立地条件对昆仑雪菊品质的影响△

陈刚，帕丽达，朱军，樊丛照，吴明玉，李晓瑾*

(1.新疆中药民族药研究所，新疆 乌鲁木齐 830002；2.新疆农业大学医院， 新疆 乌鲁木齐 830052；3.新疆农业大学科学技术学院，新疆 乌鲁木齐 830052)

立地条件对昆仑雪菊品质的影响△

陈刚1，帕丽达2，朱军1，樊丛照1，吴明玉3，李晓瑾1*

(1.新疆中药民族药研究所，新疆 乌鲁木齐 830002；2.新疆农业大学医院， 新疆 乌鲁木齐 830052；3.新疆农业大学科学技术学院，新疆 乌鲁木齐 830052)

目的：探索栽培环境对昆仑雪菊品质的影响，以确定昆仑雪菊的道地性。方法：采用薄层色谱法对不同产地的昆仑雪菊总提物成分比对；采用分光光度法测定新疆不同产地昆仑雪菊中总黄酮的含量；采用浸泡法比对不同产地昆仑雪菊浸出液的色度。结果：在GF254预制硅胶板上，以乙酸乙酯∶甲醇∶水(8∶1∶1)为展开剂，证实不同产地昆仑雪菊成分构成基本相似，与金鸡菊有明显差异；不同产地昆仑雪菊总黄酮含量有明显的差异，含量分别为18.33%、27.05%、32.93%、24.57%、26.94%、17.33%、26.17%、20.47%、23.68%、17.49%、24.25%；不同产地昆仑雪菊浸泡6次后色泽变化有显著差异。结论：不同海拔及不同采收期与昆仑雪菊的品质具有相关性，提示昆仑雪菊具有产品道地性。

昆仑雪菊；两色金鸡菊；薄层色谱；总黄酮；色度

昆仑雪菊又名血菊，维吾尔名“古丽恰尔”，原植物系菊科Asteraceae/Compositae金鸡菊属CoreopsisLinn.两色金鸡菊CoreopsistinctoriaNutt.，一年生草本植物，分布于新疆和田地区海拔3000 m左右的昆仑山系[1]。具有清热解毒﹑活血化瘀﹑和胃健脾等功效，花亦可当茶饮用，用于治疗燥热烦渴、高血压、心慌、胃肠不适、食欲不振、痢疾及疮疖肿毒等疾病，是维吾尔医习用药材之一[2-4]。

昆仑雪菊中富含挥发油、总皂苷、氨基酸、多糖、黄酮类物质[5-9]，可抗病原体，增强毛细血管抵抗力。目前，已从昆仑雪菊挥发油中鉴定出20余类天然成分，其中包括芳香类、醇类、酚类、萜类、黄酮类、烯类和烷烃化合物，这些均是与降血压、降血脂、调节血糖、抗肿瘤及抗衰老相关药物的重要成分。市场近年对昆仑雪菊需求量剧增，其野生产量稀少，价格逐年上升(每公斤约2000元)。为满足市场需要，扩大药源，目前全疆各地纷纷引种栽培，由于产地、野生、栽培方法等均会影响药材的质量，研究产地对昆仑雪菊品质的影响，具有十分重要的意义。本文通过收集新疆12个产地的昆仑雪菊，进行薄层分析、总黄酮含量测定、浸出液色度的平行测试，探讨立地条件与昆仑雪菊品质的关系，为建立昆仑雪菊质量评价体系提供科学依据。

1 材料

1.1 样品

昆仑雪菊样品(见表1)由新疆中药民族药研究所提供，经王果平副研究员鉴定为菊科Asteraceae/Compositae金鸡菊属CoreopsisLinn.草本植物两色金鸡菊CoreopsistinctoriaNutt.的头状花序。

表1 昆仑雪菊的样品

1.2 试剂

芦丁对照品(批号：100080-200707，中国药品生物制品检定所)，GF254预制硅胶板，95%乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、三氯化铝等均为分析纯。

1.3 仪器

紫外光谱仪，电子分析天平(AB265-S，METTLER TOLEDO)，电子天平(SL602，上海民桥精密科学仪器有限公司)，数控超声波清洗器((KQ5200DA型，昆山市超声仪器有限公司)，电热恒温水浴锅(DZKW，北京市永光明医疗仪器厂)，旋转蒸发仪(TC-N-1100D-W(WD)，北京同德创业技术有限公司)，台式干燥箱(DGB/20-002，重庆试验设备厂)；冷凝管；圆底烧瓶；橡胶管；铁架台；定量毛细管等。

2 方法

2.1 样品处理

样品置于60 ℃烘箱中干燥，用粉碎机粉碎至40目后备用。分别称取样品5.0 g，加70%乙醇50 mL浸泡2 h，水浴回流提取，加热至微沸，提取3次，每次1.5 h。醇提过滤后的滤渣加50 mL蒸馏水，水浴回流提取，加热至微沸，提取3次，每次1.5 h。合并提取液，用旋转蒸发仪蒸干，残渣加甲醇1 mL溶解，摇匀，静置，取上清液作为供试品溶液。

2.2 薄层鉴别

吸取各样品试液1.0 μL，分别点样于同一GF254预制硅胶板，以乙酸乙酯∶甲醇∶水(8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷5%三氯化铝乙醇溶液，显色，热风吹干，置紫外灯光(254 nm 和365 nm)下检视。

2.3 浸出液色度对比

分别称取样品1 g，加50 mL开水浸泡5 min，重复浸泡6次，观察浸出液的颜色变化。

2.4 总黄酮含量的测定

2.4.1 供试样品制备 分别取样品5 g，加95%乙醇50 mL，用水浴回流提取，温度为80 ℃，分别提取3次，每次1.5 h，转移提取液至250 mL容量瓶，定容，从中取10 mL溶液置50 mL容量瓶，定容，即为样品溶液。

2.4.2 标准曲线的绘制 芦丁对照品120℃干燥至恒重，精密称取106.7 mg，置100 mL容量瓶，加适量甲醇，加热溶解，冷却，加甲醇定容，摇匀，即得浓度为1.067 mg·mL-1的芦丁标准品溶液。取标准液0.0、0.5、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL分别加入到25 mL容量瓶中，加水至6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加10%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加4%氢氧化钠溶液10 mL，水定容，摇匀，静置15 min，在波长510 nm处测定吸光度值，以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标，建立回归方程。

2.4.3 黄酮定性反应 分别取供试样品少量，经盐酸-镁粉反应、浓氨水反应、枸橼酸丙酮、氢氧化钠、三氯化铁、磷钼酸等试验检验。

2.3.4 样品总黄酮含量的测定 精密吸取不同产地干燥的昆仑雪菊样品溶液1.0 mL，加蒸馏水至6 mL，以不加样品溶液为空白，在波长510 nm处测定吸光度，平行测定3次，计算出不同产地雪菊中总黄酮的含量平均值。

3 结果

3.1 薄层鉴别

以皮山县的昆仑雪菊作为对照，结果表明同产地昆仑雪菊成分构成基本相似，与金鸡菊有明显差异(见图1，图中样品编号对应表1编号，下同)。

A.为紫外灯365 nm下检视图 B.为紫外灯254 nm下检视图图1 不同产地昆仑雪菊的TLC鉴别图

3.2 浸出液色度

观察不同产地昆仑雪菊浸泡6次后色泽变化(见图2)，结果显示传统民丰高海拔产地的雪菊色度与特有的清新甜香味明显与其他产地的雪菊有区别，表明立地因子对昆仑雪菊的茶饮品质有的影响(见表2)。

图2 不同产地昆仑雪菊浸泡6次后色泽变化比较

编号产地名称昆仑雪菊浸泡后溶液色度比较第1次第2次第3次第4次第5次第6次1皮山+++++++++++++++2策勒平原+++++++++++-3民丰平原++++++++++++-4民丰山区+++++++++++++++7于田+++++++++-8阜康++++++++++++++10喀什++++++++++++++++11伊犁那拉提+++++++++++++-

注：表中+++++ 表示溶液颜色较深，++++ 表示溶液颜色深，+++ 表示溶液颜色浅，++ 表示溶液颜色较浅，+表示溶液颜色非常浅，-表示溶液无颜色

3.3 总黄酮含量的测定

3.3.1 标准曲线的绘制结果 回归方程Y=0.011 1X+0.010 3，r=0.999 4。确定浓度21.340～59.752 μg·mL-1范围与吸光度呈线性关系(见图3)。

图3 芦丁标准品溶液的标准曲线

3.3.2 黄酮定性反应结果 经盐酸-镁粉反应、浓氨水反应、枸橼酸丙酮、氢氧化钠、三氯化铁、磷钼酸等试验检验，反应呈阳性，证明了提取液中含有黄酮类物质。

3.3.3 样品总黄酮含量测定结果 不同产地雪菊中总黄酮的含量如图4所示，不同产地的雪菊中黄酮含量具有显著的差异，其中编号为4号的民丰县地产雪菊中总黄酮含量最高，其海拔为2 450 m，年平均气温10.5 ℃，年平均降水量30 mm。根据民丰县4份雪菊样品的总黄酮含量测定结果，高海拔雪菊黄酮含量较高；同一海拔高度，采收期亦对雪菊的总黄酮含量有一定的影响。

图4 不同产地雪菊中总黄酮的含量的比较

4 讨论

薄层色谱鉴别过程中试用2010版《中国药典》所载展开系统展开，在展开剂的选择中，本实验分别对比了不同极性的展开剂及不同的展开剂比例，结果表明以乙酸乙酯∶甲醇∶水(8∶1∶1)为展开剂的展开效果最佳，于可见光下检视，能清晰的看到斑点。文献一般采用三氯甲烷、丙酮石油醚等作为展开剂，本实验也尝试了上述展开剂，结果表明斑点不清晰，分离效果不明显。因此，本研究最终采用上述展开剂，斑点清晰，分离效果好。通过图1可见，1号～11号样品斑点对应较整齐，12号样品的斑点与其他样品斑点不同。以1号样品作为对照，1号～11样品所含化学成分差异不大；而12号样品的化学成分与1号～11样品所含化学成分有明显的差异，其原因可能是1号～11样品与12号不属于同种药材，其化学成分不同。实验表明，薄层分析方法适宜于做昆仑雪菊的鉴别。

昆仑雪菊为当地维吾尔族有保健作用的茶饮，不同产地雪菊浸出液色度试验表明：不同产地雪菊的色度与气味有显著不同，提示昆仑雪菊的品质与产地有直接的相关性，具有道地性特质。试验表明雪菊的色度与气味变化具有明显的一致性，基于此，虽气味亦是评价茶饮品质的重要指标之一，但表述标准化困难，因此，本文仅选择了色度变化为评价雪菊品质的指标之一。

在黄酮含量试验中曾选用60%、85%、95%乙醇和甲醇等4种溶剂提取总黄酮，结果表明95%乙醇提取液澄明度好，吸收值较高，故实验中采用95%乙醇为溶剂进行提取。此外，黄酮含量测定结果显示编号为4号的民丰山区地产雪菊总黄酮含量最高，与其水浸液色度实验结果高度一致，提示其他化学成分亦有别于其他产地的雪菊。

本次试验选择海拔、年平均降水量、年平均气温、采收期等4个立地因子，研究其对昆仑雪菊总黄酮含量的影响。不同海拔和不同采收期对总黄酮含量有一定的影响，年平均气温和年平均降水量对总黄酮含量的影响不明显。是否还存在其他立地因子影响雪菊内在品质，需进一步探究。

[1] 新疆植物志编辑委员会.新疆植物志(第5卷)[M].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：93.

[2] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志.七十五卷[M].科学技术出版社，1979.365.

[3] 木合不力·阿不力孜，张兰，张敏，等.昆仑雪菊中氨基酸含量的分析[J].医药导报，2011，30(4)：431-432.

[4] 梁淑红，庞市宾，等.金鸡菊提取物降血脂作用的动物试验研究[J].农垦医学，2009，31(6)：234-235.

[5] 张彦丽，韩艳春，阿依吐伦·斯马义，等.GC-MS对昆仑雪菊挥发油成分的研究[J].新疆医科大大学学报，2010：33(11)：1299-1300.

[6] 张彦丽，韩艳春，阿依吐伦·斯马义，等.分光光度法测定维吾尔药昆仑雪菊中总皂苷的含量[J].西北药学杂志，2011，26(2)：87-88.

[7] 木合布力·阿布力孜，张兰，张敏，等.昆仑雪菊中氨基酸的含量分析[J].医药导报，2011，30(4)：431-432.

[8] 张彦丽，阿布都热合曼·合力力，阿依吐伦·斯马义，等.苯酚-硫酸法测定维吾尔药昆仑雪菊多糖含量的研究[J].药物分析杂志，2010，30(11)：2205-2207.

[9] 木合不力·阿不力孜，张燕，毛新民，等.新疆昆仑雪菊化学成分的初步定性研究[J].新疆医科大学学报，2010，33(6)：628-630.

EffectofSiteConditiononQualityofKunlunSnowChrysanthemum

CHEN Gang1，Palida2，HU Jun1，FAN Cong-zhao1，WU Ming-yu3，LI Xiao-jin1*

(1.XinjiangInstituteofChinesematerialmedicalEthicalmaterialmedical，Urumqi830002，China; 2.HospitalofXinjiangagriculturaluniversity，Urumqi830000，China; 3.CouegeofScienleandTechnologyXinjiangagriculturaluniversity，Urumqi830000，China)

Objective：To explore the effects of cultivation environment on Kunlun snow chrysanthemum quality and ensure the genuineness of Kunlun snow chrysanthemum.Methods：Thin layer chromatography method was used to campare total extract component in different areas of Kunlun snow chrysanthemum.The total flavonoids in Kunlun snow chrysanthemum from different areas of Xinjiang were determined by spectrophotometry.Soaking chroma of Kunlun snow chrysanthemum was compared by the water immersion method.Results：In GF254 preformed silica gel plate，by using ethyl acetate∶methanol∶water(8∶1∶1)as developing agent，we confirmed the components of Kunlun snow chrysanthemum from different areas are similar，which were obvious different withCoreopsisdrummondii.Total flavonoids were obvious different in different areas，their contents：18.33%，27.05%，32.93%，24.57%，26.94%，17.33%，26.17%，20.47%，23.68%，17.49%，24.25%.The color is significant different in different areas after 6 times water immersion.Conclusion：Different altitudes and harvest times are related with quality of Kunlun snow chrysanthemum，shows the geoherbalism of Kunlun snow chrysanthemum.

Kunlun snow chrysanthemum;CoreopsistinctoriaNutt.; Thin layer chromatography; Total flavonoids; Chroma

2013-05-24)

新疆维吾尔自治区科技重大专项(201130105-1)

*

李晓瑾，研究员，研究方向：中药资源，E-mail：xjlxj@126.com