E-cadherin在肺腺癌中的差异性表达

姜丽红 孙 雪 王文革 范海滨 宋军利

1.辽河油田总医院病理科，辽宁盘锦 124010；2.辽河油田总医院妇产科，辽宁盘锦 124010；3.辽河油田总医院儿科，辽宁盘锦 124010；4.辽河油田总医院康复科，盘锦辽宁 124010

上皮钙粘素(E-cadherin)是一类介导上皮细胞相互黏附的钙依赖性跨膜糖蛋白。 国内外大量研究证实，恶性肿瘤局部浸润和远处转移与细胞间粘附力的降低有关， 其中E-cadherin 具有重要作用[1-3]。 但是目前对E-cadherin 的研究大多数仍局限于蛋白或转录的单一层面， 关于该基因转录产物和蛋白表达之间的关系尚罕有报导。 2010年2月—2012年9月，该科研小组对20 例肺腺癌进行了相关研究， 力图阐明E-cadherin mRNA 及其编码蛋白在肺腺癌中是否存在差异性的问题，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

20 例肺腺癌病理资料来自辽河油田总医院病理科。 其中女性8 例，男性12 例；年龄38～76 岁，平均65 岁。 对同一患者的新鲜肺腺癌组织和正常肺组织标本分别提取mRNA 和蛋白质，然后分别应用RT-PCR 法和WESTERN-BLOT 法检测E-cadherin mRNA 及其编码蛋白表达情况。

1.2 RT-PCR 反转录反应条件为

55 ℃30 min，99 ℃5 min，5 ℃5 min，具体操作按照TaKaRa RNA LA PCRTM Kit 试剂盒提供的说明书进行；PCR 反应条件：E-cadherin 引物序列：F 5'-GACGCGGACGATGATGTGAAC-3'，R 5'-TTGTACGTGGTGGGATTGAAG A-3'；96 ℃预变性5min，96 ℃1 min，56.3 ℃1 min，72 ℃1 min，共循环35 次，然后72 ℃延伸7 min[2]。 PCR 扩增产物2%琼脂糖凝胶电泳。

1.3 WESTERN-BLO T

按《分子克隆》实验操作指南进行，一抗为鼠抗人E-cadherin 单克隆抗体、兔抗人β-actin 多克隆抗体；二抗为辣根过氧化物酶标记的羊抗兔／鼠IgG，应用ECL 法标记结合信号，通过荧光自显影感光在Kodak XAY 胶片上。

2 结果

20 例新鲜肺腺癌组织与其自身正常对照肺组织分别提取RNA 和蛋白质， 然后应用RT-PCR 和WESTERN-BLOT 方法对E-cadherin 进行了mRNA 及其编码蛋白表达情况的检测， 结果见图1。

结果发现：40%（8／20）肺腺癌组织中E-cadherin mRNA 呈阳性，而蛋白水平为阴性；10%（2／20）肺腺癌组织中E-cadherin 蛋白水平比mRNA 水平下调更为明显。

图1 E-cadherin mRNA 及其编码蛋白在肺组织中的表达情况N-正常肺组织T-肺腺癌

3 讨论

肺癌的发生发展是一个复杂的多因素参与的过程。 在这个过程中细胞粘附分子E-cadherin 起着重要作用。 研究表明，Ecadherin 含量多少与细胞间粘附功能异常、上皮性肿瘤的浸润和转移密切相关。

人的E-cadherin 基因CDH1[4]定位于16q22.1，编码分子量为120 kD 的单链跨膜糖蛋白，主要定位于上皮细胞膜。 E-cadherin分子包括细胞外区、跨膜区和细胞内区3 个区域。 其细胞外区通过结合钙离子维持串联结构域的稳定和促进细胞黏附。此外，Ecadherin 的细胞内区与caterin 形成E-cadherin-caterin 复合物，连接于肌动蛋白细胞骨架，从而形成和维持细胞间的稳固连接。因此，E-cadherin 是维持上皮细胞间相互粘附的重要蛋白。

E-cadherin 的功能异常可以导致多种恶性改变，包括细胞形态改变、细胞间黏附力下降及细胞移动性增强。 因而，E-cadherin对肿瘤侵袭和转移起着重要的抑制作用， 而且这已在许多研究中得到了证实[5]。

目前，关于E-cadherin 转录与翻译之间关系的研究甚少。 为此，本实验选取肺腺癌作为研究对象，从检测不同类型肺组织的E-cadherin mRNA 和蛋白水平入手。结果发现，在某些病例中Ecadherin 表达在mRNA 和蛋白水平存在着明显差异性，即mRNA水平有表达， 而蛋白水平阴性或者mRNA 水平与蛋白水平明显不一致。分析原因很可能是转录后调节机制发挥着重要作用。Ecadherin mRNA 水平与蛋白水平不一致是否与RNA 选择性剪接或microRNA 有关，我们将在今后的研究中做深入探讨。

[1] Shen WD, Ji Y, Liu PF, et al.Correlation of E-cadherin and CD44v6 expression with clinical pathology in esophageal carcinoma.Huang B [J].Wu S.Mol Med Report，2012，5(3):817-821.

[2] Cheng XX, Wang ZC, Chen XY,et al.Frequent loss of membranous Ecadherin in gastric cancers: A cross-talk with Wnt in determining the fate of beta-catenin[J].Clin Exp Metastasis，2005，22(1):85-93.

[3] Brzozowska A, Sodolski T, Duma D,et al.Evaluation of prognostic parameters of E-cadherin status in breast cancer treatment.[J].Ann Agric Environ Med，2012，19(3):541-546.

[4] Berx G, Staes K, van Hengel J.Cloning and characterization of the human invasion suppressor gene E-cadherin (CDH1)[J].Genomics，1995，26(2):281-289.

[5] 杨剑锋，廖粤军.E-cadherin／catenins 与肿瘤发生、侵袭及转移[J].南华大学学报（医学版），2002（4）：121.