm处转动3～5圈，获取宫颈口及颈管脱落上皮细胞，将标本毛刷置入到含有细胞保存液的带盖样品管中，4 ℃保存，1周内检测。

1.2.3 HPV分型检测 按试剂盒要求依次进行HPV DNA分离提取、HPV DNA PCR扩增、核酸分子快速导流杂交、结果判读。结果判读时按芯片上HPV亚型分布的相应着色位点判断，21种HPV基因亚型分为高危型、低危型，高危型包括HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68等15种，低危型包括HPV6、HPV11、HPV42、HPV43、HPV44，HPV81(CP8304)等6种。

2 结果

2.1 HPV阳性率分析

1 623例女性患者中有798例检测出HPV感染，HPV阳性率为49.2%。不同年龄段HPV阳性率结果见表1。

表1 不同年龄段HPV阳性率结果分析

2.2 HPV感染患者基因亚型阳性率分析

除HPV43型以外，其余20种亚型均被检测出。不同HPV基因亚型阳性率见表2。

表2 798例HPV感染患者基因亚型阳性率分析

2.3 HPV感染患者基因型分析

在798例女性HPV感染患者中，单一基因型HPV感染患者620例，多重基因型HPV感染患者178例，见表3。

表3 798例HPV感染患者基因型分析

3 讨论

HPV属于乳头多瘤空泡病毒科，是一类可以特异性感染人皮肤以及黏膜的双链闭合环状DNA病毒。通过DNA序列分析发现，HPV至少有200多个基因型，迄今为止已确定基因组全序列的HPV基因型有85种，其中42种与人类疾病有关[3]。不同型别HPV所致的细胞病理变化有所区别，根据这一点可以将HPV基因型分为高危型、低危型两大类，前者是诱发宫颈癌的重要病原学因素[4]。基于上述原因，对HPV进行准确的基因分型，对HPV感染的治疗、宫颈癌的预防、流行病学调查、基因疫苗研制等均有重要的临床意义。

导流杂交技术是目前临床上用于HPV基因分型的常用技术之一，与传统杂交法不同，该技术将探针固定于膜纤维中，目标分子主动导流穿过固定有探针的薄膜并与互补探针相结合形成复合物被固定下来，未被结合固定的分子穿过薄膜后被除去。由于导流杂交技术加速了分子之间的相互作用，从而使杂交时间由传统杂交法的几个小时减至几分钟，大大缩短了检测时间。

在本研究中，我们利用导流杂交技术检测了1623例女性患者的HPV基因型，结果可见798例患者感染了HPV，HPV DNA阳性率为49.2%，由于上述患者均为疑诊为宫颈癌的患者，因此本研究的HPV DNA阳性率显著高于流行病学调查。然后，我们按照年龄对HPV DNA阳性患者进行分组，结果可见30～39岁患者HPV DNA阳性率(54.3%)最高，而20～29岁患者HPV DNA阳性率(27.3%)最低，由此可见年龄与HPV DNA阳性率有一定的关系。此外，通过对798例

HPV DNA阳性患者的基因亚型进行分析，我们可见单一基因型HPV感染患者620例(77.7%)，多重基因型HPV感染患者178例(22.3%)，后者的比例显著低于其他文献报道[5-6]，这可能是由于地域差别所致。最后，我们对每种基因亚型HPV DNA阳性率进行分析，结果可见除HPV43型以外，其余20种亚型均被检测出，且HPV16型阳性率在50%以上，其余依次为HPV52型、HPV58型、HPV18型、HPV33型等，上述基因亚型均为高危型，其原因与本研究的HPV DNA阳性率显著高于流行病学调查一致，与研究对象的特点有关[7-8]。

由于本院妇科的女性患者来自全省各地，因此本研究结果可以在一定程度上反映本地区的情况。综上所述，本地区HPV感染患者以单一基因型感染最为常见，主要高危型包括HPV16型、HPV52型、HPV58型等。

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