茜素红荷移光度法测定阿魏酸哌嗪

潘自红，赵晓军，康都羡,2，刘喜芳

(1. 平顶山学院 化学化工学院，河南 平顶山 467000； 2. 中国平煤神马能源化工集团，河南 平顶山 467000)

阿魏酸哌嗪(piperazine ferulate，PF)，原名保肾康，是传统中药川芎的有效成份阿魏酸经化学方法合成的药物[1]，具有抗凝、扩张微血管、增加冠脉流量、解除血管痉挛、抑制ADP诱导的血小板聚集等作用，临床研究也表明阿魏酸哌嗪具有减少蛋白尿，改善肾功能综合症等[2]作用. 目前已报道测定阿魏酸哌嗪的方法有高效液相色谱法[3-5]，分光光度法[6]等. 分光光度法因具有运行成本低，设备操作简单、便于常规实验室普遍使用等特点，而受到重视. 用荷移分光光度法测定阿魏酸哌嗪的方法尚未见文献报道. 实验研究发现，阿魏酸哌嗪分子中的仲胺基(-NH-)上的氮原子的孤对电子具有一定活性，而茜素红分子结构中含有醌基，两者在水溶液中可发生荷移反应形成紫红色1∶1复合物，其在524 nm处有特征吸收，据此，建立了荷移光度法测定药物制剂中阿魏酸哌嗪含量的新方法.

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

UV-2550双光束紫外-可见分光光度计(日本岛津公司)；722s/723可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)；CS-501超级恒温仪(重庆实验设备厂).

3.0×10-3mol·L-1茜素红水溶液；阿魏酸哌嗪纯品(湖南千金湘江药业有限公司提供)，配置成400 mg·L-1的水溶液. 所有其他试剂均为试剂纯，实验用水为二次蒸馏水.

1.2 实验方法

准确移取适量阿魏酸哌嗪对照品或试样溶液适量加入25.00 mL容量瓶中，然后加入4.00 mL浓度为3.0×10-3mol·L-1的茜素红溶液；用水稀释至刻度，摇匀；以试剂空白作参比，用1 cm比色皿，在524 nm处测体系的吸光度.

2 结果与讨论

2.1 吸收光谱

按分析步骤配制溶液，以水为参比扫描阿魏酸哌嗪(曲线1)和茜素红溶液(曲线2)的吸收光谱和以试剂空白为参比扫描体系的吸收光谱(曲线3)，结果见图1. 阿魏酸哌嗪在380～700 nm范围内基本无吸收，而茜素红溶液在423 nm处有强吸收. 当向茜素红溶液中加入少量的阿魏酸哌嗪溶液后溶液呈现紫红色，说明二者发生显色反应，并有新产物生成，其在524 nm处有最大吸收. 为消除试剂干扰，以试剂空白为参比，于524 nm处测定生成物的吸光度.

2.2 反应时间及稳定性的影响

按实验方法测量反应时间对体系吸光度的影响，结果如图2所示. 由图2可见，该荷移反应迅速，在试剂加入同时反应基本完成，且吸光度值在1 h内基本不随时间的变化而变化，满足定量测定的要求.

图1 体系的吸收光谱Fig.1 Absorption spectra of the system

图2 反应时间对体系吸光度的影响Fig.2 Effect of the time on the absorption

2.3 茜素红用量的影响

按实验方法考察了3.0×10-3mol·L-1茜素红水溶液的加入量对体系吸光度的影响，结果如图3所示. 由图可见，当茜素红的用量低于3.50 mL时，体系的吸光度较低；当茜素红的加入量在3.50～7.00 mL之间变化时，体系的吸光度基本不变. 实验选用茜素红的用量为 4.00 mL.

2.4 温度的影响

按照实验方法配置5份相同浓度的阿魏酸哌嗪标准溶液，分别放置在15 ℃、20 ℃(室温)、30 ℃、40 ℃、50 ℃恒温水槽中加热10 min，然后冷却至室温条件下测定其吸光度，结果如图4所示. 实验表明：温度较低时，体系的吸光度较低；温度在室温及以上时，体系吸光度无明显的增加，说明短时间加热对体系的吸光度无明显影响，故实验选择室温以简化实验操作.

图3 茜素红用量对体系吸光度的影响Fig.3 Effect of volume of alizarin red on the absorption

图4 温度对体系吸光度的影响Fig.4 Effect of temperature on the absorption

2.5 工作曲线、检出限及精密度

按照分析步骤配制阿魏酸哌嗪系列标准溶液，并根据吸光度绘制工作曲线. 实验表明，阿魏酸哌嗪溶液的浓度在1.60～48.0 mg·L-1范围内时，浓度与吸光度呈良好的线性关系，线性回归方程为A= 0.021 07+0.003 93c(mg·L-1)，线性相关系数R= 0.999 2，表观摩尔吸光系数为1.86×103L·mol-1·cm-1.

平行测定11份试剂空白溶液，以测得吸光度的标准偏差的三倍除以工作曲线拟合方程的斜率，求出阿魏酸哌嗪的检出限为1.19 mg·L-1. 对含量为32.0 mg·L-1的阿魏酸哌嗪平行测定11次，其相对标准偏差为1.5%.

2.6 复合物组成的测定

应用饱和法和等摩尔连续变化法测定复合物的组成. 两种方法测定结果表明荷移反应生成物中阿魏酸哌嗪与茜素红的组成比均为1∶1.

2.7 分析应用

按照实验步骤测定了市售药物制剂中阿魏酸哌嗪的含量. 按照实验方法对样品进行测定，并做了加标回收实验(表1). 由表可知，该实验所得的加标回收率在97.5%～100.9%之间.

表1 样品及回收率测定Table 1 The determination of the samples and recoveries

3 结论

利用阿魏酸哌嗪与茜素红荷移的显色反应，建立了测定药物中阿魏酸哌嗪新的分光光度法. 考察了分光光度法测定阿魏酸哌嗪的影响因素、适宜的反应条件等，并应用该法测定了药物制剂中阿魏酸哌嗪的含量. 所建立的方法具有简单、快速等特点.

参考文献：

[1] 郭玉麟,钟三保. 阿魏酸哌嗪的合成及其药理与临床研究[J]. 华西药学杂志, 1987, 2(1): 52-54.

[2] 凌均耀,余廷龙,刘先容,等. 阿魏酸哌嗪治疗肾小球疾病的近期疗效[J]. 中华肾脏病杂志,1991, 7(5): 292-293.

[3] 高秀蓉,廖昌军,许小红,等. RP-HPLC测定尿液中阿魏酸哌嗪的含量[J]. 华西药学杂志, 2006, 21(6): 579-580.

[4] 何 丽,陈德梅,符乃光. 高效液相色谱法测定阿魏酸哌嗪片的含量[J]. 中国药事, 2005, 19(1): 35-36.

[5] 魏 月. 高效液相色谱化学发光法测定阿魏酸哌嗪[J]. 生命科学仪器, 2008, 6(10): 38-40.

[6] 吴伶俐,魏献军,高林晓,等. 1,2-萘醌-4-磺酸钠作为显色剂分光光度法测定阿魏酸哌嗪[J]. 分析试验室, 2009, 28(6): 53-56.