党参多糖口服液对小鼠免疫功能的影响

晏永新，张 丽，贾海芳，江润蓓，方学锋，舒文林

(1．江西新世纪民星动物保健品有限公司，南昌 330096;2．江西出入境检验检疫局综合技术中心，南昌 330002)

党参具有补中益气，健脾益肺之功效，动物临床常用于畜禽脾胃虚弱，少食腹泻，肺虚咳喘，体倦无力，气虚垂脱。研究表明，党参多糖是党参的主要有效成分，具有免疫调节、消除自由基、造血、抗疲劳及提高动物生产性能等作用［1－2］。本公司以党参多糖为研究对象，开发了动物免疫增强剂党参多糖口服液，并通过测定小鼠免疫脏器指数、网状内皮系统吞噬功能、半数溶血值等指标的变化评价其对免疫系统的作用，为党参多糖口服液的生产和临床提供理论依据。

1 材料与方法

1．1 材料 试验动物:昆明种小鼠，雌雄兼备，体重18～22 g，由江西中医学院实验动物中心提供。试验药品:党参多糖口服液:由党参药材经过多糖提取浓缩等工艺制得，规格:100 mL/瓶，2 g生药，江西新世纪民星动物保健品有限公司提供，批号:20100501，试验前根据给药量适当浓缩;人参口服液，吉林省通化博祥药业有限公司，国药准字Z20075112，批号:20091201。试验器材:4号针头、723分光光度计、离心机(TLG－16型，江苏省金坛市医疗仪器厂)。试剂:印度墨汁，1%明胶液，0．1%Na2CO3;Alsever溶液(葡萄糖 2．05 g、柠檬酸钠 0．80 g、氯化钠0．42 g、蒸馏水100 mL，无菌过滤滤过);都氏试剂(碳酸氢钠 1．0 g、氰化钾 0．05 g、高铁氰化钾0．2 g、蒸馏水1000 mL);环磷酰胺;豚鼠血清(－20℃保存，临用时生理盐水1∶10稀释)。

1．2 方法

1．2．1 党参多糖口服液对小鼠网状内皮系统对血流中惰性炭粒的吞噬廓清能力的影响 参照文献［3］进行试验。

1．2．1．1 印度墨汁的配制 取印度墨汁，反复振摇至均匀，用1%明胶液稀释4倍供试验用。

1．2．1．2 试验分组及处理 取雄性小鼠50只，随机分为5组，每组10只，即空白对照组，阳性药物对照组(人参口服液5 g生药/kg)，党参多糖口服液高、中、低剂量组(分别为 9 g、7 g、5 g 生药/kg)。按0．2 mL/10 g体重灌胃给药，空白组给予等容量的生理盐水，每日1次，连续4 d，末次给药后24 h，于鼠尾静脉注入稀释的印度墨汁0．1 mL/10 g。于注入墨汁后30 s和6 min用特制取血吸管从小鼠眼眶后静脉丛取血 0．025 mL，立刻吹入 0．1%Na2CO3液2 mL中，吸管于该液中吸入、吹出数次，以充分洗出吸管壁附着之血液;取血完毕，以0．025 mL正常小鼠血溶于2mL 0．1%Na2CO3液校零，分光光度计(675 nm)测定吸光度。小鼠分别称体重后断头处死，摘出胸腺及脾称重，计算胸腺或脾指数、吞噬指数K及吞噬系数α。

式中:C为血中炭粒浓度，T为时间，W为体重，WLS为肝脾合重。

1．2．2 党参多糖口服液对绵羊红细胞所致小鼠溶血素抗体生成的影响 参照文献［3］进行试验。

1．2．2．1 绵羊红细胞(SRBC)悬液的制备 在无菌条件下，从健康成年绵羊外颈静脉取血，置于内盛有玻璃珠的灭菌锥形瓶中，摇动10min以除去纤维蛋白，加入相当于羊血体积2倍的Alsever溶液摇匀，置于4℃冰箱内保存备用。临用时取上述保存的羊红细胞，用生理盐水洗涤3次，每次1000～2000 r/min离心5 min，弃去上清液，用生理盐水以3∶5(V/V)稀释，使红细胞浓度为每毫升约20亿个。

1．2．2．2 免疫及给药 小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，每组10只，即空白组，阳性药物对照组(人参口服液5 g生药/kg)，党参多糖口服液高(9 g生药/kg)、中(7 g生药/kg)、低(5 g生药/kg)剂量组，各给药组灌胃给药，空白组给予相应体积量的生理盐水，每日1次，0．2 mL/10 g，连续8 d。各给药组于给药2 d后腹腔注射 SRBC悬液，0．2 mL/鼠，对照组同法用 SRBC免疫，于免疫后6日，眼眶取血进行溶血素测定。

1．2．2．3 溶血素测定 眼眶取血于离心管内，放置约1 h后，用长针将凝固血与管壁剥离，使血清充分渗出，2000 r/min－离心10 min，取血清，生理盐水稀释500倍后按表1设计进行实验，然后于37℃水浴中保温10 min，冰浴终止反应后2000 r/min离心10 min。取上清液1 mL、都氏试剂3 mL于试管内，同时取绵羊红细胞稀释液0．25 mL、都氏试剂4 mL于另一支试管内，充分摇匀，放置10 min，于540 nm处以对照管作空白，分别测定各管吸收度，按公式计算每只小鼠样品的半数溶血值HC50。

表1 溶血素测定方法

2 结果与分析

2．1 党参多糖口服液对小鼠网状内皮系统对血流中惰性炭粒的吞噬廓清能力的影响

2．1．1 党参多糖口服液对小鼠免疫器官指数的影响 从表2试验结果可以看出，党参多糖口服液各剂量组与空白组相比，胸腺指数无显著差异(P ＞0．05)，脾指数显著升高(P ＜0．05);与人参口服液组相比，胸腺指数没有显著差异，脾指数升高程度不及人参口服液。

表2 党参多糖口服液对小鼠免疫器官重量的影响(n=10)

2．1．2 党参多糖口服液对小鼠内皮系统吞噬功能的影响 结果见表3。参多糖口服液给药组与空白组相比，K值及α值均见显著增高，党参多糖口服液中剂量组的效果与阳性对照相当，说明党参多糖口服液可增强小鼠网状内皮系统吞噬功能。

表3 党参多糖口服液对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响(n=10)

2．2 党参多糖口服液对绵羊红细胞所致小鼠溶血素抗体生成的影响 从表4试验结果可以看出，党参多糖口服液各剂量组小鼠的HC50均显著高于空白对照组(P＜0．01)，且随剂量增加而升高。党参多糖口服液低剂量组效果即与人参口服液组相当，说明党参口服液能显著增强小鼠溶血素的生成。

表4 党参多糖口服液对小鼠溶血素水平的影响(n=10)

3 讨论

党参是我国传统的补益类中药，国内外对其都有研究，党参多糖是党参的主要有效成分之一。党参多糖对免疫系统的影响作用，国内学者已经开展了广泛的研究工作。杨光等［4］通过试验发现灌服党参多糖可以增强机体免疫应答，张晓军等［5］也通过试验证明党参多糖有免疫促进作用，并能促进脾脏代偿性造血功能。从本试验的结果来看，党参多糖口服液能显著增强小鼠网状内皮系统的吞噬功能，增加成年小鼠脾脏重量(P＜0．05);能显著提高小鼠半数溶血值HC50，提高小鼠的血清溶血素抗体生成水平(P＜0．05)，与相关文献报道基本相符。

根据研究和试验结果，我们可以认为党参多糖具有显著的免疫调节的作用，其免疫调节机理可能是与增强网状内皮系统吞噬功能，升高脾指数，以及增强溶血素的生成有关，需进一步深入研究。

［1］ 陈克克，王喆之．党参多糖的研究进展［J］．现代生物医学研究进展，2007，7(4):635 －637．

［2］ 许会军，潘永全．中药添加剂复方党参多糖散在肉仔鸡日粮中的应用效果［J］．中国饲料，1997，(4):17 －18．

［3］ 陈 奇．中药药理研究方法学［M］．第1版．北京:人民卫生出版社，1993:317．

［4］ 杨 光，李发胜，刘 辉，等．党参多糖对小鼠免疫功能的影响［J］．中药药理与临床，2005，21(4):39．

［5］ 张晓军，胡 黎，赖小平，等．党参多糖对小鼠免疫和造血功能的影响［J］．中药新药与临床，2003，14(3):174 －176．