“切脾”，“保脾”对门脉高压症大鼠胃底黏膜上皮细胞凋亡的影响

侯 杰 罗 兰 刘伟新 曲义坤 (佳木斯大学附属第一医院普外二科，黑龙江 佳木斯 154002)

细胞凋亡是由体内外因素触发细胞内预存的死亡程序而导致的基因控制的细胞自杀过程〔1〕。Bcl-2基因编码26 kD的Bcl-2蛋白，Bax基因编码21 kD的Bax蛋白，当受到细胞内外的各种刺激后，二者之间的动态平衡决定着细胞的存活，Bcl-2蛋白表达增高，Bcl-2/Bax比例增加，抑制细胞凋亡;Bax蛋白表达增高，Bcl-2/Bax比例下降，则促进细胞凋亡〔2〕。手术、应激、非甾体抗炎药(NSAIDs)、乙醇、幽门螺杆菌(HP)感染等侵袭因素均可使胃黏膜细胞凋亡增加，导致黏膜损伤〔3〕。因此，采用何种术式更能减轻对胃肠道黏膜的损伤显得尤为重要。本文拟从分子生物学水平观察脾脏切除和保留正常脾脏1/3的脾次全切除术对胃底黏膜上皮细胞凋亡的影响及Bax、Bcl-2表达的变化，选择一种对胃底黏膜上皮细胞损伤相对较小的术式，以期尽量减轻或减少PHG压性胃病的发生，降低呕血的发生率。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择健康雄性Wistar大鼠110只，约5～6月龄，体重200～300 g，采用四氯化碳(CCl4)试剂诱导制造肝硬化门脉高压症(PHT)大鼠模型，将肝硬化PHT大鼠重新分笼、编号。

1.2 方法 随机分组:①正常对照组;②假手术组;③保留约正常脾脏1/3大小的脾次全切除术组;④全脾切除术组。采用末端转移酶(TdT)介导的X-dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡，电镜下观察凋亡细胞形态，免疫组化法检测Bcl-2蛋白、Bax蛋白的表达。

1.3 统计学方法 应用SPSS13.0软件分析，数据资料以±s表示，组间比较用独立样本的t检验，组内比较用方差分析。

2 结果

本实验采用CCl4造成大鼠肝硬化PHT模型，动态观测大鼠“切脾”、“保脾”术后(1 w，2 w，3 w)肝脏细胞凋亡指数，Bcl-2、Bax等指标的变化。经观察发现，假手术组术后4 w内死亡3只，存活27只;全脾切除术组死亡15只，存活15只;脾次全切除术组死亡8只，存活22只。见表1～表3。

表1 各组胃底黏膜细胞凋亡细胞率的比较(±s)

表1 各组胃底黏膜细胞凋亡细胞率的比较(±s)

与正常对照组比较:1)P＜0.05;与假手术组及脾次全切除术组比较:2)P＜0.01;下表同

组别 n 20 3.713±0.545 3.713±0.545 3.713±0.545假手术组 27 4.671±0.4491) 4.903±0.8041) 5.232±0.7331)脾次全切除术组22 4.989±0.7331) 5.674±1.0841) 6.074±0.7701)全脾切除组 15 5.648±0.9221)2)7.037±1.1771)2)7.767±1.0081)2)1 w 2 w 3 w正常对照组

表2 免疫组化法检测Bax蛋白的表达(±s)

表2 免疫组化法检测Bax蛋白的表达(±s)

组别 n 20 1.259±0.174 1.259±0.174 1.259±0.174假手术组 27 6.424±0.8772) 6.866±0.8222) 7.342±0.7391)脾次全切除术组22 6.692±0.7322) 7.156±0.8012) 7.502±0.7252)全脾切除术组 15 7.584±1.4612) 8.011±1.3251) 8.700±1.1052)1 w 2 w 3 w正常对照组

表3 免疫组化法检测Bcl-2蛋白的表达(±s)

表3 免疫组化法检测Bcl-2蛋白的表达(±s)

组别 n 20 2.980±3.580 2.980±3.580 2.980±3.580假手术组 27 7.918±0.5322)7.312±0.4942)6.995±0.5422)脾次全切除术组 22 7.839±0.4402)7.200±0.4872)6.865±0.5352)全脾切除术组 15 6.281±0.6292)5.845±0.5762)5.845±0.5762)1 w 2 w 3 w正常对照组

3 讨论

本研究证实了不同术式可以影响细胞凋亡的调节基因，从而进一步引发细胞凋亡的发生。实验结果表明，“切脾”术后，胃底黏膜细胞凋亡指数、Bcl-2、Bax表达与“保脾”术后比较有显著性差异(P＜0.05)。保留约正常脾脏1/3大小的脾次全切除术更能减低胃底黏膜细胞的凋亡，减轻对胃底黏膜细胞的损害。减轻或减少PHG的发生，降低呕血的发生率，具有重大意义，可以推广到临床。本实验以肝硬化PHT大鼠为研究对象，以脾次全切除、脾切除为处理因素，与临床研究相比有明显优点:①避免了临床研究中出现的肝硬化程度不一。②排除人体其他基础疾病对实验的干扰。③避免了人为的一些客观因素，如治疗措施、情绪、不同环境的干扰。④手术操作相对简单，出血量少。既往的研究发现，脾次全切除术既能降低肝硬化后的门静脉高压，改善脾亢症状，又能保留脾脏的免疫功能，且保留的残脾没有加重肝纤维化。因此，临床开展脾次全切除术治疗肝硬化巨脾对病人是有益无害的。

1 Kerr JF，Wyllie AH，Currie AR.Apoptosis:a basic biological phenomenon with wide-ranging implication in tissue kinetics〔J〕.Br J Cancer，1972;26(4):239-57.

2 Yang E，Zha J，Jockel J，et al.Bad，a heterrodimeric partner for Bcl-xl and Bcl-2，displaces Bax and promotes cell death〔J〕.Cell，1995;80(2):285-9.

3 Maity P，Biswas K，Roy S，et al.Smoking and the pathogenesis of gastroduodenal ulcer-recent mechanistic update〔J〕.Mol Cell Biochem，2003;253(1-2):329-38.