不同产地藏药材湿生扁蕾中多糖的含量测定

李 炀 景 明，2﹡ 陈 晖

(1.甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000;2.甘肃省中药药理与毒理学重点实验室，甘肃 兰州 730000)

湿生扁蕾为龙胆科扁蕾属植物Gentianop sispaludosa(Munro)Ma.的干燥全草，藏药称机合斗，产于甘肃、青海、四川、西藏等地区，生长在海拔2300～4100 m的河滩草地、沟边、山坡。具有清热解毒、止痛、利湿消黄、健脾止泻等功效，用于治疗肝炎、胆囊炎、热病发斑、泄泻、肠胃炎、结膜炎、急性肾盂肾炎、疥疮肿毒等症，藏医用全草治疗流行性感冒及胆病引起的发烧〔1〕。对所含化学成分包括黄酮类、山酮类、三萜类、三十烷醇、胡萝卜苷、β－谷甾醇、酚类、有机酸等的研究已有报道〔2－3〕，但对湿生扁蕾多糖成分的研究尚未见报道。本实验拟采用硫酸苯酚法测定藏药湿生扁蕾中多糖的含量，对不同产地、不同采收期湿生扁蕾中多糖的含量作一比较，为该药材的质量评价提供参考依据。

1 仪器与试药

AE－240电子天平(梅特勒－托利多仪器上海分公司);KQ－100超声波清洗器(昆山市超声技术有限公司);R－200旋转蒸发仪(瑞士布奇)。硫酸(分析纯，白银良友化学试剂有限公司);苯酚(分析纯，天津市光复精细化工研究所);水为重蒸馏水;其它试基金项目:甘肃省科技支撑计划项目(0804NKCA119－08)剂均为分析纯。葡萄糖对照品(含量测定用，购自中国药品生物制品检定所);湿生扁蕾药材采自甘肃15个不同产区，由甘肃省药品检验所中药室宋平顺主任中药师对以上品种进行鉴定。

2 方法与结果〔4－5〕

2.1 多糖的提取分离:湿生扁蕾药材用石油醚(60～90℃)脱脂，药渣挥尽石油醚，加水煎煮3次，每次加10倍量水，煎煮1h，合并水煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.15 ～1.20(g·mL－1)的浸膏，搅拌下加 4 倍 95%乙醇沉淀24h，滤过，沉淀加水溶解，加1倍量20%三氯乙酸，搅拌20min，滤过，滤液用2mol·L－1氢氧化钠迅速中和至pH7.0左右，加1.5%活性炭脱色30min，滤过，滤液再加4倍95%乙醇沉淀，滤过，沉淀60℃以下干燥，即得湿生扁蕾多糖。

2.2 对照品溶液的制备:精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品82mg，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备:精密称取不同产地湿生扁蕾药材提取的多糖0.5g，置100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.4 标准曲线的制备:精密吸取对照品溶液 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL，分别置 50mL 量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取上述各溶液2.0mL，置具塞试管中，分别加4%苯酚溶液1mL，混匀，迅速加入硫酸7.0mL，摇匀，于40℃水浴中保温30min，取出，置冰水浴中5min，取出，以相应试剂为空白，在490nm测定吸光度。以吸光度(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线。回归方程为:A=57.248C+0.0695，r=0.9984。结果无水葡萄糖在 0.82 ～2.46μg范围内线性良好。

2.5 样品含量测定:分别精密量取供试品溶液2.0mL，按2.4项下方法自“加4%苯酚溶液1mL”起处理，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的重量(mg)，计算含量，结果见表1及表2。

表1 不同产地湿生扁蕾多糖的质量分数

表2 不同采收期湿生扁蕾多糖的质量分数

3 讨论

实验曾考察了加水量、煎煮时间、煎煮次数对水煎提取的影响，结果以每次加10倍量水煎煮1h煎煮3次时湿生扁蕾多糖提取率最高。同时对影响醇沉的因素浸膏密度、加醇速度、含醇浓度也进行了考察，结果以浸膏密度1.15～1.20(g·mL－1)，搅拌下按1/2浸膏体积速度加入4倍量95%乙醇时湿生扁蕾多糖得率最高。

实验中还曾对20%三氯乙酸与氯仿－正丁醇(5:1)去除蛋白进行比较，结果氯仿－正丁醇宜乳化，分离困难，确定用20%三氯乙酸去除蛋白。同时对石油醚脱脂、活性炭脱色进行考察，10倍量石油醚(60～90℃)脱脂2次、1.5%活性炭脱色30min较理想。

实验结果表明，甘肃15个不同产地湿生扁蕾全草中多糖的含量差别较大，其中最高为2.98%(g/g)，最低为1.01%(g/g)。而且同一产地的不同采收期之间多糖含量也有差异。分析影响本实验结果的因素可能是生态环境光照、气候、土壤等的不同所致。

［1］张宝琛，甄润德，胡柏林，等.湿生扁蕾的化学成分研究〔J〕.中草药，1980，11(4):149.

［2］李作平，霍长虹，郑小莉.扁蕾的化学成分研究〔J〕.中国现代应用药学杂志，2003，20(1):24.

［3］王焕弟，谭成玉，杜昱光，等.藏药湿生扁蕾的化学成分研究〔J〕.中国药学杂志，2005，40(14):105.

［4］单俊杰，王顺春，刘 涤，等.黄芪毛状根与栽培黄芪中多糖的比较〔J〕.中草药，2001，32(5):413－414.

［5］中华人民共和国药典(2010版一部)〔M〕.北京化学工业出版社:57.