厚朴不同提取工艺对小鼠镇痛作用的影响

张慧敏，任 虹，何 瑶，刘 芳

(1.成都中医药大学药学技术学院，四川成都 611137;2.成都中医药大学药学院中药材标准化教育部重点实验室中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川成都 611137)

厚朴不同提取工艺对小鼠镇痛作用的影响

张慧敏1，任 虹2，何 瑶2，刘 芳2

(1.成都中医药大学药学技术学院，四川成都 611137;2.成都中医药大学药学院中药材标准化教育部重点实验室中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川成都 611137)

为探讨厚朴60%，70%，95%乙醇热回流提取工艺对小鼠镇痛作用的影响，采用小鼠甩尾实验和热板实验测定厚朴提取液的镇痛作用.实验结果显示，厚朴提取物组1，2，3号均能延长小鼠的甩尾痛域和热板痛域(P＜0.05或P＜0.01)，其中60%乙醇热回流提取组有强于70%乙醇热回流提取组和95%乙醇热回流提取组的趋势，3种厚朴提取物对小鼠有明显的镇痛作用，60%乙醇热回流提取组较优.

厚朴;提取工艺;甩尾实验;热板实验

0 引言

藿香正气制剂具有解表化湿、理气和中的功效，常用于外感风寒、内伤湿滞或夏伤暑湿所致的感冒，症见头痛昏重、胸膈脾闷、脘腹胀痛、呕吐泄泻，胃肠型感冒见上述证侯者［1-2］.厚朴作为该方臣药，功善行气燥湿，降逆平喘，其功效主治基本符合人们利用藿香正气系列制剂治疗中暑、感冒和胃肠道不适等病症.据中国食品药品监督管理局最新数据显示，目前共有703种获得了国药准字的藿香正气制剂，是全国具有最多生产厂家生产且生产量最大的中成药之一［3］.通过对相关文献所收载藿香正气制剂标准与文献的查阅发现，目前厚朴提取工艺主要采用60%、70%、95%乙醇进行热回流.此外，还有学者研究利用超临界CO2萃取、超声法提取厚朴的工艺方法［3-6］.同时，厚朴质量标准中又多是以厚朴酚为主要指标.这种制备工艺不统一与质控指标单一的矛盾，难以充分体现藿香正气制剂的工艺设计与质量控制的合理性和科学性.据此，本研究选用藿香正气方中厚朴为模型药物，就其不同提取工艺对小鼠镇痛作用的影响进行了研究，以期结合药效作用优选出厚朴在镇痛作用方面效果显著的提取工艺.

1 仪器与材料

1.1 仪器和试剂

实验所用的仪器包括:R501B旋转蒸发仪(上海申顺生物科技有限公司)，HH-4数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)，RB-200智能热板仪(成都泰盟科技有限公司).

实验所用的试剂包括:吲哚美辛肠溶片(25 mg/片)，重庆科瑞制药有限责任公司，厚朴饮片(批号，120612)，四川科伦天然药液有限公司.

1.2 实验动物

实验用昆明种小鼠，由成都达硕生物科技有限公司(实验动物生产许可证编号，SCXK(川)2008-24)提供.

1.3 实验药液的制备

1)60%乙醇热回流工艺样品制备.取厚朴40 g，用60%乙醇200 mL，加热回流3次，每次1 h，合并提取液，滤过，减压回收乙醇后，调整体积为1 000 mL.

2)70%乙醇热回流工艺样品制备.取厚朴40 g，用70%乙醇200 mL，加热回流3次，每次1 h，合并提取液，滤过，减压回收乙醇后，调整体积为1 000 mL.

3)95%乙醇热回流工艺样品制备.取厚朴80 g，用95%乙醇200 mL，加热回流3次，每次1 h，合并提取液，滤过，减压回收乙醇后，调整体积为1 000 mL.

4)将吲哚美辛肠溶片配成2.5 mg/mL的水溶液.

2 实验方法

甩尾反应和舔足反应为脊髓反射，是防御性的反射，主要在脊髓水平进行整合［7-11］.因此，本研究选取小鼠甩尾潜伏期和小鼠热板舔足反应潜伏期作为研究厚朴镇痛的主要指标，以考察厚朴不同提取工艺的镇痛作用.

2.1 小鼠甩尾实验

选取体重18～22 g清洁级昆明种小鼠40只，雌雄各半.适应数天后，随机分为4组:阳性对照组(吲哚美辛肠溶片组)，厚朴药物组1号(60%乙醇热回流提取组)，2号(70%乙醇热回流提取组)，3号(95%乙醇热回流提取组).

在甩尾实验时，将小鼠用容器固定，使其尾下部1/3垂直浸入48℃恒温水浴锅中，以其尾部进入水面到回缩出水面的时间记为甩尾潜伏期(TFL).为防止小鼠烫伤，浸水截止时间为15 s，TFL超过15 s者，痛阈记为15 s.给药前测痛阈2次，间隔5 min，取平均值记为基础痛阈.然后将厚朴药物组1号灌胃给予60%乙醇热回流厚朴提取物(0.1 mL/只)，厚朴药物组2号灌胃给予70%乙醇热回流厚朴提取物(0.1 mL/只)，厚朴药物组3号灌胃给予95%乙醇热回流厚朴提取物(0.1 mL/只)，阳性对照组灌胃给予吲哚美辛肠溶片水溶液(0.1 mL/只)，分别测定各组小鼠在灌胃后0.5、1、2、3 h后的甩尾痛阈.

2.2 热板实验

首先取雌雄各半小鼠，置于55.0±0.5℃热板上，开始计时，直至小鼠舔后足或跳出时停止计时，这段时间为该小鼠的潜伏期.给药前先测定小鼠的基础潜伏期，潜伏期大于30 s则淘汰，以此筛选出合格小鼠40只，分组及给药方法同“2.1"项.筛选完24 h后开始给药，在末次给药0.5、1、2 h后再次测定小鼠的舔足时间，超过40 s不舔足者按40 s计.测定用药前后各组舔足时间，并将其作为疼痛反应指标.

3 实验结果

3.1 不同提取工艺提取物对小鼠甩尾潜伏期影响

厚朴不同提取工艺提取物对小鼠热水甩尾潜伏期的影响如表1所示.

表1 厚朴不同提取工艺提取物对小鼠热水甩尾潜伏期的影响( ± s，n=10)

表1 厚朴不同提取工艺提取物对小鼠热水甩尾潜伏期的影响( ± s，n=10)

注:与基础痛域比较*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＞0.05.

给药后痛域/s分组 基础痛域/s 0.5 h 1 h 2 h 3 h阳性对照组 4.3±2.1 6.2±1.9＊＊5.9±1.7＊＊5.7±1.2＊＊ 4.6±2.3*厚朴药物组1 4.3±1.9 6.6±2.1＊＊6.3±1.4＊＊ 4.9±0.9* 4.5±1.1＊＊＊厚朴药物组2 4.4±1.1 6.1±0.9＊＊5.8±1.1＊＊ 4.7±1.2* 4.6±1.3＊＊＊厚朴药物组3 4.5±2.5 5.9±1.3＊＊5.5±0.4＊＊ 4.7±1.0* 4.5±1.9＊＊＊

3.2 不同提取工艺提取物对小鼠热板舔足反应潜伏期影响

厚朴不同提取工艺提取物对小鼠热板舔足反应潜伏期的影响如表2所示.

表2 厚朴不同提取工艺提取物对小鼠热板舔足反应潜伏期的影响(±s，n=10)

表2 厚朴不同提取工艺提取物对小鼠热板舔足反应潜伏期的影响(±s，n=10)

注:与基础痛域比较*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＞0.05.

给药后痛域/s分组 基础痛域/s 0.5 h 1 h 2 h阳性对照组 19.1±5.1 24.1±3.3＊＊23.4±5.8＊＊ 22.2±3.5*厚朴药物组1 21.3±6.7 25.7±6.3＊＊ 23.3±4.4* 22.6±5.3＊＊＊厚朴药物组2 18.9±4.4 22.4±2.9＊＊ 21.4±4.5* 19.7±4.1＊＊＊厚朴药物组3 19.7±4.5 22.2±4.8＊＊ 21.5±3.6* 20.7±2.9＊＊＊

4 结论与讨论

《神农本草经》记载，厚朴“主中风伤寒，头痛，寒热，惊悸，气血痹，死肌，去三虫".现代药理研究也表明厚朴有镇痛作用，此与藿香正气制剂用于头痛昏重、脘腹胀痛等症状的功效相符合.

实验结果显示，与基础痛域相比厚朴3种提取工艺的提取物均可显著延长小鼠的甩尾痛域和热板痛域(P＜0.01)，表明厚朴提取物对小鼠有明显、有效的镇痛作用.在延长小鼠的甩尾痛域方面，厚朴的3种提取物组小鼠在0.5 h和1 h时痛域与其基础痛域相比存在显著性差异(P＜0.01)，在2 h时痛域与其基础痛域相比存在差异(P＜0.05)，在3 h时痛域与其基础痛域相比无显著性差异(P＞0.05).在延长热板舔足痛域方面，厚朴的3种提取物组小鼠在0.5 h时痛域与其基础痛域相比存在显著性差异(P＜0.01)，在1 h时痛域与其基础痛域相比存在差异(P＜0.05)，在2 h时痛域与其基础痛域相比无显著性差异(P＞0.05)，其中厚朴药物组1号(60%乙醇热回流提取组)呈现出优于其余2组的趋势.

中药制剂疗效的好坏，其提取工艺是极为重要的影响因素之一.从厚朴不同提取工艺对小鼠甩尾痛域和热板痛域的影响实验结果可以看出，60%乙醇热回流提取组优于70%乙醇热回流提取组和95%乙醇热回流提取组.因此，本研究下一步拟采用HPLC、LC-MS等技术对3种不同提取工艺制备的提取液进行化学成分的分析，同时结合厚朴中的有效成分含量、其他药效学指标、生产成本等因素，进一步筛选出制备工艺合理、质量稳定可控且临床疗效显著的最佳提取工艺技术线路.

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Effects of Magnolia Officinalis with Different Extraction Techniques on Analgesia Function in Mice

ZHANG Huimin1，REN Hong2，HE Yao2，LIU Fang2
(1.Medical Technology College，Chengdu University of Traditional Chinese Medicince，Chengdu 611137，China;2.Pharmacy College，The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine，State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research，Development and Utilization of Chinese Medicine Resources，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 611137，China)

This paper studies the effects of Magnolia Officinalis with 60% ，70% ，95%ethanol thermal circumfluence extraction techniques on analgesic function in mice.Analgesia function of Magnolia Officinalis extract is studied by using mice tail-flick test and hot-plate test.The experimental results show that，Magnolia Officinalis group No.1，No.2 and No.3 all can prolong the tail-flick and hotplate pain threshold of mice(P＜0.05 or P＜0.01)，and the 60%ethanol thermal circumfluence extraction group is better than the 70%ethanol thermal circumfluence extraction group and 95%ethanol thermal circumfluence extraction group.Magnolia Officinalis with three kinds of extracting techniques all have significant analgesic effects on mice，and the 60%ethanol thermal circumfluence extraction group is proved to be optimal.

Magnolia Officinalis;extraction technique;tail-flick test;hot-plate test

R917

A

1004-5422(2013)03-0235-03

2013-06-23.

张慧敏(1988—)，女，硕士，从事中药新制剂与新剂型研究.