两种细胞学涂片检测并免疫组化技术联合在肺腺癌胸腔转移诊断中的应用价值

李军红

肺腺癌患者晚期常伴有胸腔转移, 产生大量胸腔积液,结核、炎症等病变也可导致产生大量胸腔积液。胸腔积液的性质确定尤为重要。传统的方法是靠胸腔积液离心后的沉淀物涂片, 光镜观察细胞形态来诊断。由于受到涂片质量的限制加上诊断过于主观, 使一部分病例难以获得明确诊断。本文重点探讨传统细胞学涂片、液基细胞学检测并免疫组化技术联合应用在胸腔积液中的应用, 尤其是对胸腔积液中脱落的肺腺癌细胞的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取郑州大学附属洛阳市中心医院病理科2010年1月至2012年3月临床送检的胸腔积液375例, 从中再选取查见异型增生细胞103例, 行免疫组化CEA、CK、TTF-1、CR、Desimin、Vimentin、P53、NapsinA 染色 , 筛出符合肺腺癌32例。

1.2 仪器及耗材 Thinprep 2000 System、Baiyang Centrifuge Factory、IKA Vibrax VXR basic 震荡仪、新柏氏 TCT 专用玻片、Cytolyt 清洗液、PreservCyt保存液。

1.3 方法 用吸管吸取经自然沉淀的胸腔积液标本的底层液体 50ml置入离心管中 ；2500 r/min 离心 8～10 min, 弃去上清液；加入20ml的Cytolyt 清洗液, 将盛有标本的离心管在 IKA Vibrax VXR basic震荡仪上震荡 10 min ；重复 2500r/min离心8～10 min, 弃去上清液；吸取PreservCyt保存液冲洗离心管中的标本, 使之转移至含有PreservCyt保存液的新柏氏专用标本瓶内；静置15 min后用Thinprep 2000 System按说明自动完成制片；95%乙醇固定, HE染色, 在OLYMPUS BX51光学显微镜下两名诊断医师阅片查见异型增生细胞者再重新制片行免疫组化染色进一步诊断。

1.4 免疫组化试剂及方法 查见异型增生细胞得标本用Thinprep 2000 System 根据需要再进行制片8张, 免疫组化采用 EliVision 法 , 一 抗 CEA、、TTF-1、NapsinA.、CK 、CR、Desimin、Vimentin、P53及二抗均购自福州迈新生物技术开发有限公司(第一抗体见表1), 严格按照试剂盒说明书进行染色, 设阴性及阳性对照。

表1 抗体来源和浓度及表达部位

2 结果

2.1 HE染色镜检 375例新柏氏液基细胞学涂片背景清晰,涂片均匀, 筛出异型增生细胞103例, 阅片时发现细胞大小不一、细胞核染色质不匀、颗粒较粗、核大小为正常淋巴细胞的2倍及以上、可见小核仁、单核或多核、核浆比升高、细胞聚集成花环状等指标均视为异型增生细胞。

2.2 免疫组化结果 103例异型增生细胞标本每例均重新 制 片 8张 , 分 别 行 CEA、CK、TTF-1、CR、Desimin、 Vimentin、P53、NapsinA染色, 结果见表2。

表2 103例异型增生细胞免疫组化结果(n)

3 讨论

胸腔积液或渗出液是脱落细胞学主要组成部分之一, 是常见的临床体征, 细胞学检查主要用于确定有无恶性肿瘤细胞, 可伴或不伴有已知原发灶。探寻胸腔积液的性质不仅有利于明确诊断及分期, 而且在指导治疗、分析预后等方面也非常重要。

早期的脱落细胞学检查一般采用传统的普通涂片法, 但传统厚薄不均匀, 大多数细胞会堆积在一起, 且涂片面积大,观察时间长, 易产生疲劳、粗心、漏诊, 且送检材料无法较长时间保管, 发现疑似肿瘤细胞也无法用原送检材料进一步检查。本组375例胸腔积液行传统涂片查见异型增生细胞87例。近年来, 新柏氏液基细胞学检测(TCT)技术在细胞学领域得到较广泛的应用并取得了良好的效果, 其优缺点及应用前景尚在探索阶段［1］。新柏氏TCT制片的标本经仪器正负压交替对细胞进行全面收集, 使标本的质量大大提高, 特制的玻片有很好的黏附性, 使细胞分布均匀、平铺, 不易掉片, 且背景清晰,减少了红细胞和粘液的影响, 细胞核结构更清晰, 更有意义的是收集到的细胞成分可以保存在含有PreservCyt保存液的新柏氏专用标本瓶内, 涂片发现异型增生细胞后可以重复制片进行免疫组化标记, 进一步明确诊断。但缺点是：肿瘤特有的背景也会破坏, 且其制片工序较复杂。本组行液基细胞学检测查见异型增生细胞79例。两种方法各有优缺点, 但单纯就提高肺腺癌在胸腔积液的检出率而言, 两种方法同时制片可以提高恶性细胞的阳性诊断率［2］。本组两者联合检出异型增生细胞103例, 说明两种方法可互为补充。

单纯的细胞形态学因其敏感性低、经验性强, 经常会遇到一些诊断困难的病例, 难以满足临床需要, 最大的鉴别诊断困难在间皮细胞、组织细胞与癌细胞之间。近代研究证实,免疫细胞化学已成为最常使用的特殊诊断手段［3］。由于肺腺癌细胞和间皮细胞表达的抗体常交叉存在, 只用一种或两种抗体通常不能满足诊断, 有抗体选择组合的报道［4］, 但尚无统一的标准。笔者选用的组合是CEA、TTF-1、NapsinA.、CK 、CR、Desimin、Vimentin、P53。以上多种抗体的联合使用并结合细胞形态学改变, 可显著提高肺腺癌的检出率,并有免疫组化的客观证据, 为一些晚期肿瘤患者提供有效地治疗依据, 也可为以胸腔积液为首发症状患者提供诊断思路。

［1］ 杜芸, 刘鹿宁, 王珩, 等.液基细胞学在非妇科领域的应用分析 .临床与实验病理学杂志 , 2008,24(4)：495-496.

［2］ 王莉莉, 续薇.肿瘤细胞学诊断浆膜腔积液病变性质的临床应用价值 .中国实验诊断学 , 2012, 16(5)：910-911.

［3］ 宋东明, 朱安峰.免疫细胞化学染色技术在胸水、腹水诊断中的应用 .吉林医学 , 2012,33(28)：6082-6084.

［4］ 龚建华,何丽,周茂林.细胞块技术在肺腺癌胸腔转移诊断中的应用价值.中国医师进修杂志,2012,35(4)：41-43.