连朴饮传统煎剂与中药配方颗粒中盐酸小檗碱的含量比较Δ

罗秀琼，冯 华（遵义市食品药品检验所，贵州遵义 563002）

连朴饮出自《霍乱论》，处方由制厚朴6 g、川黄连3 g、石菖蒲3 g、制半夏3 g、香豉9 g、焦栀子9 g、芦根60 g组成，具有清热化湿、理气和中之功效，临床上主要用于治疗湿热霍乱、上吐下泻、胸脘痞闷、心烦躁扰、小便短赤、舌苔黄腻、脉滑等。处方中川黄连是毛茛科植物黄连的一种，为黄连的道地药材。在此处方中川黄连量虽少但却作为君药发挥主要的药理作用，而在川黄连中发挥主要功效且含量最高的成分为盐酸小檗碱，约含5%～8%。用分煎法（中药配方颗粒）与合煎法（传统煎剂）制备的连朴饮中药复方煎剂，其有效成分的含量有何变化，其药理作用又有何变化，一直是中医药理论和临床实践中值得探讨的课题；特别是近年来中药配方颗粒逐渐在临床上推广应用，更引起大家的重视。本试验以中药经方连朴饮中的有效成分盐酸小檗碱作为指标，采用高效液相色谱（HPLC）法比较连朴饮传统煎剂与中药配方颗粒中盐酸小檗碱的含量差异，以探索中药复方制剂不同制法对其有效成分提取量的影响。

1 材料

1.1 仪器

1525型HPLC仪、紫外检测器（美国Waters公司）；KQ-300 DE型超声仪（北京中仪友信科技有限公司）。

1.2 试剂

盐酸小檗碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110749-200572）；甲醇、乙腈为色谱纯，水为娃哈哈纯净水。

1.3 药材

制厚朴、川黄连、石菖蒲、制半夏、香豉、焦栀子、芦根均由贵州遵义市医药有限公司提供，均经遵义市食品药品检验所邓顺超副主任中药师鉴定为真品，均符合2010年版《中国药典》（一部）规定；中药配方颗粒由贵州省三仁堂药业有限公司制备。

2 方法与结果

2.1 处方与煎制

2.1.1 处方 制厚朴6 g、川黄连3 g、石菖蒲3 g、制半夏3 g、香豉9 g、焦栀子9 g、芦根60 g。

2.1.2 传统煎剂（合煎剂）的煎制 按处方取各药材，加相当于药材8倍量的水煎煮，保持微沸30 min，倒出煎液；药渣再加8倍量的水煎煮20 min。合并2次煎液，减压干燥成干粉。

2.1.3 中药配方颗粒（分煎剂）的煎制 分别称取上述处方量的药材，分别加8倍量的水煎煮2次，每次保持微沸30 min，制备各药材的煎液，减压干燥成干粉，分别制粒后混匀。

两者的干粉率均约20%。

2.2 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（50∶50，V/V）（每100 ml加十二烷基磺酸钠0.1 g）；流速：1.0 ml/min；检测波长：265 nm[1-3]；柱温：30℃。

2.3 溶液的制备

2.3.1 对照品贮备液 精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1 ml含盐酸小檗碱1 mg的溶液，作为对照品贮备液。

2.3.2 传统煎剂（合煎剂）的供试品溶液 取合煎法制得的干粉约2.0 g，精密称定，置100 ml量瓶中，用适量开水溶解，放冷后定容。精密吸取5 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理（功率：250 W，频率：20 kHz）25 min，取出，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，取续滤液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得传统煎剂的供试品溶液。

2.3.3 中药配方颗粒（分煎剂）的供试品溶液 称取分煎法制得的中药配方颗粒约2.0 g，精密称定，照“2.3.2”项下方法制备中药配方颗粒的供试品溶液。

2.3.4 阴性对照溶液 按“2.1.2”项下方法制备不含川黄连的阴性样品，再按“2.3.2”项下方法制备阴性对照溶液。

2.4 干扰试验

取盐酸小檗碱对照品溶液、传统煎剂（合煎剂）供试品溶液及不含川黄连的阴性对照溶液各20 μl注入HPLC仪测定。结果发现，在此色谱条件下，盐酸小檗碱峰与其他组分峰分离完全，阴性对照在与盐酸小檗碱峰相同的保留时间处无干扰。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatograms

2.5 线性关系考察

分别精密量取质量浓度为1.0012 mg/ml的盐酸小檗碱对照品贮备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得系列质量浓度的盐酸小檗碱对照品溶液，分别进样20 μl，照上述色谱条件测定峰面积。以进样量（x）为横坐标，峰面积积分值（y）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为y＝5.0×106x+1.0×106（r＝0.9992，n＝5）。结果表明，盐酸小檗碱进样量在2.0～10.0 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.6 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液20 μl，按“2.2”项下色谱条件重复进样5次，测定峰面积，结果，RSD＝0.28%（n＝5），表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液[传统煎剂（合煎剂）]适量，分别于室温下放置0、4、8、16、24h，取20μl进样，测定峰面积。结果，RSD＝1.03%（n＝5），表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 重复性试验

精密称取同一样品[传统煎剂（合煎剂）]适量，按“2.3.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，再按“2.2”项下色谱条件进样测定。结果，RSD＝1.2%（n＝6），表明本方法重复性良好。

2.9 加样回收率试验

精密称取已知含量（每1 g含7.96 mg）的[传统煎剂（合煎剂）]样品粉末适量，共6份，分别置50 ml量瓶中，用适量开水溶解，再分别精密加入盐酸小檗碱对照品溶液（质量浓度为1.661mg/ml）5ml，放冷后加甲醇定容，摇匀，取续滤液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，按“2.2”项下色谱条件进样测定，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1 Results of recovery tests（n＝6）

2.10 样品含量测定

分别按“2.1.2”、“2.1.3”项下制备方法各制备3份样品，再分别按“2.3.2”、“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，照“2.2”项下色谱条件进样测定，计算样品中盐酸小檗碱的含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝3）

由表2可见，连朴饮分煎剂中盐酸小檗碱的平均含量比合煎剂高。

3 讨论

采用HPLC法测定中药复方制剂中盐酸小檗碱的含量，文献报道可用多种不同组成的流动相系统[4-7]。本试验参考文献和《中国药典》方法，选用乙腈-0.1%磷酸溶液（50∶50，V/V）（每100 ml加十二烷基磺酸钠0.1 g）作为流动相。结果表明，盐酸小檗碱峰形较为理想，与杂质峰能达到基线分离。

连朴饮传统煎剂（合煎剂）与中药配方颗粒（分煎剂）中盐酸小檗碱的含量比较结果表明，中药配方颗粒（分煎剂）比传统煎剂（合煎剂）中有效成分盐酸小檗碱的含量高。原因可能是传统煎剂（合煎剂）中各药材之间的相互化学作用，如沉淀反应等导致其结果偏低。传统煎剂（合煎剂）中有效成分含量较低是否为一个普遍现象，还有待广泛的研究。

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