食物残渣STR分型破案1例

刘亚举，苏伟民

（1.许昌市公安局 刑事科学技术研究所，河南 许昌 461000；2.长葛市公安局 刑侦大队，河南 长葛461500）

1 案例

1.1 案情简要

2012年6月下旬至9月上旬，某辖区内先后发生多起入室盗窃案，受害人早上离家外出务工，晚上回家时发现家中被盗。勘验人员在不同的现场分别提取到1.7cm×2.1cm咀嚼过的油条食物残渣1份和咬嗑的瓜籽壳11粒，所有物证均在案发当天提取，第二天送至DNA室，受理后立即进行DNA检验。

1.2 DNA检验及结果

将油条食物残渣平均放入两支1.5mL离心管中，编为1号、2号检材；取8粒瓜籽壳也平均放入两支1.5mL离心管中，编为3号、4号检材。检材采用英国LGC公司AGOWA sbeadexⓇ磁珠法法医试剂盒进行手动DNA提取，具体步骤如下：（1）细胞裂解：在离心管内加入200μL裂解液FN和9μL PK（试剂盒自带，干粉状，加9mL纯水溶解混匀），漩涡震荡5S，65℃保温 30min。（2）磁珠结合 DNA：离心后取 190μL 上清液于新的离心管，同时加入380μL结合液FN和10μL磁珠，充分混匀溶液，室温放置2min（期间震荡数次），将离心管置于磁力架上，1min后吸去液体。（3）洗涤：加300μL洗液FN1，震荡混匀，室温放置5min（期间震荡数次），置于磁力架上，1min后吸去液体；再加300μL洗液FN2，重复上述步骤；最后加300μL纯水，再重复上述步骤。（4）洗脱DNA：加60μL洗脱液FN，充分混匀溶液，62℃温浴10min（期间震荡数次），震荡后速置于磁力架上，3min后吸取50μL DNA溶液备检。

按照Identifiler试剂盒说明书配制PCR反应液，其中取反应液混合物6μL和上述模板DNA4μL在9700型扩增仪上标准程序进行复合扩增。扩增产物在3500XL型遗传分析仪上检测，用GeneMapper IDX软件进行STR分型。结果显示，1～4号检材均未得到完整STR分型。于是将1号、2号油条食物残渣DNA溶液合并于Microcon-100柱管中，3号、4号瓜籽壳DNA溶液合并于另外一个Microcon-100柱管中，其中Microcon-100柱管为斜底面，型号30K。然后在Eppendorf冷冻离心机上先14 000rpm离心30min，最后再1 000rpm离心10min，分别得到浓缩DNA溶液15μL左右。将浓缩后的DNA溶液仍按上述方法扩增检测，最终得到完整DNA分型（见图1）。

1.3 DNA数据库比对

将STR分型结果录入至本市DNA数据库系统后，与江苏一现场物证串并，并比中2010年9月安徽省某市检验入库的违法人员姚某（男性，19岁，系本报道发案地居民）。抓获姚某后，供述了上述等多起入室盗窃案件。

2 讨论

由于口腔黏膜上皮细胞具有代谢旺盛、易脱落等特点，在外力作用下可以遗留在相应的载体上，当承载体和外部接触后，由于环境的影响，这些检材就会有不同程度的DNA降解和混合大量不同种类的抑制剂，导致DNA提取和PCR扩增失败，继而得不到完整STR分型结果，给后期的分析带来困难，因此去除PCR抑制剂和样品DNA回收量是成功的关键。

磁珠法核酸纯化技术是利用强永磁体以确保DNA进行有效分离，省略了离心和苯酚等有机溶剂提取步骤。LGC公司AGOWA sbeadexⓇ法医试剂盒的磁珠呈咖啡色，颗粒微小，具有小尺寸效应和表面效应，无沉淀易于分散，其磁粒是被修饰过的超顺性粒子，可以对小的或大的DNA片段进行有效地、高质量地纯化；非极性的结合缓冲溶液改变DNA的周围存在环境，驱使极性的DNA特异性结合到极性的磁珠表面，适量的磁珠，偶联得到的DNA产量和质量高；经过两种洗液和纯水洗涤增强了去除抑制剂的作用，洗涤过程中无需干燥即可洗脱，节省了操作时间，60μL洗脱液溶解的DNA半定量效果好，并能对产量进行均一化，使下游的扩增检测得到的STR峰型尖锐清晰、均衡性好，无非特异性产物。该试剂盒不仅可以手动操作，而且也可以在自动化设备上使用[1]，适用于法医现场各类检材。在本案中，为了保证检材被裂解液充分浸没，故将每份检材分成2份进行DNA提取，由于60μL的洗脱体积没有得到完整STR分型，于是将每同种检材的DNA溶液合并，并联合使用了斜底面（30K）的 Microcon-100柱[2]，没有额外变换DNA溶液成分，只是将多余水分过滤掉，集中了DNA溶液浓度，从而成功检出STR分型。

图1 A为油条食物残渣STR分型，B为咬嗑瓜籽壳STR分型

我国DNA数据库高速发展，库容丰富，实验室间联网运行，实现了资源共享，共同发展。该案的快速侦破也是得益于DNA数据库的发展成果，DNA数据库的快速发展也促进着实验室检验方法的提高，最终实现破案效益的最大化。

[1]孙大成，孙善永，姜曜恒，等.应用自动化工作站批量提取生物检材 DNA[J].法医学杂志，2011，27（1）：54-55.

[2]顾丽华，董研，张晨，等.浓缩DNA法结合miniSTR分型技术检验微量 DNA[J].法医学杂志，2010，26（5）：361-363.