正交试验法优选固卫合剂的工艺研究

★ 陈璐 马儒清 陈晓明（1.广西陆川县人民医院 陆川537700；.广西中医药大学第一附属医院南宁53003）

固卫合剂为广西中医药大学第一附属医院的制剂品种，由黄芪、桂枝、防风、白术、丹皮等14味药组成，全方具有宣肺散寒、祛风固表的功效。方中黄芪为君药，黄芪甲苷为黄芪的主要活性成分，其测定方法较多[1-3]。本实验以黄芪甲苷含量和出膏量为考核指标，采用正交试验优选固卫合剂的工艺，为固卫合剂制备工艺提供科研依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津DGU-20A5 高效液相色谱仪；SPD-20A 紫外检测仪；GH-252电子分析天平（广州市艾安得仪器有限公司）；CD-UPT-II-10L超纯水制造系统（成都越纯科技有限公司）；KQ3200DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

黄芪甲苷对照品（批号110781-200613）购自中国药品生物制品检定所。固卫合剂（100 mL/瓶，批号20120508、20120527、20120620）由广西中医药大学第一附属医院制剂室制备。乙腈（J.T.Baker）、甲醇（J.T.Baker）均为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 制备固卫合剂的正交试验设计

采用L9（34）正交表进行正交设计，对提取次数、加水量、提取时间进行考察，以黄芪甲苷含量和出膏量为考察指标进行提取，试验方案见表1。

表1 固卫合剂提取条件因素和水平

2.2 样品溶液的制备

按处方量称取固卫合剂各药材，牡丹皮、白芷、细辛、荆芥提取芳香水约200 mL，药渣与余药混合，按L9（34）试验列号各条件分别提取，滤过，定容至1 000 mL，放置备用。

2.3 出膏量测定

精密量取各样品溶液50 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴上蒸干，在105℃干燥3小时，移至干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算出膏量。结果见表2。

2.4 黄芪甲苷含量测定

色谱条件：色谱柱：WondaSil C18 Superb（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（33：67）；检测波长203 nm；流速1.0 mL/分，进样量：20 μL；柱温：30℃。理论塔板数不低于3 000。

2.5 溶液制备

（1）对照品溶液制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg黄芪甲苷的对照品溶液；（2）供试品溶液的制备：精密吸取固卫合剂3 mL，用水饱和的正丁醇萃取3 次，每次10 mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2 次，每次8 mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液。即得。

2.6 标准曲线绘制

精密吸取黄芪甲苷对照品溶液各0.1、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL，置10 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。吸取上述溶液，各进样20 μL，连续进样3次。以浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制工作曲线。回归方程为Y=3342X+359.38，r=0.9998，线性范围在2.0-40.0 μg/mL呈良好的线性关系。

2.7 样品测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μL，注入液相色谱仪，测定并计算样品中黄芪甲苷的含量。结果见表2，方差分析见表3。

表2 固卫合剂提取工艺正交试验安排

表3 固卫合剂提取工艺方差分析

2.8 提取条件

根据各因素的极差值（R）显示，影响固卫合剂提取效果的因素顺序为B＞A＞C，即溶剂用量＞提取次数＞提取时间。其中因素B对实验结果有显著性影响（P＜0.05），因素A 与C 对实验结果影响较小；结合节约能源、时间等因素，最终确定固卫合剂提取最优工艺条件为A2B2C1，即加10 倍量水提取2次，每次1小时。

2.9 验证试验

按固卫合剂提取最佳工艺条件提取，制备3 批样品进行验证试验，测定出膏量、黄芪甲苷的含量，结果出膏量为4.3527±0.0274（g/瓶）；黄芪甲苷含量为4.69±0.0917（mg/瓶）。使用最佳验证工艺参数，出膏量和黄芪甲苷含量接近正交试验结果的最高值，说明正交试验结果可靠。

3 讨论

固卫合剂为我院常用院内制剂，多年临床应用于过敏性鼻炎，表阳虚等证效果良好。为保证固卫合剂的质量及应用安全，应对其制剂工艺进行优化。本文通过正交实验优选出固卫合剂的最佳提取条件为加水10 倍量提取2 次，每次1 小时。通过实验验证，该方法可行，可为其制剂工艺及质量标准的建立提供科研依据。

[1]雷曦，秦剑.高效液相色谱法测定复脉定颗粒剂中黄芪甲苷的含量[J].时珍国医国药，2002，13（7）：402-403.

[2]郭洪祝，刘晓峰，于侹，等.高效液相色谱法测定胰复康胶囊中黄芪甲苷含量[J].中国中药杂志，2000，25（10）：609-611.

[3]钱广生，刘三康，李章万.HPLC测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量[J].华西药学杂志，2002，17（1）：41-42.