去白细胞悬浮红细胞与悬浮红细胞储存期内溶血率的比较

徐 忠，邱颖婕，龚裕春，金魏名，周筱嫣，陆 赟

（上海市血液中心 200051）

采用过滤方式去除血液中的白细胞，可有效预防某些输血后不良反应的发生，如非溶血性发热反应（NHFR）、白细胞抗原（HLA）同种免疫和巨细胞病毒（CMV）传播等［1］，因此去白细胞血液在国内、外采供血机构中已得到广泛的应用。但是，也有报道认为白细胞滤除过程可能会引起红细胞发生不能接受的溶血现象。目前国内对于去白细胞血液的白细胞清除率和红细胞回收率等质量要求研究较多，对血液的溶血率变化研究较少，而且国家标准也未对红细胞类制品的溶血率进行规定。因此，为了观察去白细胞悬浮红细胞在储存期内的溶血率变化，本文对使用去白细胞滤器血袋制备的去白细胞悬浮红细胞制品和从未经过滤全血中分离出的悬浮红细胞制品，取样检测储存期内红细胞溶血率，考核是否符合AABB标准和欧盟标准并进行比较分析，以期探讨白细胞过滤过程对于红细胞溶血率的影响。

1 资料与方法

1.1 材料 一次性使用200mL去白细胞滤器血袋（全血过滤）、一次性使用去白细胞滤器（悬浮红细胞过滤）、一次性使用普通四联血袋各40套。

1.2 去白细胞悬浮红细胞制备

1.2.1 悬浮红细胞过滤（以下简称去白1组） 应用一次性使用普通四联血袋采集ACD－B抗凝全血40袋（每袋200mL），采集后储存于（4±2）℃冰箱过夜。第2天3 820r／min离心20 min，去除上层血浆，添加 MAP制备成悬浮红细胞。在（4±2）℃环境中按照去白细胞滤器血袋操作规程进行过滤，滤后即成去白细胞悬浮红细胞。

1.2.2 全血过滤（以下简称去白2组） 应用一次性使用去白细胞滤器血袋采集ACD－B抗凝全血40袋（每袋200mL），采集后储存于（4±2）℃冰箱过夜。第2天在（4±2）℃环境中按照去白细胞滤器血袋操作规程进行全血过滤，滤后全血3 820 r／min离心20min，去除上层血浆，添加MAP制备成去白细胞悬浮红细胞。

1.3 悬浮红细胞制备（以下简称红悬组） 应用一次性使用普通四联血袋采集ACD－B抗凝全血40袋（每袋200mL），采集后储存于（4±2）℃冰箱过夜。第2天3 820r／min离心20 min，去除上层血浆，添加MAP制备成悬浮红细胞。

1.4 样品留取和检测 3组血液制备后置于（4±2）℃冰箱中储存，分别于第14、21、28、35天留取血液标本，用全自动血细胞计数仪（Beckman-Coulter AC-T diffⅡ）直接测定血红蛋白（Hb）和红细胞比容（Hct），用邻甲联苯胺法测定游离血红蛋白（FHb），计算两组的红细胞溶血率。红细胞溶血率（%）＝

1.5 统计学方法 用SPSS13.0软件处理数据，数据以x±s表示，采用t检验对数据进行统计分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

去白组游离血红蛋白绝对值和溶血率均高于同期红悬组，且去白1组与红悬组，去白2组与红悬组相比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。但两组不同方法过滤组（去白1组和去白2组比较）溶血率的差异无统计学意义（P＞0.05），详见表1、表2。红悬组和去白1、2组储存期末的溶血率均小于0.8%，符合欧洲标准和AABB标准。

表1 红悬组和去白组储存期上清液游离血红蛋白结果的比较（x±s，g／L）

表2 红悬组和去白组储存期溶血率结果的比较（%）

3 讨 论

由于去白细胞血液能降低多种输血不良反应的发生，许多发达国家采用血液全面白细胞去除（universal leukocyte-reduction，ULR）策略以提高血液安全［2］。但在临床应用时，有血站接到报告有去白细胞血液出现肉眼可见溶血现象，认为可能和血液过滤过程中红细胞机械性损伤有关，而加拿大学者Gyongyossy-Issa等认为白细胞滤除后，避免了白细胞死亡后细胞内水解酶的释放，降低了储存期内红细胞的溶血率［3］。由于红细胞溶血影响着输血的有效性和安全性，欧盟和AABB均规定以储存期末溶血率小于0.8%作为血液的溶血程度标准。去白细胞血液的溶血结果还受到献血者个体差异、过滤器类型、原始白细胞浓度、过滤时血液储存时间和过滤温度等因素的影响［4］。

实验结果表明，两种不同制备流程的去白组和红悬组在储存期间的红细胞溶血率均符合欧盟和AABB标准的要求（＜0.8%），两种不同制备流程过滤的去白组溶血率结果高于同期未过滤组（红悬组），但采用全血滤除白细胞和制备成悬浮红细胞后再滤除白细胞，二者溶血程度差异无统计学意义（P＞0.05）。采用悬浮红细胞过滤的方式，主要是为确保血站在6h内制备新鲜冰冻血浆的需求，但采用这种方式，需使用无菌连接器将去白细胞滤器与悬浮红细胞血袋连接，成本较高。采用全血直接滤除白细胞成本较低，其缺点是整个操作流程耗时较长，有部分血液无法制备成新鲜冰冻血浆（6h内无法制备完成）。以上两种滤除白细胞的模式，血站可以根据自己工作流程的需要，做相应选择。根据实验结果，作者认为过滤组同期溶血率较高的现象可能和过滤过程的机械挤压作用有关，但是过滤过程对于储存期间溶血变化影响很小，而且溶血结果对照国外标准都处于可以接受的范围内。

但是也要看到，有部分血液保存期末溶血率接近0.8%时，上清液的游离血红蛋白检测值已达到了2.1g／L左右。这种上清液的颜色较深，可能会引起用血医院关于血液溶血的投诉，因此在全面推行去白细胞悬浮红细胞时，一是要结合国外标准与医院做好宣教工作，二是制备后尽早发往临床，同时可建议临床适当缩短去白细胞悬浮红细胞的保存期，根据本文的实验数据，可建议临床尽量在28d内将去白细胞悬浮红细胞输注入患者体内，以更好地确保输血的有效性。

［1］ Beckman N，Sher G，Masse M，et al.Review of the quality monitoring methods used by countries using or implementing universal leukoreduction［J］.Transfus Med Rev，2004，18（1）：25-35.

［2］ Bassuni WY，Blajchman MA，Al-Moshary MA.Why implement universal leukoreduction？［J］.Hematol Oncol Stem Cell Ther，2008，1（2）：106-123.

［3］ Gyongyossy-Issa MI，Weiss SL，Sowemimo-Coker SO，et al.Prestorage leukoreduction and low-temperature filtration reduce hemolysis of stored red cell concentrates［J］.Transfusion，2005，45（1）：90-96.

［4］ Masse M.Universal leukoreduction of cellular and plasma components：process control and performance of the leukoreduction process［J］.Transfus Clin Biol，2001，8（3）：297-302.