周细根,梁生林,胡存华,颜峰光 ,李庆耀,罗 婷,肖小梅
(井冈山大学医学院a.药理学教研室;b.2008级药学本科班,江西 吉安 343000)
樟树是中国一种常见的经济树种,其来源广泛,性温、味辛;能通窍辟秽、温中止痛,利湿杀虫;用于寒湿吐泻,胃腹疼痛;外用治疥、癣、龋齿作痛。樟树是提炼化工原料樟脑、樟脑油、芳樟醇最重要的原料树种[1]。为了探究樟树更多的药理作用,本实验对樟树子水提液的抗惊厥作用进行了研究。
健康小鼠60只(南昌大学医学院动物实验科学部提供),雌雄不限,体质量18~30 g。
新鲜樟树子(采自于井冈山大学校园内的樟树的成熟种子),0.05%地西泮溶液,生理盐水。
JTC-1型惊厥与痛觉实验交流电刺激器(成都仪器厂生产),天平,注射器,常规玻璃仪器等。
2.1.1 樟树子水提液的制备
称取新鲜樟树子200 g,洗净,捣碎,置于1000 mL蒸馏器中,加水浸泡2 h;连接索式提取器,加入400 mL蒸馏水直接加热蒸馏,回流2~3 h,收集水提液,过滤,浓缩至 20 mL(相当于含生药10 g·mL-1)[2]。再将浓缩液配置成高、中、低(10.0、7.5、5.0 g·mL-1)3个剂量的樟树子水提液。
2.1.2 地西泮溶液的制备
取0.05%地西泮溶液适量,用蒸馏水配成0.0005 g·mL-1。
将60只小鼠,按体质量分层、采用随机数字表法分为5组,每组12只,即生理盐水对照组(A组),地西泮溶液组(B组),高、中、低剂量樟树子水提液组(分别为C、D、E组)。每组小鼠均腹腔注射给予相应的实验药物,给药量均为 0.1 mL·(10 g)-1。用药前及用药后15、30、60 min测量小鼠惊厥阈值。
将JTC-1型惊厥与痛觉实验交流电刺激器输出线的鳄鱼夹尖端用生理盐水浸湿,2个夹子中的1个夹于小鼠双耳,另1个夹住下颌部。开启电源开关,输出电压调到30 V,刺激时间设为0.2 s,刺激周期设为单周期。按动“开始/停止”按键通电刺激,通电时观察小鼠是否发生惊厥 (小鼠的惊厥发生过程:僵直屈曲期→后肢伸直期→阵挛期→恢复期,以后肢强直作为惊厥的指标)。刺激后,若小鼠没有产生后肢强直惊厥,则应适当调大输出电压继续刺激,直至产生后肢强直惊厥,记录实验电压参数作为小鼠的惊厥阈值;对每只小鼠的惊厥阈值各测2次,每次间隔5 min,取其平均值为小鼠的惊厥阈值。
与A组比较,给药前各组惊厥阈值比较差异无统计学意义(P>0.05);B、C、D 组给药后 15、30、60 min与A组比较差异均有统计学意义(P<0.01或 P<0.05),E 组给药后 15、30、60 min 与 A 组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与自身给药前比较,A、E组给药后15、30、60 min差异均无统计学意义(P>0.05),B、C、D 组给药后 15、30、60 min 差异均有统计学意义(P<0.01 或 P<0.05),见表 1。
表1 各组给药前后惊厥阈值比较 ,U/V
表1 各组给药前后惊厥阈值比较 ,U/V
*P<0.01,**P<0.05 与 A 组比较;△P<0.01,△△P<0.05 与同组给药前比较。
组别 n 给药前 给药后15 min 30 min 60 min A 组 12 38.5±5.3 38.1±5.8 39.2±4.6 37.8±4.5 B 组 12 39.7±6.856.75±7.5﹡△ 60.6±6.4﹡△ 53.4±7.3﹡△C 组 12 37.6±4.3 52.1±6.1﹡△ 57.7±5.5﹡△ 59.2±6.6﹡△D 组 12 38.3±2.6 45.7±5.0﹡﹡△△ 48.6±4.4﹡﹡△△ 47.2±4.8﹡﹡△△E 组 12 39.1±3.9 38.7±6.2 40.3±4.1 39.30±5.8
为探讨樟树子是否具有抗惊厥作用,本实验采用电刺激法惊厥模型对樟树子水提液进行了抗惊厥作用的初步研究,实验结果显示,高剂量樟树子水提液明显提高电刺激法所致小鼠的惊厥阈值,与生理盐水对照组比较和自身给药前比较差异极显著,表明樟树子水提液具有明显的抗惊厥作用,为其进一步研究提供了初步的实验依据。其抗惊厥有效成分及作用机制有待于进一步研究[3]。
[1]肖姗美,罗小会,杨晓东.樟树叶挥发油B-环糊精包合物的制备研究[J].光谱实验室,2008,25(4):735-737.
[2]张炯炯,李功华,李跃军.樟树自然脱落叶挥发油提取工艺的研究[J].中华中医药学刊,2009,28(8):1651-1653.
[3]王莉,徐宁,孙娟,等.12种中药乙醇提取物抗惊厥作用和时间-体存生物当量的比较研究[J].中西医结合心脑血管病杂志,2010,8(4):460-462.