HPLC测定藏药川西千里光中绿原酸的含量

孙 楠 王海英 孙跃宁 杜连平

(青海阿如拉藏医药研究开发有限公司，青海 西宁 810007)

千里光属(Senecio L.)是菊科(Compositae)中最大的属，也是整个植物界最大的属之一，全属共有1500个种以上，我国有160余种，主要分布于陕西、甘肃、青海等地［1，2］。藏药川西千里光(Senecio solidagineus Hand.－Mazz.)藏药名叶格兴，系菊科千里光属植物，多年生草本，产西藏(拉萨、朗县、米林、波密、八宿、松宗、则当、隆子)、四川西南部(巴塘、道孚、茂县)、云南(德钦)。生于海拔2900～2900m开旷阳坡。具有清热解毒治疮、接骨，清肝胆诸热等功效，花序或全草入药，主治伤口发炎、肿胀、急性结膜炎、皮炎、疮疖、跌打损伤等症［3］。现代研究发现，其主要成分为黄酮类、倍半萜类成分等［4，5］。为了有效地控制川西千里光的质量，本文建立了绿原酸的HPLC定量的方法，为川西千里光的研究和开发提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器:KQ－2500型超声波清洗器;岛津LC－20AT高效液相色谱仪;电子天平。

1.2 试药:川西千里光(购于青海九康药材公司，批号:20120801，20120802，20120803);绿原酸对照品(批号:110753－200413，购自中国药品生物制品鉴定所);双蒸馏水(自制);乙腈、甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈－0.5%磷酸溶液(15∶85)为流动相;检测波长327nm［6］。理论板数按绿原酸峰计算应不低于5000。在上述条件下，绿原酸的保留时间在8min左右，且无杂质干扰，分离度良好(图1)。

图1 绿原酸对照品及供试品图谱

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备:取绿原酸对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1mL含20μg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备:取本品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理45min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液1mL，置10mL容量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，作为供试品溶液。

2.3 标准曲线与线性范围:精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10、12μL注入液相色谱仪测定，以进样量为横坐标(X)，以峰面积的积分值为纵坐标(Y)绘制标准曲线。得绿原酸回归方程为Y=20275X+973，r=0.9999。结果表明，在上述色谱条件下，绿原酸在0.042～0.252μg范围内呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验:吸取对照品溶液10μL，在上述色谱条件下连续进样6次，测定峰面积，结果对照品的 RSD为0.88%(n=6)，说明仪器性能良好。

2.5 稳定性试验:吸取同一供试品溶液10μL，于0、2、4、6、8、10h进样，测定峰面积，结果供试品的RSD为0.95%(n=5)，说明测定时间内供试品稳定。

2.6 重复性试验:取同一批号样品5份，分别按样品溶液制备法制备，测定其绿原酸峰面积值，其结果样品中绿原酸平均含量为 6.8mg·g－1，RSD 为0.93%(n=5)，表明分析方法精密度良好。

2.7 加样回收率试验:取已知含量的样品6份，分别精密加入浓度为0.2125mg·mL－1的绿原酸对照品溶液5mL，按含量测定方法操作制备供试品溶液，并按上述色谱条件测定，计算得绿原酸平均回收率为96.51%，RSD为0.62%(n=6)。结果见下表1。

表1 加样回收率试验结果(n=6)

2.8 样品的测定结果:按上述色谱条件，依法测定3批样品中绿原酸的含量，结果见表2。

表2 样品中绿原酸的含量测定结果(n=3)

3 讨论

3.1 本试验考察了绿原酸的提取方法，对样品进行了回流提取和超声提取对比研究，结果以超声提取方法简便快速、效果最好，可消除对待测成分的干扰并且绿原酸含量较高。

3.2 由方法学考察结果可见，本法具有回收率高、精密度好、重现性好、分析快速的优点，色谱峰之间能有效的分离，方法可行，可用于川西千里光的质量控制。

［1］中国植物志编委会.中国植物志［M］.第76卷.北京:科学出版社，1979:55

［2］李笑颜.藏药川西千里光化学成分的研究［D］.兰州:兰州理工大学，2010

［3］中国科学院西北高原生物研究所.藏药志［M］.西宁:青海人民出版社，1991:322

［4］杨爱梅，李笑颜，冯艳.藏药川西千里光中倍半萜类成分的研究［J］.中医药学报.2011，39(5):66－68

［5］杨爱梅，李笑颜，李玉兰.藏药川西千里光中黄酮类成分的分离和结构鉴定［J］.中成药.2012，03

［6］国家药典委员会.中国药典［S］.一部.中国医药文化社，2010:205－206