侯丽丽,晏永新,蔡美萍,方学锋
(1.山西省兽药监察所,太原030027;2.江西新世纪民星动物保健品有限公司,南昌330096)
党参为临床常用的传统补益中药,味甘性平,具有健肺益脾、补中益气、生津、促进造血机能、调节血糖、降压、耐疲劳、抗缺氧、增强机体免疫力、调节胃收缩及抗溃疡等多种作用[1]。其主要活性成分之一党参多糖具有增强免疫功能、抗肿瘤、增强抗应激能力及抗氧化[2]等多种药理活性。试验通过使用党参多糖口服液连续灌胃给药,观察药物的耐缺氧、抗疲劳作用和抗炎作用,分析药物对动物机体的应激反应能力和抗炎的影响。
1.1 试验动物 昆明种小鼠,雌雄各半,体重18~22 g,由江西中医学院实验动物中心提供。
1.2 药品、试剂及器材 党参多糖口服液(100 mL/瓶,2 g生药/mL),江西新世纪民星动物保健品有限公司,批号:20100501,试验前适当浓缩;人参口服液,吉林省通化博祥药业有限公司,国药准字Z20075112,批号:20091201;二甲苯。注射器、负重物(每个2 g)、缺氧瓶、电子天平。
2.1 党参多糖口服液对小鼠应激性的影响
2.1.1 动物分组和剂量设计 取上述规格小鼠200只,雌雄各半,按体重、性别随机分成2个实验单位,每个实验单位分设5组,每组各20只。空白对照组,党参多糖口服液低剂量组(5.0 g生药/kg)、中剂量组(7.0 g生药/kg)、高剂量组(9.0 g生药/kg),阳性药物对照药人参口服液组(5.0 g生药/kg)。各给药组连续灌胃给药5 d,每天1次,每次0.2 mL/10 g,空白对照组灌胃等体积的生理盐水(表1)。
表1 动物分组及剂量设计
2.1.2 党参多糖对小鼠负重游泳时间的影响 参照文献[3-4]方法,末次给药60 min后,将尾部负重2 g铅线的小鼠置于塑料桶(50 cm×30 cm),水温调节至(25±3)℃,进行游泳试验,记录小鼠自开始置入到头部沉入水中10 s不能浮出水面的时间,即是小鼠负重游泳的时间。试验结果数据均以(±s)表示,采用spss 16.0软件t检验法检查组间差异。
由表2可见,党参多糖口服液各剂量组和人参口服液组与空白对照组相比均能显著延长小鼠的游泳时间(P<0.01)。党参多糖口服液中剂量组的效果即与人参口服液相当,且小鼠游泳时间随着党参多糖口服液剂量的增加而延长。
2.1.3 党参多糖口服液对小鼠常压缺氧的影响于末次给药60 min后,开始试验。逐个将小鼠放入底部盛有10 g钠石灰的广口瓶内,每瓶放小鼠1只,小鼠适应后,盖上涂有凡士林的瓶塞。记录从密闭瓶口到小鼠停止呼吸的时间,作为常压缺氧条件下小鼠的存活时间[3]。
由表3可见,与空白对照组相比,党参多糖口服液高、中、低剂量组和人参口服液均能显著延长小鼠的耐缺氧时间(P <0.01)。党参多糖口服液中剂量组的效果即与人参口服液相当,且小鼠存活时间随着党参多糖口服液剂量的增加而延长。
表2 党参多糖口服液对小鼠游泳时间的影响(¯±s,n=20)
表2 党参多糖口服液对小鼠游泳时间的影响(¯±s,n=20)
注:与空白组比较:*P <0.05,**P <0.01,下表同。
负重游泳时间/min人参口服液 5.0 20 66.5±9.2组 别 剂量/(g生药·kg-1)动物数/只**党参多糖口服液(低) 5.0 20 56.6±4.9**党参多糖口服液(中) 7.0 20 66.4±8.3**党参多糖口服液(高) 9.0 20 83.5±9.8**空白对照 —20 35.9±7.0
表3 党参多糖口服液对小鼠常压缺氧的影响(±s,n=12)
表3 党参多糖口服液对小鼠常压缺氧的影响(±s,n=12)
存活时间/min人参口服液 5.0 20 30.8±3.4组 别 剂量/(g生药·kg-1)动物数/只**党参多糖口服液(低) 5.0 20 27.9±3.4**党参多糖口服液(中) 7.0 20 31.3±3.6**党参多糖口服液(高) 9.0 20 36.9±3.5**空白对照 —20 21.2±3.20
2.2 党参多糖口服液对小鼠的抗炎作用 参考文献[3]中的方法,取上述规格小鼠50只,雌雄各半,按体重、性别随机分5组,每组10只。空白对照组,阳性药物对照组(人参口服液),党参多糖口服液各剂量组,各给药组连续灌胃给药5 d,每天1次,每次0.2 mL/10 g,空白对照组灌胃等体积的生理盐水。于末次给药30 min后,用二甲苯棉球接触小鼠左耳约5 s,15 min后脱颈椎处死,以打孔器将小鼠双耳相同部位等面积切下,用电子天平精确称准,以左耳重减右耳重为小鼠的耳肿胀度,并求出抑制率。
由表4可知,党参多糖口服液不同剂量组和人参口服液组对小鼠耳廓肿胀的抑制显著高于空白对照组(P<0.01),高剂量组抑制率最高,其次是中剂量组和低剂量组,最后是人参口服液组。试验表明党参多糖口服液对小鼠耳廓肿胀有一定的抑制作用,且在一定浓度范围内其抑制作用随着党参多糖口服液使用剂量的增加而增强。
表4 党参多糖口服液对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响(±s,n=10)
表4 党参多糖口服液对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响(±s,n=10)
组 别 剂量/(g生药·kg-1) 耳重/mg 抑制率23.63党参多糖口服液 5.0 9.73±2.43** 23.70党参多糖口服液 7.0 9.23±2.68** 23.91党参多糖口服液 9.0 7.61±2.21** 37.10空白对照 —/%人参口服液 5.0 9.24±1.340**12.89±2.84
动物在饲养过程中难免会受到各种因素造成的应激作用,在一定程度上降低了生产性能,也给业主造成一定的经济损失[5],党参多糖是中药党参的主要有效成分之一,对中枢神经具有明显的抑制作用,对各种原因引起的缺氧动物有显著的抗缺氧作用,同时也有显著的抗应激作用。李伟[6-7]等经过试验证明党参多糖能明显延长小鼠在常压缺氧下的存活时间,对小鼠遭受的高温缺氧及疲劳等刺激也有明显的抗应激作用,并指出其抗应激作用可能与兴奋下丘脑—垂体—肾上腺皮质系统有关。
试验采用强迫小鼠游泳试验及小鼠常压缺氧试验来验证党参多糖口服液的抗应激作用,从试验结果可以看出,党参多糖口服液和空白对照组相比能显著(P<0.01)延长小鼠的游泳时间和常压缺氧条件下的存活时间,中剂量组同阳性对照即人参口服液组效果相当,说明党参多糖口服液具有明显的抗应激作用。
抗炎作用研究的最常用模型之一就是皮肤毛细血管通透性增高模型[8],该方法直观、操作简便、结果重现性好。化学药品二甲苯可引起急性炎症,将它涂于小鼠耳部能诱导小鼠耳部肿胀,灌服具有抗炎作用的党参多糖口服液,可以减弱肿胀,至于其抗炎机理还有待进一步的研究。
结果表明,党参多糖口服液具有明显的抗应激作用,同时具有抗炎作用,该试验可为党参多糖口服液的临床应用提供参考。
[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典二〇〇五年版一部[S].
[2]李贵荣,杨胜圆.党参多糖的提取及其对活性氧自由基的清除作用[J].化学世界,2001,8:42.
[3]陈 奇.中药药理研究方法学(第二版)[M].北京:人民卫生出版社,2006:778,779,298.
[4]王传功,王申广,林丽文.枸杞山茱萸水煎液增强小鼠耐缺氧抗疲劳能力的实验研究[J].中国行为医学科学,2006,15(8):679-680.
[5]李红军,田夏清,徐美娟.动物应激的研究进展[J].饲料研究,2006,10:6-11.
[6]李 伟,陈颖莉,曲淑岩.党参多糖的抗应激作用[J].实验研究,1990(6):33.
[7]方 明,石云峰,焦炬焰.中药党参抗应激作用的研究[J].辽宁药物与临床,2002,5(1):32-33.
[8]梁晓天.常用中药基础研究(第二卷)[M].北京:科学出版社,2004:296.