冠心丹参方、精制冠心方和舒胸方对急性心肌缺血大鼠的保护作用比较研究*

★ 朱伟 陈兰英 朱杰 陈筱 李俊,

(1.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心 南昌 330006；2.江西中医学院 南昌 330006)

冠心丹参方、精制冠心方和舒胸方对急性心肌缺血大鼠的保护作用比较研究*

★ 朱伟1**陈兰英1,2***朱杰2陈筱1李俊1,2

(1.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心 南昌 330006；2.江西中医学院 南昌 330006)

目的：研究并比较冠心丹参方、精制冠心方和舒胸方对急性心肌缺血大鼠的保护作用。方法：SD大鼠随机分为5组，连续给药7天，结扎左冠状动脉前降支造成大鼠心肌缺血，观察大鼠心电图ST段变化，分析大鼠心肌梗死面积，并检测血清一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)和心肌肌钙蛋白I(cTNI)含量。结果：冠心丹参方、精制冠心方和舒胸方均能降低模型大鼠ST段，减小心肌梗死面积，提高血清NO含量，降低血清ET-1和cTNI含量。结论：冠心丹参方、精制冠心方和舒胸方对急性心肌缺血大鼠均有很好的保护作用。

冠心丹参方；精制冠心方；舒胸方；心肌缺血；梗死面积

冠心丹参方由丹参、三七和降香油组成，精制冠心方由丹参、川芎、赤芍、红花和降香组成，舒胸方由三七、红花和川芎组成，三方主要功效均为活血化瘀、行气止痛，临床上皆可用于心血瘀阻之冠心病、胸痹心痛。冠心病属于中医学“胸痹”范畴，其病理基础是心肌缺血损伤[1]。本实验旨在探讨冠心丹参方、精制冠心方和舒胸方对急性心肌缺血大鼠的保护作用。

1 材料与仪器

1.1 动物 雄性SD大鼠，SPF级，体重250-300 g，由湖南斯莱克景达实验动物有限责任公司提供，动物质量合格证号：SCXK(湘)2009-0004，大鼠适应性饲养一周，自由饮食。

1.2 主要试剂 氨基甲酸乙酯(乌拉坦)，国药集团化学试剂有限公司，批号：T20110214；伊文思蓝(Evans blue)，Sigma公司，批号：1000903700；2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)，Sigma公司，批号：101000616；甲醛溶液，西陇化工厂股份有限公司，批号：1103112；一氧化氮(NO)测试盒、内皮素-1(ET-1)酶联免疫测试盒、心肌肌钙蛋白I(cTnI) 酶联免疫测试盒均购自南京建成生物工程有限公司；其他试剂均为国产分析纯。

1.3 主要仪器 电生理记录仪(ADInstruments，PowerLab8/sp)、电动呼吸机(江西特力中益呼吸设备有限公司，TKR-400H)、酶标仪(Thermo，Multiskan MK3)、紫外分光光度仪(北京瑞利分析仪器公司，UV-1800)、分析天平(Sartorius，BS124S)、解剖显微镜(Olympas，SZ61)。

2 方法

2.1 受试药准备 冠心丹参方、精制冠心方和舒胸方原药材购于南昌大学第二附属医院中药房，均按《中国药典》2010版制备[2]。

2.2 模型建立与给药 将大鼠随机分为空白组、模型组、冠心丹参组、精制冠心组、舒胸组，每组10只。冠心丹参组、精制冠心组和舒胸组分别灌胃给予冠心丹参方、精制冠心方和舒胸方药液，给药剂量均相当于人临床用量的2倍，空白组和模型组给予等容量生理盐水，每天给药1次，连续给药7d。

最后1次给药10分钟后，腹腔注射20%乌拉坦(0.6mL/100g)麻醉大鼠，固定于恒温(37℃)解剖台上。颈部被毛，沿正中线纵向剪开颈部皮肤，分离气管，接呼吸机(频率为90次/min，吸呼比为1∶1.5)。左前胸被毛，纵向剪开皮肤，剪断第3-5肋，撑开胸腔，撕开心包，充分暴露心脏。用穿有5/0缝合线的小圆针从左心耳下缘2mm处进针，垂直于左前降支由肺动脉圆锥旁出针，进针深度控制在1.5mm左右，宽度为1.5-2mm，结扎左冠状动脉前降支后迅速关闭胸腔，空白组只穿线不结扎[3]。

2.3 心电图观察 将针状电极插入大鼠四肢皮下，连接Powerlab生理记录仪并描记心电图，观察记录造模后5、15、30min与1、2、3h各个时间点ST段的变化。

2.4 血清NO、ET-1、cTNI含量测定 造模3h后，腹主动脉取血，3 500转/min离心10min，取上清保存于-80℃冰箱内待测，用一步法测定血清一氧化氮(NO)含量，酶联免疫吸附法测定血清内皮素-1(ET-1)和心肌肌钙蛋白I(cTNI)含量，均严格按说明书进行操作。

2.5 心肌梗死面积测定 采用Evans blue-TTC双重染色法[4]：大鼠取血后，迅速开胸取心脏，从主动脉缓慢注入PBS溶液10mL冲洗余血，再缓慢注入1%依文思蓝溶液6mL；剔除血管和脂肪等非心肌组织，-80℃冷冻30min，沿房室沟从心尖部将心脏平行切成2mm厚切片；将心脏切片放入1%TTC溶液中(用PH7.4-7.5的PBS溶液配制)，置于37℃水浴中避光染色20min，于10%福尔马林溶液中固定24h；心脏切片称重，解剖显微镜下拍照，ImageTool 3.0图像分析软件分析各心脏切片(正常心肌为蓝色，缺血心肌为红色，梗死心肌为白色)，计算心肌梗死面积百分比。

3 结果

3.1 造模后各组大鼠心电图ST段变化 以造模后心电图ST段抬高(≥0.2mv)作为衡量是否造模成功的指标。详见表1。

模型组心电图ST段造模后明显抬高，与空白组比较具有极显著性差异(P<0.01)，说明造模成功。

表1 各组大鼠心电图ST段变化值

与空白组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型比较，*P<0.05，**P<0.01。

精制冠心方和舒胸方可抑制造模后ST段抬高，造模1h后的ST段与模型组比较具有显著性差异(P<0.05)，冠心丹参方对ST段无明显改善作用。

3.2 各组大鼠心肌梗死面积测定

各给药组大鼠心肌梗死面积百分比均显著低于模型组(P<0.01)，说明冠心丹参方、精制冠心方和舒胸方均可减少急性心肌缺血大鼠心肌梗死面积。精制冠心组的心肌梗死面积低于冠心丹参组和舒胸组。详见表2。

表2 各组心肌梗死面积比较

与空白组比较，##P<0.01；与模型比较，**P<0.01。

3.3 各组大鼠血清NO、ET-1和cTNI测定

模型组血清NO含量明显降低，ET-1含量与cTNI含量显著升高，与空白组比较具有极显著性差异(P<0.01)。各给药组血清NO含量明显升高，ET-1含量和cTNI含量显著降低，与模型组比较均具有显著性差异(P<0.05或0.01)。三方中，精制冠心方NO与ET-1指标优于精制冠心方和舒胸方，冠心丹参方cTNI含量低于精制冠心方和舒胸方。详见表3。

表3 各组大鼠血清NO、ET-1和cTNI含量

与空白组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型比较，*P<0.05，**P<0.01。

4 讨论

冠心丹参方、精制冠心方和舒胸方三方药效确切，组方简单，在临床上治疗冠心病心绞痛方面得到广泛应用，为活血化瘀代表方。本实验通过结扎左冠状动脉前降支复制大鼠急性心肌缺血模型，观察三方对大鼠心电图ST段、心肌梗死面积和血清NO、ET-1及cTNI含量的影响。

现代药理学研究发现，内皮细胞功能障碍贯穿于心肌缺血的发生和发展全过程[5]，内皮损伤后血管收缩因子(ET-1)与舒张因子(NO)之间平衡失调，NO合成减少、ET-1含量增加，导致血管舒缩功能紊乱、血管内皮受损及通透性改变，并引起血液成分和血液流变特性的变化，使心肌缺血缺氧程度进一步加剧。心肌发生缺血(缺氧)损伤后，细胞膜通透性发生改变，细胞内的大分子物质逸出并进入血液循环，cTNI便是便是其中最主要的心肌损伤标志物之一，血清cTNI含量与心肌梗死程度呈正相关[6]。

本实验研究表明：冠心丹参方、精制冠心方和舒胸方均能降低ST段抬高值，减小心肌梗死面积，提高血清NO含量，降低血清ET-1和cTNI含量，表明三方对急性心肌缺血大鼠均有很好的保护作用。通过对三方的研究比较，精制冠心方对急性心肌缺血大鼠的保护作用强于冠心丹参方和舒胸方。

[1]赵志宏,王阶.胸痹心痛与冠心病的病证结合及辨证论治[J].中西医结合心脑血管病杂志,2009,7(5)：590-592.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部[S].北京：中国医药科技出版社,2010.

[3]陈奇.中药药理实验方法学[M].第2版.北京：人民卫生出版社,2006.

[4]覃斐章,简洁,焦杨.17-甲氧基-7-羟基-苯并呋喃查尔酮对垂体后叶素致大鼠心肌缺血的保护作用[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(1)：145-148.

[5]许波华,许立.中药抗心肌缺血作用机制研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(15)：265-269.

[6]曹玉静,心肌标志物对急性心肌梗死的诊断价值及研究进展[J].临床和实验医学杂志,2010, 9(5)：388-389.

ComparativeStudiesonProtectiveEffectsofGuanxindanshenRecipe,JingzhiguanxinRecipeandShuxiongRecipeinAcuteMyocardialIschemiaRats

ZHUWei1,CHENLan-ying1,2,ZHUJie2,CHENXiao1,LIJun1,2

1.NationalPharmaceuticalEngineeringCenterforSolidPreparationinChineseHerbalMedicine,Nanchang330006,China;2.JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanchang330004,China;

Objective: To investigate and compare the protective effects of Guanxindanshen Recipe, Jingzhiguanxin Recipe and Shuxiong Recipe on acute myocardial ischemia in rats. Methods: SD rats were randomly divided into five group. The model of acute myocardial ischemia was established by ligating the LAD after 7 days of successive administration. The changes of ST weight in ECG were observed, the infarct sizes of myocardial were analyzed, and the levels of NO/ET-1 and cTNI in serum were determined. Results: Guanxindanshen Recipe, Jingzhiguanxin Recipe and Shuxiong Recipe could lower the ST weight and reduce the infarct sizes of myocardial. At the same time, they could improve the levels of NO and reduce the levels of ET-1 and cTNI in serum. Conclusion: Guanxindanshen Recipe, Jingzhiguanxin Recipe and Shuxiong Recipe showed nice protective effects in acute myocardial ischemia rats.

Guanxindanshen Recipe; Jingzhiguanxin Recipe; Shuxiong Recipe; Myocardial Ischemia; Infarct Sizes

国家“十一五”科技支撑计划项目(项目编号：2008BAI51B03)。

**作者简介：朱伟，男，硕士，研究方向：中药药理研究，E-mail:jzzw168@qq.com。

***通讯作者：陈兰英，女，博士，教授，研究方向：中药药效评价及作用机制研究，E-mail:cly2513@163.com。

R 285.5

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2013-07-20)