犬黄曲霉素B1中毒对肝肾功能指标的影响

和秀芳 （云南省香格里拉县动物卫生检疫监督所 674400）

徐文必 （云南省宣威市格宜镇畜牧兽医站）

李海昌 张 佳 王生奎 肖 啸 （云南农业大学动物科学技术学院 云南 昆明）

黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物，特曲霉也能产生黄曲霉毒素，但产量较少.产生的黄曲霉毒素主要有B1,B2,G1,G2以及另外两种代谢产物M1,M2。1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物, 是一种毒性极强的剧毒物质.黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡.在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见，其毒性和致癌性也最强[1]。食物污染可发生于植物生长期或收割后储存或加工过程中。黄曲霉毒素(AFB1)主要在细胞色素作用下转化为具有细胞毒性的亲电子和芳基化代谢产物，特别是AFB1有害的8,9-环氧化物快速生成通过耗竭细胞内GSH而损伤肝细胞脱毒作用。肝细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)的耗竭不仅损伤AFB1的脱毒作用，还可通过环氧化物介导的直接损伤而引起继发性氧化损伤。聚积的AFB1与细胞酶、蛋白质和DNA进行不可逆结合，从而损伤代谢、基因转录和蛋白质合成[2]。另外，在几个物种还发现了致肝癌作用。不同物种对黄曲霉毒素敏感性不同，以犬敏感性为高，犬对黄曲霉毒素所致的急性和亚急性肝病可能反映了其肝细胞GSH浓度较低，以及GSH-S-转移酶的个体间差异[3]。不同动物对黄曲霉毒素B1敏感性不同，以犬敏感性为高。在犬上关于黄曲霉中毒的报道很少，仅有仝宗喜[4]2010年《养犬》和董翠莲[5]2012在上海畜牧兽医通讯上发表的《霉菌毒素中毒对犬肝肾功能的影响》发表过两篇关于玉米霉菌毒素对犬的危害和防治措施的文章。黄曲霉毒素主要损害的是犬的肝脏及肾脏，可以通过对比健康犬和中毒犬血液中谷丙转氨酶，谷草转氨酶，碱性磷酸酶，尿素氮，肌酐，尿酸等生理生化指标的变化规律，评价黄曲霉毒素对犬肝脏及肾脏功能的影响，进而得出黄曲霉毒素对犬的危害，为防止及治疗犬黄曲霉毒素中毒提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验动物 选20只饲喂过金标试纸检测黄曲霉素B1阳性的麦麸和玉米面犬，根据临床症状的明显程度分为中度中毒组、重度中毒组每组10只；另选 10只健康犬作为对照组。

1.1.2 试验仪器及试剂 离心沉淀器(上海手术器械厂磁极牌，80-2型)，全自动生化分析仪(迈瑞公司，序列号XA-16000600)，黄曲霉素快速检测试纸卡(上海快灵生物科技有限公司，生产批号6110816314)。

1.2 试验方法

1.2.1 试验分组 选择10只未饲喂过玉米糠麸饲料临床无中毒症状的健康犬作为对照组，分别编号为1～10号；病犬根据临床症状进行分组，将10只有玉米糠麸饲料饲喂史，出现精神萎靡，呕吐，腹泻等中度中毒症状的犬作为中度中毒组，分别编号为11～20号；将10只有玉米糠麸饲料饲喂史，出现精神极度沉郁，腹泻便血，呕吐物中带血丝，小便赤黄，黄疸，腹水等重度中毒症状的犬只作为重度中毒组，分别标号为21～30号。

1.2.2 采集饲料做检测 对中毒犬只的饲料进行采集，用黄曲霉毒素快速检测试纸卡对中毒犬只的饲料经行检测。取5g以上有代表性的饲料样品磨碎，准确称取2g均匀粉末试样加入到离心管中，向离心管中准确加入2ml纯水和乙酸乙酯8ml，将瓶盖密封，放入离心机中离心。以3000r/min离心2min，取上2ml清液，吹干滤液，参照表格，根据残留限量取相应体积稀释液复溶杯底固体，此溶解液为检测液，滴入黄曲霉素快速检测试纸卡。经检测中毒犬只所食用的玉米糠麸为被黄曲霉毒素B1污染的饲料，检测成阳性。试纸卡是利用特定的抗原抗体反应原理，采用实现包被的特异性抗体捕捉检测对象中的对黄曲霉毒素成分，进而通过观察测试线和控制线的显色反应来达到判定检测对象中的黄曲霉毒素污染程度的目的。

图1 阴性

图2 阳性

测试结果如图所示，左边的为阴性，右边的为中毒犬只玉米糠麸饲料的检测结果，为阳性。

1.2.3 血样的采集和处理 采用前臂内静脉采血法，每只犬采血3ml，所采血样放入负压储血管保存，放入离心机中离心，以3000r/min离心2min，分离血清，取上层血清移入各试剂杯中(最少取0.5ml血清易检测)，用全自动生化分析仪检测。

1.2.4 检测指标 待测血清做生化指标检测，主要检测谷丙转氨酶，谷草转氨酶，碱性磷酸酶，尿素氮，肌酐，尿酸。

1.2.5 数据分析 使用SPSS统计软件对数据进行处理，全部数据采用平均值对比和F检验与q检验，结果用均数±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 各组犬血液生化指示

见表1。

表1 各组犬血液生化指标平均数比较

由表1可知犬在黄曲霉毒素中毒后血液中谷丙转氨酶，谷草转氨酶，碱性磷酸酶，尿素氮，肌酐，尿酸均有不同程度的升高。说明，黄曲霉毒素会对犬的肝脏以及肾脏的功能产生影响。

2.1 各组生化指标的比较结果

见表2。

由表2可知，谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、尿素氮4项指标3组之间均差异极显著(P<0.01)，对于肌酐，中度中毒组与重度中毒组之间差异不显著(P≥0.05)，两组与对照组均有显著差异(P<0.05)，对于尿酸，中度中毒组与重度中毒组之间差异不显著(P≥0.05)，两组与对照组均有显著差异(P<0.05)。

表2 各生化指标分析

3 讨论

试验结果表明，犬黄曲霉毒素B1中毒后，肝肾功能均受到较大的影响，影响程度与中毒程度有关。黄曲霉毒素B1主要损害肝脏，表现为肝细胞核肿胀、脂肪变性、出血、坏死及胆管上皮、纤维组织增生。同时肾脏也可受损害，主要表现为肾曲小管上皮细胞变性、坏死，有管型形成。谷丙转氨酶，谷草转氨酶和碱性磷酸酶是大多存在于肝细胞内，肝脏是毒素的靶器官,当黄曲霉毒素倾入机体，经胃肠道吸收进入门脉血液，黄曲霉毒素(AFB1)主要在细胞色素P450(CYP450)作用下转化为具有细胞毒性的亲电子和芳基化代谢产物，特别是AFB1有害的8,9-环氧化物快速生成通过耗竭细胞内GSH而损伤肝细胞脱毒作用造成肝脏的损伤，中毒畜禽的肝细胞发生严重颗粒变性、脂肪变性、水泡变性、透明变性，这三种酶因此升高。而尿素氮，是哺乳动物蛋白质在肝脏里分解代谢的最终产物尿素中的氮，由肾脏排出体外，当肝肾受到黄曲霉毒素B1的侵害时，肾小球损伤，导致肾小球滤过率降低，动物体内的尿素氮排不出体外，尿酸也是相同，因此造成体内尿素氮的升高和尿酸的升高。肌酐一般很少像尿素氮一样受诸多因素影响，使得结果不准确，所以肌酐检测肾脏疾病比尿酸更为好。肌酐主要由肾小管滤过，肾小管不在重吸收，再从尿中排出，根据国际肾脏关注协会把犬猫肾病和肾衰竭根据肌酐多少分为了四个阶段，而犬黄曲霉素B1中毒的肌酐属于肾病和肾衰竭的第一阶段[6]。而且根据数据的出黄曲霉素B1对肝脏的损伤大于对肾脏的损伤。

4 结论

（1）犬黄曲霉素B1中毒导致急慢性肝炎、中毒性肝炎，肝实质受到损害，肾功能衰竭，肝肾功能受到严重损伤，随着中毒程度的不同，所测各项指标间有明显差异。（2）犬黄曲霉素B1中毒的治疗原则以保肝护肾为主，并根据临床症状对症治疗。黄曲霉素B1中毒对犬肝肾功能影响极大，且治愈率较低，有严重后遗症。因此防止犬黄曲霉毒素B1中毒应以预防和控制为主，注意饲料的安全性，选用来源好的原材料；必要时在饲料中适量添加质量较好的脱霉剂和防霉剂；在饲料中添加益生菌、微量元素和维生素，增强机体免疫力，缓解黄曲霉毒素对动物的危害[7]。

[1]舒晓燕.饲料中霉菌毒素的危害及控制[J].畜牧业, 2005, 4(11):60-61.

[2]汪小舟, 祝阳.黄曲霉素的毒害及防除[J].现代食品科技, 2005(2): 2.

[3]贺星亮, 李刚, 朱玉.犬黄曲霉毒素中毒[J].中国工作犬业 2008 (9).

[4]仝宗喜, 张广强, 霍磊.玉米霉菌毒素对犬的危害和防治措施[J].养犬, 2010 (1): 13-14

[5]董翠莲, 肖啸.霉菌毒素中毒对犬肝肾功能的影响[J].上海畜牧兽医通讯, 2012(2): 42-43

[6]周桂兰, 高得仪(主编).犬猫疾病实验室检验与诊断手册[M].北京: 中国农业出版社, 2010.

[7]谷子林, 李素敏, 刘亚娟.饲料霉菌毒素对家兔的危害及其调控研究[A].河北农业大学动物科技学院.2008.432-433