桑皮苷的拉曼光谱快速分析

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1. 浙江康恩贝制药股份有限公司(兰溪市,321009)2. 上海大学生物医学工程研究所(上海,200072)

0 引言

现代植物化学研究表明，桑枝中含有芪类、黄酮类、生物碱类，多糖类、香豆素类等多种重要活性化合物，其中的芪类化合物作为植物的抗菌素具有很好的生物活性。而桑皮苷是芪类化合物的一种，具有抗炎镇痛、预防酒精肝、止咳等作用。近代药理学研究证明，桑白皮的水或甲醇提取物具有祛痰、抗炎、降血糖、降压、抗癌、抗菌等作用[1-2]。桑皮苷中有一主要成分为桑皮苷A，桑皮苷 A ( mulberroside A) 为二羟基芪类化合物，又称为氧化白藜芦醇苷。桑皮苷的分析一般采用液相色谱仪，分析相对繁琐[3-4]。

拉曼光谱技术从物质的分子振动光谱来识别和区分不同的物质结构，成为研究物质分子结构的有效手段。拉曼光谱技术对样品制备没有特殊要求，无损检测，并可以直接测量水溶液样品的拉曼光谱。拉曼光谱具有定性分析并对相似物质进行区分的功能，并且在药物的分析中已经开始使用[5-6]。由于拉曼光谱的峰强度与相应分子的浓度成正比，拉曼光谱也能用于定量分析。本文尝试采用银溶胶作为拉曼增强基底来对中药提取物桑皮苷样品中的有效成分进行拉曼表面增强光谱分析。

2 实验方法

2.1 Ag纳米颗粒的制备

Ag纳米颗粒的制备采用液相还原法，硝酸银为原料，柠檬酸钠为还原剂。取50 mL的0.001 mol/L浓度的AgNO3溶液，使用数显恒温磁力搅拌器加热至沸腾，并搅拌，逐滴加入1%的柠檬酸钠溶液，溶液始终保持沸腾且磁力搅拌60 min，得到银溶胶，封口放入冰箱冷藏备用。

2.2 表面增强拉曼检测

取桑皮苷加入到银溶胶中，放置于共焦显微拉曼光谱仪(Renishaw)上进行拉曼检测。测试采用785 nm激光光源，光谱收集时间为10 s，功率约2 mw左右。

3 实验结果

桑皮苷标样由浙江康恩贝制药股份有限公司提供，经液相色谱测定含量为98%，测定的桑皮苷标样的拉曼光谱见图1。

图1 桑皮苷标样的拉曼光谱Fig.1 Raman spectra of mulberroside standard sample

图2 桑皮苷制备样的拉曼光谱Fig.2 Mulberroside preparation of Raman spectra of samples

桑皮苷的制备样为从桑树皮中经乙醇提取纯化而得。制备样添加Ag纳米颗粒测定拉曼光谱见图2。

从图1中可以看出，标样中的峰位置有：1 633 cm-1、1 610 cm-1、1 271 cm-1、997 cm-1-1、430 cm-1等而桑皮苷制备样的拉曼光谱(图2)也有类似的峰出现之外，还有其它不同的峰出现，如557 cm-1,806 cm-1,837 cm-1等。其中950 cm-14为C-C骨架的伸缩振动所引起，1 606 cm-1为苯环内部碳原子非对称伸缩振动所引起[4]。1 601 cm-1和1 649 cm-1附近的峰作为二苯乙烯的特征峰[7-9]，在制备样和标样的拉曼光谱中都出现了类似的峰即1 601 cm-1和1 634 cm-1，说明桑皮苷中有类似有二苯乙烯结构的物质存在，和现有的文献报道也相符合，也说明可以用拉曼光谱来分桑皮苷制备样中是否有桑皮苷主要成分。我们下一步的工作将在确定特征成分的情况下，再利用拉曼光谱苯乙烯的特征峰强度进行定量分析，这样将会大大简化桑皮苷制备生产过程中含量的检测分析。

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