HPLC法测定香砂平胃颗粒中厚朴酚及和厚朴酚的含量

北京市丰台区药品检验所（100071）吕峥峥

北京市医疗器械检验所（101111）王会如

香砂平胃颗粒由苍术（炒）、厚朴（姜炙）、陈皮、香附（醋炙）、甘草、砂仁六味药组成[1]。厚朴是我国传统的珍贵中药材。厚朴的提取物有抗菌作用，其抗菌活性成分为厚朴酚与和厚朴酚。厚朴在《中国药典》2010年版二部中对其含量采用HPLC法进行控制，而香砂平胃颗粒原标准只有性状及检查项，不利于质量控制。本实验建立HPLC法测定香砂平胃颗粒中厚朴酚、和厚朴酚的含量以完善质控体系。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 ①仪器：高效液相色谱仪：岛津LC-2010CHT；电子天平：梅特勒AG285；超声破清洗器：昆山KQ-300；紫外分光光度计：安捷伦8453。②试药：甲醇（色谱纯）；厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品由中国药品生物制品检定所提供。

1.2 试验方法

1.2.1 色谱条件 色谱柱为waters C18（250mm×4.6mm，5µm）；流动相：甲醇-水（75∶25）；检测坡长：294nm；流速：1.0mL/min；进样量10µL（对照品），20µL（供试品）；理论塔板数按厚朴酚峰值计算应不低于4000。

1.2.2 试验溶液的制备 ①对照品：取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL分别含10µg、12µg的溶液，即得。②供试品：取样品，研细，取约3g精密称定，置于具有塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，40Hz）20min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得。③阴性对照样品溶液的制备：取无厚朴药材的样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

2 结果与分析

2.1 系统适应性试验 取厚朴酚对照品、和厚朴酚对照品溶液10µL，供试品溶液、阴性对照溶液各20µL注入液相色谱仪，结果阴性对照溶液对测定无干扰（见附图1～3）

2.2 线性考察 按照上述对照品溶液的制备方法，制成厚朴酚对照品溶液（10.17µg/mL）、和厚朴酚对照品溶液（12.30µg/mL），吸取上述溶液3µL、5µL、10µL、15µL、20µL注入液相色谱仪。分别以厚朴酚、和厚朴酚进样量µg为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明厚朴酚、和厚朴酚进样量分别在0.0305µg～0.2034µg和0.0369µg～0.2460µg时与峰面积呈良好的线性关系。计算得回归方程：厚朴酚：Y=1.536×106-1.761×103，R=0.9999；和厚朴酚：Y=1.900×106-1.697×103，R=0.9999。

附图1 厚朴酚及和厚朴酚HPLC图

附图2 供试品HPLC图

附图3 阴性对照HPLC图

2.3 精密度试验 精密吸取厚朴酚、和厚朴酚对照品溶液10µL注入液相色谱仪中，测定峰面积，连续进样5次，厚朴酚、和厚朴酚对照品RSD分别为0.2%、0.1%，结果表明精密度良好。

2.4 稳定性试验 精密吸取同一批次供试品溶液20µL，按上述色谱条件分别于制备0、3、6、9h进样测定，结果表明样品在9h内稳定，厚朴酚、和厚朴酚RSD分别为0.8%、0.5%。

2.5 重现性试验 取同一批号（批号20110202），按“1.2.2中②”方法制成6份，测得厚朴酚、和厚朴酚总含量的平均值为104µg/g，RSD为0.9%。

2.6 加样回收试验 取本品研细，取3g，精密称定并加入厚朴酚对照液（15µg/mL）10mL、和厚朴酚（30µg/mL）5mL，70%甲醇25mL，同法制备5份，分别进样测定，测得厚朴酚、和厚朴酚平均回收率分别为97%、98%，RSD均为1.4%。

2.7 样品测定 按“1.2.2中②”分别对三个不同厂家的样品中厚朴酚、和厚朴酚的含量进行测定，结果见附表所示。根据样品含量测定结果，不同生产企业生产的香砂平胃颗粒中的厚朴酚、和厚朴酚含量相差较多，暂定本品1g含厚朴以厚朴酚（C18H18O2）、和厚朴酚（C18H18O2）的总量计，不得少于45µg。或本品每袋含厚朴以厚朴酚（C18H18O2）、和厚朴酚（C18H18O2）的总量计，不得少于0.45mg。

附表 三个不同厂家样品中厚朴酚及和厚朴酚的含量测定结果

3 讨论

3.1 采用《中国药典》2010年版一部厚朴项下方法[1]：甲醇-水（78∶22），为了达到分离度调整为甲醇-水（75∶25）。

3.2 通过比较溶剂50%甲醇、70%甲醇和稀乙醇，最好采用70%甲醇作为溶剂，可以得到好的峰形且较好过滤。

3.3 超声处理 考察10min、15min、20min、30min，最终选择20min处理供试品。