紫外分光光度法测定阿霉素聚乳酸微球的含量*

罗斌华，丁洁琼

(湖北科技学院药学院，湖北咸宁437100)

阿霉素(Adriamycin，ADM)属于蒽环类抗肿瘤抗生素，活性较强，对肿瘤细胞在各种生长周期均有杀伤作用;抗肿瘤谱广，对肺癌、胃癌、乳腺癌、膀胱癌和肉瘤病等具有较好的疗效。聚乳酸(PLA)是一种真正的生物塑料，其无毒、无刺激性，具有良好的生物相容性，可生物分解吸收，可用作医用手术缝合线、注射用胶囊、微球及埋植剂等。国内已报道阿霉素的含量测定方法有很多种，如荧光分光光度法检测大鼠膀胱组织中表阿霉素浓度［1］，阿霉素磁性明胶微球的制备及特性检测［2］，本实验采用溶剂将阿霉素聚乳酸微球溶解后，再用紫外-可见分光光度法测定阿霉素的含量。

1 仪器与材料

UV-4802双光束紫外可见分光光度计(上海尤尼柯仪器有限责任公司);HY-2调速多用震荡仪(江苏中大仪器厂);TG328A 电子天平(湘仪电子仪器厂);阿霉素原料药(浙江海正药业有限公司，0405E1);聚乳酸(M=2万，济南岱罡生物技术有限公司);乙腈(国药集团);阿霉素聚乳酸微球(自制)。

2 试验方法与结果

2.1 储备液的配制

阿霉素储备液的制备:精密称量阿霉素对照品10 mg，置100 ml 容量瓶中，用10%的水的乙睛稀释、定容，得0.1 mg·ml－1的阿霉素储备液。

2.2 检测波长的选择

分别取阿霉素储备溶液和空白微球溶液适量，取滤膜过滤后续滤液为测定液，以稀释液为参比溶液，选用双波长紫外分光光度计，在200～800nm 波长范围内，进行波长扫描，结果发现在488nm 波长处，阿霉素储备液有较大吸收，而空白微球基本无吸收，说明此波长处无辅料干扰;而233nm 处有辅料干扰，因此可将488nm 作为阿霉素聚乳酸微球的检测波长。扫描结果见图1、图2。

图1 阿霉素溶液的光谱图

图2 空白微球溶液的光谱图

2.3 标准曲线的建立

以10%的水的乙腈溶液为稀释液，将阿霉素标准储备液稀释成7.5、9.0、10.5、12.0、13.5、15.0μg·ml－1的系列标准溶液，以稀释液为空白溶液，在488 nm 波长处测定阿霉素标准品溶液吸光度值，用最小二乘法以浓度C(μg·ml－1)对吸光度A 进行线性回归，回归方程为A=0.04007C+0.00867，r=0.9997，线性范围7.5～15.0μg·ml－1，见表1和图3。

表1 不同浓度的阿霉素的吸光度值

图3 阿霉素溶液的标准工作曲线

2.4 精密度试验

取10 ml 容量瓶三支，分别加阿霉素储备液适量，再用稀释液稀释成浓度分别为7.5、10.5、13.5μg·ml－1的溶液。以稀释液为空白溶液，于488 nm 处测定吸光度，重复测量3次，计算精密度，结果见表2。

表2 精密度试验结果

结果显示，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的精密度RSD 分别为0.184%、0.134%、0.103%，符合要求。

2.5 重复性试验

取6份同一批次的阿霉素聚乳酸微球，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，在488nm 处平行测定样品溶液6份，微球的载药量为5.84%，RSD=1.11%(n=6)，表明该方法重复性较好。

2.6 回收率试验

精密称取适量空白微球3份，置于25 ml 容量瓶中，加入相应的阿霉素标准储备液，用10%的水的乙腈溶液进行溶解稀释并定容，得到低中高3种不同浓度的阿霉素溶液，在488 nm 波长处测定吸光度，将测得值带入线性回归方程，计算该方法的平均回收率，结果见表3。

表3 回收率试验结果

由上表可以看出，低中高浓度回收率分别为101.02%、100.56%、100.20%，RSD 分别为0.27%、0.09%、0.23%，符合要求。

2.7 微球的载药量、包封率测定

取自制阿霉素聚乳酸微球样品3批，精密称量，置于容量瓶中，10%的水的乙腈溶液溶解微球、稀释并定容，以稀释液为空白溶液，在488 nm波长处测定样品溶液的吸光度，结果代入回归方程计算微球的载药量、包封率，结果见表4。

表4 阿霉素微球的含量测定结果(n=3)

由上表可以看出，阿霉素聚乳酸微球的平均载药量为5.93%，包封率为38.3%。

3 讨论

一般提取微球中药物的方法有［3］:①选用一种溶剂，只溶解药物而不溶解材料，将药物从微球中萃取出来;②选用一种溶剂，将药物和载体材料全部溶解，然后选用另一种不溶载体材料的溶剂，将药物萃取出来;③选用一种溶剂，将药物和载体

材料溶解，然后选用另外一种溶剂，将载体材料沉淀下来，过滤不溶物得滤液测量;④选用一种溶剂溶解PLA 和药物，然后选用合适的方法直接测定。本实验采用溶剂溶解PLA 和药物后直接测定。根据阿霉素的紫外吸收光谱特征，阿霉素在233nm、254nm 处有较大紫外可见光吸收，PLA 在此波长处也有吸收，而在488nm 处只有阿霉素有吸收，无PLA 干扰吸收，故采用紫外分光光度法测定阿霉素聚乳酸微球含量时，一般选择波长为PLA 无干扰吸收的488nm，可以提高该方法的准确度。

［1］郑元财，余志贤，谢辉，等.荧光分光光度法检测大鼠膀胱组织中表阿霉素浓度［J］.海峡药学，2012，24(10):37

［2］王勇，孙永海，张宏，等.阿霉素磁性明胶微球的制备及特性检测［J］.解放军药学学报，2007，23(4):272

［3］靳浩.注射用阿霉素微球的研究［D］.中国人民解放军军事医学科学院，2006:29