气相色谱法测定恩替卡韦中三氯甲烷残留量

★ 廖宝源 李长达 孙蔚华 方慧琼（.江西省赣州市食品药品检验所 赣州34000；.江西赣州市第三人民医院 赣州34000）

药物中的残留溶剂是指在原料药或赋型剂的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂[1]。由于残留溶剂不仅没有疗效，还可能增加药物的毒副作用，而且影响药物的稳定性，故所有的有机溶剂应尽可能除去。为了保护患者免受药物中残留有机溶剂的伤害，需对药品在生产过程中引入的有机溶剂残留量进行测定[2]。恩替卡韦是一种用于治疗乙肝病毒感染的新一代鸟嘌呤核苷类似物口服药[3]，主要用于治疗成人伴有病毒复制活跃和血清转氨酶持续增高，或肝组织学为活动性病变的慢性乙型肝炎，是目前降病毒最快最强、变异几率最低的核苷类似物[4]。由于合成本品过程中使用三氯甲烷等有机溶剂，故有可能会残留在产品中。资料表明，氯仿具有致癌、致畸、致突变作用，长期接触将对人体产生严重影响[5，6]。本文参考中国药典2005 年版二部有关品种三氯甲烷残留量检测方法，建立了气相色谱法，结果表明本法分离度高、灵敏、准确且简便。

1 仪器与试剂

Agilent 7890A气相色谱仪（配有ECD检测器），恩替卡韦原料（厂方提供，批号20090515、20090520、20090526）。三氯甲烷、二甲基亚砜均为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DB-624 毛细管柱（30m×0.53mm×3.0μm）；柱温：初始60℃，保持6 分钟，再以20℃∕分钟的升温速率升温至200℃，保持4 分钟；检测器：ECD；检测器温度：300℃；进样口温度：200℃；载气：氮气（流量4.5mL∕min）；进样方式：分流进样；分流比：15：1；进样体积：1.0μL。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取三氯甲烷12.4mg，迅速加入已装有适量二甲基亚砜溶剂的100mL 量瓶中，定容至刻度，摇匀，精密量取1mL 至50mL 量瓶中，定容至刻度，摇匀，即得三氯甲烷对照溶液。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取本品0.2g，置5mL量瓶中，加二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.4 空白干扰试验

取三氯甲烷对照品溶液、供试品溶液及有机溶剂二甲基亚砜照上述色谱条件分别进样，结果空白溶剂对恩替卡韦的三氯甲烷残留量测定无干扰。见图1。

图1 气相色谱图

2.5 最低检测量

取对照溶液稀释10-9倍得三氯甲烷的检出限溶液，按上述色谱条件测定，结果最低检出量为2.457 54×10-9μg∕mL，相对供试品最低检出量为6×10-14g∕g。

2.6 精密度试验

取上述三氯甲烷对照品溶液，照上述色谱条件进行气相分析，连续进样5次，RSD为0.99%。

2.7 线性关系

精密量取上述三氯甲烷对照溶液1mL、2mL、5mL、8mL、10mL，分别置10mL 量瓶中，分别加入二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，即得浓度分别为10%、20%、50%、80%、100%的溶液，作为线性回归测定溶液。分别照上述色谱条件进样测定，每个浓度测定3 份，取平均值，以浓度为X轴，以峰面积为Y值，计算线性回归方程：Y= 4030.204 1X+380.918 4，r＝1.000 0。结果表明三氯甲烷在0.2457 54-2.457 54 μg∕mL浓度范围内呈良好线性关系。

2.8 回收率试验

精密称取样品（批号20090520）约0.2g，置5mL量瓶中，用上述浓度为50%、80%、100%的溶液溶解，并稀释至刻度，即得回收率测定溶液。照上述色谱条件测定，每个浓度测定3份，计算平均回收率为96.99%，RSD为0.98%。

2.9 样品测定

取本品3 批（批号20090515、20090520、200905 26）样品，分别制成供试品溶液，照上述色谱条件测定。结果见表1。

表1

3 讨论与小结

3.1 色谱柱的选择

试验中先后选择了DB-1、DB-1701、HP-5、DB-624等不同极性的色谱柱，以在DB-624上的峰形和分离度最佳。

3.2 溶剂介质的选择

由于三氯甲烷在水中溶解度极小[7，8]，所以不宜用水作溶解介质，考虑到恩替卡韦的的溶解度，且二甲基亚砜（DMSO）沸点不高，用其作溶解介质有利于待测溶剂及溶解介质的有效汽化和缩短分析时间。

3.3 检测器的选择

三氯甲烷在FID 检测器上灵敏度低，无法准确定量，因为其结构上含有卤原子，改用ECD 检测器后灵敏度显著提高，所以选择ECD检测器检测三氯甲烷[1、8]。

[1]国家药典委员会.中国药典.（二部）[S].北京：化学工业出版社，2005：附录54-57.

[2]王卫.药品中有机溶剂残留量及其测定[J].天津药学，2001，13（3）：26-27.

[3]姚光弼，张定风，王宝恩，等.替卡韦抗乙型肝炎病毒剂量和疗效的研究[J].中华肝脏病杂志，2005，13（7）：484-485.

[4]李金金，耿长新，吕志国.恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎30例[J].世界华人消化杂志，2009，17（4）：425-426.

[5]丁锦舂，陈储良.水中挥发性卤代烃的危害性及其分析方法的研究现状[J].中国卫生检验杂志，1995，5（6）：364-366.

[6] Yang CY，Chiu HF. Chlorination of drinking water and cancer mortality in Taiwan[J].Environ Res，1998.78：1-6.

[7]容凯文，霍燕兰，李月微.气相色谱法测定酒石酸长春瑞滨中三氯甲烷的残留量[J].今日药学，2010，20（6）：30-32.

[8]宋更申，姜建国.GC-ECD法测定马来酸桂哌齐特中三氯甲烷的残留量[J].中国药品标准，2010，11（3）：211-212.