绵茵陈正交提取工艺初步筛选

天津市南开医院（300100）张柏顺

附表1 正交试验因素水平表

附表2 正交试验结果及统计（相当于生药mg/g）

附表3 4因素间主次关系分析表[F（2，2）0.05=19.00]

附表4 绵茵陈提取验证表（相当于生药mg/g）

绵茵陈为菊科植物滨蒿Artemisia scoparia Waldst. et Kit. 或茵陈蒿Artemisiacapillaris Thunb.的干燥幼苗地上部分，春季幼苗高6～10cm时采收。临床上具有清热利湿，利胆退黄功效。常用于黄疸尿少，湿温暑湿，湿疮瘙痒。幼苗期主要成分为绿原酸，但还含有少量6，7-二甲氧基香豆素、茵陈色元酮等。现代药理研究表明，绿原酸具有利胆、保肝、抗菌、消炎、抑制脂质过氧化物对肝细胞的破坏等作用[1]。

1 仪器与材料

1.1 仪器 高效液相色谱仪（岛津LC-IOATVP）；紫外检测器（岛津SPD-10AVP）；水浴锅；色谱柱：奥泰Apollo C18；十万分之一电子天平（Sartorius analytic BP211D）。

1.2 材料 绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110753-201013）；色谱纯：乙腈；分析纯：重蒸馏水、磷酸；茵陈药材（产地：河北）。

2 方法与结果

2.1 正交试验设计 绵茵陈中主要成分绿原酸，可溶于常用的有机溶剂或水中，经预实验比较并考虑到其他成分，故笔者对绵茵陈采用乙醇进行提取。对醇提取工艺条件进行正交筛选试验，筛选条件包括醇浓度、加醇量、提取时间、提取次数，以绿原酸含量为测定指标采用L9（34）正交试验表，见附表1。

2.2 色谱条件 奥泰Apollo C18（4.6mm×250mm，5µm）；流动相为乙腈-0.0 5%磷酸水溶液（10∶90）；流速1.0mL/min；检测波长327nm；柱温35℃；进样量20µL。

2.3 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品10.34mg，置于棕色容量瓶中，加50%甲醇定容至50mL容量瓶中并稀释到刻度，摇匀。进行标准曲线绘制，得回归方程绿原酸y=1.89577×106x+47960.1，r=0.9998。试验结果表明，绿原酸在0.2068～3.102µg间具有良好的线性关系。

2.4 实验样品制备方法 据正交设计附表1试验，精密称取绵茵陈约5g，加入圆底烧瓶，按试验号对应的条件试验，水浴温度80℃，回流提取，过滤，提取液合并，测定体积，配制供试样品液。

2.5 含量测定方法 HPLC测定用样品的制备：精密吸取提取液4mL，加入25mL容量瓶，用相应甲醇稀释定容至25mL，过0.45µm微孔滤膜。按绿原酸色谱条件测定，进样20µL，结果见附表2。对附表2中的试验结果进行直观分析显示，4个因素间主次关系为D＞A＞B＞C，对上述试验结果进行方差分析，结果见附表3。提取次数有显著性差异，而其余三者无显著性差异，考虑实际生产中的因素，决定选用A3B3C1D3工艺条件，即加10倍量60%乙醇，提取3次，40min/次。

2.6 验证试验 用同一批药材，分别按A3B3C1D3工艺条件进行3次试验，结果显示验证结果与试验结果基本一致，见附表4。

3 小结与讨论

同批次绵茵陈药材中绿原酸含量为8.104mg/g生药，验证结果的转移率可达98%，说明该筛选结果可满足提取工艺。