炒参薯饮片含量测定方法研究

★ 田桂红 袁桂平（.江西南华医药有限公司 南昌330006；.江西省食品药品检验所 南昌33009）

参薯来源于薯蓣科植物参薯Dioscorea alataL.的干燥块茎。其块茎中含有薯蓣皂苷元、多糖、多酚等多种成分。具有健脾、补肺、益精气、消肿、止痛功效，主要用于脾虛久泻、肺虚喘咳、水肿、小便不利、肾虚不固的遗精、尿频[1-2]。炒参薯炮制方法收载于《江西省中药材标准》，但无饮片的质量控制标准。为了有效控制炒参薯饮片的质量，课题组对炒参薯饮片的含量测定方法进行了研究，采用紫外分光光度法测定参薯多糖的含量，从而构建炒参薯饮片质量标准规范体系，以便科学合理地控制炒参薯饮片质量，为中医临床和开发应用提供参考。

1 仪器与试药

TU-1901 双光束紫外-可见分光光度计（Win5操作系统）；百万分之一电子天平；RE-52A 型旋转蒸发仪。D-（+）无水葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110833-200503，供含量测定用）；硫酸为优级纯，水为三重蒸馏水，其他试剂为分析纯。样品批号：0707025、0707007、0710009、0710003、0707001、0802002。

2 含量测定[3-5]

2.1 对照品溶液的制备

精密称取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品40 mg，置50 mL 量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1 mL中含无水葡萄糖800 μg）。

2.2 标准曲线的制备

精密量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、2.5、4.0、5.0 mL，分别置50 mL 量瓶中，各加水稀释至刻度，摇匀。分别精密量取2 mL，置具塞试管中，各加入新配制的5%苯酚溶液1.0 mL，混匀，迅速加入硫酸7.0 mL，摇匀，放置15分钟，取出后置冷水浴中冷却30 分钟，取出，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法测定，在490 nm 的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2.3 测定法

分别取炒参薯饮片细粉约1.0 g，精密称定，置水浴中加热回流两次，每次加80%乙醇100 mL，第1次3小时，第2次2小时，滤过，残渣置水浴中加热回流3次，每次加水100 mL，第1次3小时，第2、3次各2 小时，滤过，合并3 次滤液，减压浓缩至30 mL，加入4 倍量的无水乙醇，摇匀，静置过夜，溶液离心5分钟（3 500 转/分），弃去上清液，残渣加95%乙醇10 mL洗涤，离心5分钟（3 500转/分），弃去上清液，残渣加丙酮10 mL 洗涤，离心5 分钟（3 500 转/分），弃去上清液，残渣加水溶解并转移至200 mL 量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL置100 mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，测定，6批样品测定结果见表1。

表1 参薯多糖含量测定结果

3 方法学考察

3.1 测定波长的选择

取按含量测定方法项下制备的对照品溶液（800 μg/mL）和供试品溶液按标准曲线的制备方法于显色后在550-450 nm 的波长范围内进行光谱扫描，结果对照品溶液与供试品溶液均在490±2 nm的波长处有最大吸收。故选择490 nm 的波长作为检测波长。

3.2 耐用性试验

精密称取样品约1.0 g，按含量测定方法项下制备供试品溶液，分别采用3 种不同厂家的分光光度计进行测定，结果参薯多糖在不同仪器上测得含量无显著差异。

3.3 线性关系的考察

精密量取含量测定方法项下的对照品溶液（800 μg/mL）制备40 μg/mL 的对照品溶液0.5、1.0、2.0、2.5、4.0、5.0 mL，分别置50 mL量瓶中，各加水稀释至刻度，摇匀。分别精密量取2 mL，置具塞试管中，各加入新配制的5%苯酚溶液1.0 mL，混匀，迅速加入硫酸7.0 mL，摇匀，放置15分钟，取出后置冷水浴中冷却30 分钟，取出，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法测定，在490 nm 的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得线性方程为Y=0.0123X-0.0282，r=0.999 6。结果表明D-（+）无水葡萄糖浓度在8-80 μg/mL呈良好的线性关系。

3.4 精密度试验

取含量测定方法项下的对照品溶液制备40 μg/mL的对照品溶液，显色后依法测定吸光度，其平均值为0.458（n=5），结果RSD为1.2%。

3.5 重现性试验

取同一批号样品，按含量测定方法项下方法平行制备供试品溶液5 份，测得含量的平均值为20.92%，RSD为1.3%，表明本法重现性良好。

3.6 稳定性试验

取按含量测定方法项下方法制备的对照品溶液（40 μg/mL）与供试品溶液，按标准曲线的绘制方法，分别在不同时间测定吸光度，每隔30 分钟测定一次吸光度，结果在24 小时内样品溶液稳定（RSD为0.6%）。

3.7 回收率试验

采用加样回收率测定法，精密称取已测定含量的同一批号样品6份，分别加入对照品溶液（40 μg/mL）1 mL，依法测定，结果回收率为99.4%、99.1%、97.9%、101.6%、100.05%、102.0%，平均回收率99.6%，RSD=1.4%。

4 讨论

4.1 本文建立炒参薯饮片含量测定有效控制方法，为科学合理管理参薯炮制品质量，提高参薯炮制品的生产加工、资源利用和临床合理应用提供科学依据。

4.2 采用苯酚-硫酸法测定炒参薯中多糖的含量[6]，并参照有关文献[7]，表明试验苯酚溶液的浓度，硫酸的用量，反应温度及时间对实验结果的影响较显著。同时，课题组对苯酚溶液的浓度、硫酸的用量、反应温度及时间进行单因素考察，结果显示苯酚溶液的浓度、硫酸的用量、反应温度及时间分别为5%、7.0 mL、室温及15分钟较适宜。经方法学考察，线性关系良好，精密度、稳定性、重现性的RSD均在2%以内，回收率在97%-102%之间，且RSD=1.4。说明该法操作简单、灵敏度高、准确、可靠，可以很好地控制炒参薯饮片的质量

[1]江西省卫生厅编. 江西省中药材标准（1996年版）[S]. 南昌：江西科学技术出版社，1996：142.

[2]中国医学科学院药物研究所编. 中药志（第2册）[M]. 北京：人民卫生出版社，1981：248.

[3]董群，等. 改良的苯酚-硫酸法测定多糖和寡糖含量的研究[J].中国药学杂志，1996，31（9）：505.

[4]贡济宇. 酚硫酸法测定灵芝多糖含量的实验研究[J].长春中医学报，2002，1（18）：45.

[5]徐斌等. 改良苯酚-硫酸法测定苦瓜多糖含量[J].食品科技，2005（7）：79.

[6]姜芳婷，等.山药及其同属植物参薯中多糖含量的测定[J]. ，2005，15（3）：47.

[7]罗毅等.苯酚-硫酸法测定多糖含量显色方式的优选[J].制剂与工艺，2005，12（1）：45.