丹参透明质酸凝胶混合物预防兔椎板切除术后硬膜外粘连的安全性研究

张晨阳，张 岩，梁文锴

椎板切除术后硬膜外粘连的发生会导致下腰椎手术失败综合征的出现，更增加了二次手术的风险性［1-4］，因此，有多种材料应用于预防椎板切除术后硬膜外粘连。本课题组经多次实验，将透明质酸与丹参粉末进行配比混合，形成一种新型的防硬膜外粘连材料，本研究对丹参透明质酸凝胶混合物预防兔椎板切除术后硬膜外粘连的安全性进行探讨。

1 材料和方法

1.1 实验动物及分组 新西兰兔24只，兔龄5个月左右，体质量约3 kg。由大同大学医学院实验动物中心提供，动物编号:SYXK(晋)2010-0002。将24只动物随机分为A、B、C、D 4组，每组6只。

1.2 实验用药 注射用透明质酸凝胶购自康德医药公司，规格:2 ml，批号:20120622E。丹参切片购自仁清堂药材公司，由大同大学药学院负责加工成粉末状，粉末颗粒大小＜10 μm。将丹参粉末和注射用透明质酸凝胶以50 mg∶2 ml的比例进行混合后分袋密封包装，钴60照射消毒后避光5℃保存备用。

1.3 方法 动物取俯卧位，麻醉后剔除术区背毛，连接体感诱发电位(CSEP)仪，刺入部位及参数设定均参考文献［5］，打开仪器进行第1次(麻醉后)电刺激，记录潜伏期值。术区消毒，行腰骶部正中切口，分离皮下组织并切开深筋膜，向两旁牵开肌肉软组织，暴露出腰5椎板后，行全椎板切除术，椎板切除面积为5 mm×8 mm。术区用生理盐水冲洗并压迫止血。此时进行第2次(椎板切除术后)电刺激，记录潜伏期值。A组在完成手术操作后直接缝合切口，B、C、D组分别在术区覆盖丹参透明质酸凝胶混合物 0．5、0．75、1.0 ml后缝合切口。关闭手术切口后麻醉苏醒前行第3次电刺激，记录潜伏期值。

1.4 观察指标

1.4.1 CSEP潜伏期值:每只动物共进行4次CSEP潜伏期值测定:除术中3次测定外，在术后6周相同麻醉条件下行第4次电刺激，记录潜伏期值。

1.4.2 运动功能评分:每只动物术前、术后第1天及术后6周进行3次运动功能评分，采用Tarlov评分标准［6］:0分:肢体全瘫痪;1分:后肢可水平划动;2分:后肢可以活动但不能负重;3分:后肢可负重和行走，但不稳;4分:后肢活动正常。

1.5 统计学方法 应用SPSS 17．0软件进行统计分析，CSEP潜伏期值以均数±标准差(±s)表示，多组间比较采用方差齐性检验和单因素方差分析;进一步进行组间两两比较，若方差齐，采用SNK检验;若方差不齐，则采用 Games-Howell检验。α=0.05为检验水准。

2 结果

2.1 CSEP潜伏期值 第1次CSEP测定，各组潜伏期值差异无统计学意义(P＞0.05);第2次测定各组潜伏期值均略有延长，但均＜10%，各组间差异无统计学意义(P＞0.05);第3次测定显示，A、B组潜伏期值均无明显延长，且两组间差异无统计学意义(P＞0.05)，但C、D组的潜伏期值均较前延长，且与 A、B两组相比，差异有统计学意义(P＜0.05);第4次测定显示，各组潜伏期值均处于正常值范围，且组间差异无统计学意义(P＞0.05)。详见表1。

表1 4组兔不同时点测定体感诱发电位潜伏期值结果比较( ± s，ms)

表1 4组兔不同时点测定体感诱发电位潜伏期值结果比较( ± s，ms)

注:A组在完成椎板切除术后直接缝合切口，B、C、D各组椎板切除术完毕分别在术区覆盖丹参透明质酸凝胶混合物0．5、0．75、1 ml后缝合切口;分别于麻醉后、椎板切除术后、闭合手术切口之后、术后6周进行第1、2、3、4次测定体感诱发电位潜伏期值;与A组比较，aP＜0．05，与B组比较，cP＜0．05

组别 兔数 第1次 第2次 第3次 第4次A 组 6 20．45 ±0．98 21．46 ±0．87 20．28 ±0．92 20．33 ±0．20．58 ±1．03 62 B 组 6 20．63 ±1．03 20．97 ±0．77 20．77 ±0．88 20．87 ±0．83 C 组 6 20．55 ±0．59 21．08 ±1．11 24．28 ±0．77ac20．99 ±0．66 D 组 6 20．19 ±0．83 21．57 ±1．17 26．07 ±1．24ac

2.2 运动功能评分 术前所有动物运动功能均正常(4分)，在术后第1天A、B两组运动功能评分同术前，C、D 两组运动功能评分下降至平均 2．5、2．3分，但在术后6周恢复正常(4分)。

3 讨论

椎板切除术是脊柱外科常用术式，由于手术创伤致局部血肿机化形成的瘢痕组织与硬脊膜发生粘连，最终导致下腰椎手术失败综合征的病例在临床并不少见［7-10］。因此预防硬膜外粘连的发生十分重要，最基本的方式是注意手术操作，减少创伤出血。除此之外就是多种生物材料的应用，如透明质酸［11］、生物蛋白胶、自体脂肪组织［12］，甚至还应用一些化学药物，如丝裂霉素［13-14］。

由于手术部位比较特殊，故应重点考虑材料的安全性。将生物材料填充或者是涂抹于硬脊膜之外，势必会对硬脊膜下的脊髓组织产生影响，这种影响需要应用某些先进的仪器设备及综合指标进行判断。CSEP仪通过电刺激胫后神经引发电传导，在头皮部位进行接收，来判断感觉传导通路是否正常，敏感性较高［15］。目前临床应用较为广泛，尤其在脊柱外科领域，CSEP仪检测手术操作极为灵敏，可将手术风险降低。有研究表明，在脊柱手术操作时，CSEP潜伏期值延长不超过10%，或者波幅不低于之前的50%，说明手术操作是安全的［16］。因此本实验应用CSEP仪，目的也是为了及时剔除因手术操作造成脊髓损伤的实验动物，降低误差，使得数据更具有客观性和准确性。不仅如此，还有学者应用CSEP仪来检测椎板切除术后硬膜外用药的安全性［13］。本实验也进行效仿，目的是为了检测本课题组研制的丹参透明质酸凝胶填充到术区硬脊膜外后的安全性，实验结果表明在应用剂量较小(0．5 ml)时，并不会对脊髓的电生理功能产生影响，其直接反应是CSEP潜伏期值没有延长;但当用药剂量加大到0．75、1.0 ml时，就对脊髓的电生理功能产生了影响，其直接反应就是CSEP潜伏期值的延长，且动物在术后第1天后肢的运动功能评分也下降了，说明用药剂量偏大，对脊髓组织造成了压迫。术后6周对动物再次进行CSEP测定及运动功能评分发现，不论是CSEP潜伏期值还是运动功能评分均恢复正常，可做出如下解释:C、D组尽管用药剂量较大，但随着时间的推移，药物在体内被代谢掉，对脊髓的压迫也逐渐解除。

本实验提示，在研发一种新的生物材料时，尤其是应用于脊柱、脊髓等特殊部位时，不仅要关注材料的体外效能，还要关注其某些物理学特性，以保证临床应用的安全性。

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